专利名称：小榕离体快速繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养方法，特别是一种用固体培养以提高小榕繁殖速度的方法。
我国随着改革开放，经济迅速发展，人们的生活水平提高，在北京、上海、广州和深圳等地已时兴观赏水草热，在玻璃水箱中种植各种形态优美的水草，配上色彩斑斓的热带鱼游弋其中，把室内环境布置得更加清新幽雅、富丽堂皇。
小榕(Anubias barteri nana)是属于水榕类的观赏性小型水草，原产西非，株高最多只有10cm，叶片呈深绿色，卵形。水榕是非洲热带水域的特色水草，用水榕类水草来造景，能反映出热带水域的景观。小榕是水榕的一种，我国目前的需求主要是由台湾、日本和新加坡等地引进，常规繁殖方式主要是以根茎长出的侧枝繁殖，繁殖系数低，且受环境和季节制约，不能满足市场需求。采用植物组织培养方法繁殖小榕是获得大量优质商品苗的方法之一，目前在国内还未见到有关小榕离体快速繁殖方法的报道。
本发明的目的就是提供一种操作简便、繁殖速度快的小榕离体繁殖的方法。
本发明可以由以下方式来实现以小榕的腋芽作外植体，诱导产生丛生芽，将其切成单芽，接种在固体培养基中作继代培养，获得大量的丛生芽，将幼芽转入生根培养基中诱导生根，得到大量健壮的完整植株并出瓶移栽。首先，诱导小榕潜伏芽萌发作外植体，将切去顶芽的成品苗半浸泡状放置于以MS基本培养基为基础，由配制1L培养基大量元素用量是原来MS的1/10～1/5、微量元素和铁盐用量是原来MS用量的1/5～1/2和含0.1～0.5mg/L6-BA组成的营养液中，20天后，几乎每个叶腋下的潜伏芽均长成幼芽，将芽切下按常规消毒方式处理后，获得无菌材料作外植体；其次，外植体接种在MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L(以下单位相同，省略)、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基上作初始培养，诱导产生丛生芽；再者，将丛生芽切成单芽，接种在1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基中作继代培养，培养温度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，产生大量丛生芽和生根植株；第四，将幼芽转入MS+IAA0.4、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基上诱导生根，培养温度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培养时间为20天；最后，将植株种植在以细砂作基质并加有淹没砂面的净水的盆中作过渡培养，1个月后可种植在淤泥中作进一步培养。1/3MS是指配制1L培养基以MS基本培养基为基础，大量元素用量是原来MS用量的1/3，微量元素、铁盐和有机物(肌醇用量不变)用量是原来MS用量的1/2。
本发明通过固体培养方法，既提高了幼芽繁殖系数，缩短了培养时间，又保证了植株的质量，为加快小榕优质苗繁殖速度提供了新的途径。
下面结合实施例，对本发明作进一步的说明。
实施例一1、诱导小榕潜伏芽的萌发作外植体本发明采用小榕的腋芽作外植体。由于自然条件下其腋芽呈休眠状，因此，本发明中将切去顶芽的成品苗半浸泡状放置于以MS基本培养基为基础，由配制1L培养基大量元素用量是原来MS的1/6、微量元素和铁盐用量是原来MS用量的1/2和含0.3mg/L6-BA组成的营养液中，20天后，几乎每个叶腋下的潜伏芽均长成约0.2cm高、具有1～2片叶的芽。将腋芽切下，首先用加有少量洗衣粉的自来水冲洗5min，再用清水冲洗干净，然后在无菌条件下，用75％酒精消毒15s，0.1％升汞浸泡8min，最后用无菌水冲洗4～5次，获得无菌材料作外植体。
2、初始培养将获得的腋芽外植体接种在MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基上，培养温度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培养40天后，腋芽基部产生了愈伤组织块，上面还长有幼芽，诱导率达80％左右。
3、继代培养将丛生芽切成单芽，接种在1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA40.2mg/L、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基上，培养温度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培养周期为60天，其结果见表一。1/3MS是指配制1L培养基，以MS基本培养基为基础，大量元素用量是原来MS用量的1/3，微量元素、铁盐和有机物(肌醇用量不变)用量是原来MS用量的1/2。表一
