专利名称：抗植物病毒农用嘧肽霉素及其制备工艺的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物发酵工程技术领域，特别涉及一种抗植物病毒农用抗生素及其制备工艺领域。
农用抗生素作为一类生物农药，因其具有低毒、高效、选择性强、残留时间短、无三致和公害等特点，正日益受到世界各国的重视。但是，农用抗生素在植物病毒病害防治领域却是一个薄弱环节。20世纪70年代，日本报道了香菇菌发酵液Rentemin有抗病毒活性。国外关于放线菌次生代谢产物抗抑制植物病毒的报道也有许多，如月桂霉素、丝裂霉素、阿博霉素、桔霉素及诺卡霉素等，但均未达到农药使用阶段。我国研究人员从天然和合成两方面开展了抗植物病毒药剂的研制工作。90年代初，我国开发了食用菌蛋白多糖，1997年一种新的农用抗生素宁南霉素被报道，主要用于防治植物真菌病害，也对烟草花叶病毒有抑制作用，并获得了临时登记。但是，纵观现有的抗病毒生物农药其实际应用效果还不理想，远不能满足生产所需。
本发明所要解决的技术方案可依如下方式实现本发明抗植物病毒农用嘧肽霉素，其化学结构式为 上述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于按如下步骤依次进行(A)菌种扩繁过程；采用小白链霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及种子罐中加入下列基础培养成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生饼粉3.0淀粉1.0酵母粉 0.05NaCl1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余为水培养条件采用三角瓶培养结合种子罐培养30小时～60小时；其温度控制在25℃～35℃，PH值7.0～7.4，压强控制在0.05～0.2Mpa，灭菌20分钟～40分钟备用；(B)发酵抗生素生成过程；将A步骤形成的培养液送入发酵罐进行发酵；在发酵罐内加入下列培养基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生饼粉 3.0酵母粉 0.2硫酸铵 0.4硫酸钙 0.4碳酸钙 0.4氯化钠 0.3
其余为水；在上述物料放入发酵罐后，消毒前调整PH值使其控制在6.0～7.0，压强控制在0.1～0.12Mpa，空气流量1(0.2～1.0)；培养时间为50小时～70小时；(C)发酵后处理；按以下步骤依次进行1)放罐前，预先用蒸汽对送料管路进行消毒；2)通过加热装置对送料管路中的发酵液进行加热使其温度达到100℃；3)用空气压缩机将送料管路中的发酵液压入板框过滤机，过滤得清液，用浓度为6N的HCl或草酸调整清液的PH值使其控制在4.0～5.0；4)将最终得到的清液抽入到浓缩罐中，在700mmHg真空度，蒸汽压0.02～0.06Mpa，温度在70℃～80℃条件下进行减压浓缩，使浓缩液效价控制在15000单位/ml以上；5)加入稳定剂，助剂，抽样测定生物效价后，得成品。
本发明的上罐接种量7.5％～15％(V/V)，液体种子的种龄30～40小时。
本发明在发酵罐中可加硅酮消泡剂0.5～0.8/万(V/V)。
本发明在发酵后处理时，发酵液加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸钠或0.5～1.5％(重量百分含量)的尼泊金稳定剂；及Toween80助剂。
本发明具有如下优点；(A)具有稳定的原料来源，且成本低，适合大规模工业化生产。如发酵配方中所采用的原料主要有玉米粉、花生饼粉、酵母粉、葡萄糖等。
(B)产品质量稳定。在保证原料稳定的同时，可以通过严格控制各项发酵参数，来控制成品的质量，从而形成科学完整的质量体系，该产品对光、热、酸等稳定，浓缩液在常温下保存2年不失效。
(C)本产品低毒，对人、畜无毒害，对作物无药害，不刺激皮肤、眼等，耐雨水冲刷。
(D)预防植物病毒病效果明显。据辽宁省几个市、县及北京、吉林、黑龙江等地蔬菜、烟草、玉米等作物大田试验，嘧肽霉素对辣椒花叶病、番茄蕨叶病、烟草花叶病、玉米矮花叶病平均预防效果达85.4％以上，明显高于对照药剂病毒A和植病灵。
(E)治疗植物病毒病效果更为突出。据辽宁省5846亩辣椒、番茄大田试验，在辣椒花叶病、番茄蕨叶病发生以后，喷施嘧肽霉素，平均防治效果达72.8％以上，显著优于对照药剂病毒A和植病灵。
花生饼粉 3.0酵母粉0.2硫酸铵0.4硫酸钙0.4碳酸钙0.4氯化钠0.3其余为水；在上述物料放入发酵罐后，消毒前调整PH值使其控制在6.0，压强控制在0.1Mpa，空气流量1∶0.2；培养时间为50小时；(C)发酵后处理；按以下步骤依次进行1)放罐前，预先用蒸汽对送料管路进行消毒；2)通过加热装置对送料管路中的发酵液进行加热使其温度达到100℃；3)用空气压缩机将送料管路中的发酵液压入板框过滤机，过滤得清液，用浓度为6N的HCl调整清液的PH值使其控制在4.0；4)将最终得到的清液抽入到浓缩罐中，在700mmHg真空度，蒸汽压0.02Mpa，温度在70℃条件下进行减压浓缩，使浓缩液效价控制在15000单位/ml以上；5)在发酵液中加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸钠或0.5％(重量百分含量)的尼泊金稳定剂及Toween80助剂，抽样测定生物效价后，得成品。