繁殖系数=出芽数/接种数4、生根培养将高1.0cm具有2片叶的芽转入MS+IAA0.4mg/L、琼脂0.75％、白糖2％、PH5.8的培养基中诱导生根，其结果见表二。表二
生根率=生根数/接种数×100％5、出瓶移栽幼苗出瓶移栽前炼苗3天，取出后洗净根部培养基，然后种植在以细砂作基质并加有淹没砂面的净水的盆中，在常温阴凉条件下作过渡培养，1个月后成活率达90％以上，可种植在淤泥中作进一步培养。
从以上试验结果表明，采用固体培养基1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L繁殖小榕幼苗，培养周期为60天，繁殖系数是4.04，若作连续培养，1年可培养6代，则由1个芽可产生新芽4348个；而采用传统分枝繁殖方法，1年只能繁殖10株左右。与传统方法相比较，本发明采用固体培养方法，大大提高了小榕繁殖速度，且能在短时间内获得成批优质苗。
权利要求
1.一种小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于以小榕的腋芽为外植体，诱导产生丛生芽，将其切成单芽，接种在固体培养基中作继代培养，获得大量的丛生芽，将幼芽转入生根培养基中诱导生根，得到大量健壮的完整植株并出瓶移栽。
2.根据权利要求1所述的小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于诱导小榕潜伏芽萌发作外植体，将切去顶芽的小榕成品苗半浸泡状放置于以MS基本培养基为基础，配制1L培养基大量元素用量是原来MS用量的1/10～1/5，微量元素和铁盐用量是原来MS用量的1/5～1/2和含0.1～0.5mg/L6-BA组成的营养液中，20天后，几乎每个叶腋下的潜伏芽均长成幼芽，将芽切下按常规消毒方式处理后，获得无菌材料作外植体。
3.根据权利要求1所述的小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于外植体在MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基上作初始培养，诱导产生丛生芽，培养温度23～27℃，光照12h·d-1，光照度1500Lux。
4.根据权利要求1所述的小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于将丛生芽切成单芽，接种在1/3MS+6-BA2.0mg/L+IAA0.2mg/L、琼脂0.75％、白糖3％、PH5.8的培养基上作继代培养，培养温度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培养60天后，产生大量的丛生芽。
5.根据权利要求1所述的小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于通过固体培养获得的幼芽，转入MS+IAA0.4mg/L、琼脂0.75％、白糖2％、PH5.8的培养基上诱导生根，培养温度23～27℃，光照12hd-1，光照度1500Lux，培养时间为20天，得到完整植株。
6.根据权利要求1所述的小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于将植株种植在以细砂作基质并加有淹没砂面的净水的盆中作过渡培养，1个月后可种植在淤泥中作进一步培养。
7.根据权利要求4所述的小榕离体快速繁殖的方法，其特征在于1/3MS是指配制1L培养基以MS基本培养基为基础，大量元素用量是原来MS用量的1/3，微量元素、铁盐和有机物(肌醇用量不变)用量是原来MS用量的1/2。
全文摘要
本发明公开了一种小榕离体快速繁殖的方法,其技术要点是以小榕的腋芽作外植体,诱导产生丛生芽,将其切成单芽,接种在固体培养基中作继代培养,获得大量的丛生芽,将幼芽转入生根培养基中诱导生根,得到大量健壮的完整植株并出瓶移栽。本发明通过固体培养方法,既提高了幼芽繁殖系数,缩短了培养时间,又保证了植株的质量,为加快小榕优质苗繁殖速度提供了新的途径。
文档编号A01H4/00GK1319327SQ0110761
公开日2001年10月31日 申请日期2001年2月27日 优先权日2001年2月27日
发明者饶秋容, 古志渊, 侯嵩生 申请人:梅县梅雁生物工程研究所