本发明在发酵过程中上罐接种量7.5％(V/V)，液体种子的种龄30小时，发酵罐中加硅酮消泡剂0.5/万(V/V)。
(A)菌种扩繁过程；采用小白链霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及种子罐中加入下列基础培养成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生饼粉 3.0淀粉 1.0酵母粉 0.05NaCl 1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余为水培养条件采用三角瓶培养结合种子罐培养60小时；其温度控制在35℃，PH值7.4，压强控制在0.2Mpa，灭菌40分钟备用；(B)发酵抗生素生成过程；将A步骤形成的培养液送入发酵罐进行发酵；在发酵罐内加入下列培养基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生饼粉 3.0酵母粉 0.2硫酸铵 0.4硫酸钙 0.4碳酸钙 0.4氯化钠 0.3其余为水；在上述物料放入发酵罐后，消毒前调整PH值使其控制在7.0，压强控制在0.12Mpa，空气流量1∶1.0；培养时间为50小时；(C)发酵后处理；按以下步骤依次进行1)放罐前，预先用蒸汽对送料管路进行消毒；2)通过加热装置对送料管路中的发酵液进行加热使其温度达到100℃；
3)用空气压缩机将送料管路中的发酵液压入板框过滤机，过滤得清液，用草酸调整清液的PH值使其控制在5.0；4)将最终得到的清液抽入到浓缩罐中，在700mmHg真空度，蒸汽压0.06Mpa，温度在80℃条件下进行减压浓缩，使浓缩液效价控制在15000单位/ml以上；5)在发酵液中加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸钠或1.5％(重量百分含量)的尼泊金稳定剂及Toween80助剂，抽样测定生物效价后，得成品。
本发明上罐接种量15％(V/V)，液体种子的种龄40小时。在发酵罐中加硅酮消泡剂0.8/万(V/V)。
实施例3本发明抗植物病毒农用嘧肽霉素，其化学结构式为 其分子式为C19H29N7O10其分子量为515；上述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于按如下步骤依次进行(A)菌种扩繁过程；采用小白链霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及种子罐中加入下列基础培养成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生饼粉3.0淀粉1.0酵母粉 0.05NaCl1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余为水培养条件采用三角瓶培养结合种子罐培养40小时；其温度控制在30℃，PH值7.2，压强控制在0.1Mpa，灭菌30分钟备用；(B)发酵抗生素生成过程；
将A步骤形成的培养液送入发酵罐进行发酵；在发酵罐内加入下列培养基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生饼粉 3.0酵母粉 0.2硫酸铵 0.4硫酸钙 0.4碳酸钙 0.4氯化钠 0.3其余为水；在上述物料放入发酵罐后，消毒前调整PH值使其控制在6.5，压强控制在0.11Mpa，空气流量1∶0.25；培养时间为60小时；(C)发酵后处理；按以下步骤依次进行；1)放罐前，预先用蒸汽对送料管路进行消毒；2)通过加热装置对送料管路中的发酵液进行加热使其温度达到100℃；3)用空气压缩机将送料管路中的发酵液压入板框过滤机，过滤得清液，用浓度为6N的HCl调整清液的PH值使其控制在4.5；4)将最终得到的清液抽入到浓缩罐中，在700mmHg真空度，蒸汽压0.04Mpa，温度在75℃条件下进行减压浓缩，使浓缩液效价控制在15000单位/ml以上；5)在发酵液中加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸钠或0.9％(重量百分含量)的尼泊金稳定剂及Toween80助剂，抽样测定生物效价后，得成品。
本发明上罐接种量10％(V/V)，液体种子的种龄35小时。在发酵罐中加硅酮消泡剂0.6/万(V/V)。
权利要求
1.一种抗植物病毒农用嘧肽霉素，其化学结构式为
2.一种制备如权利要求1所述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于按如下步骤依次进行(A)菌种扩繁过程；采用小白链霉菌(Streptomyces albulus tz92)，在三角瓶及种子罐中加入下列基础培养成分(重量百分含量)玉米粉 2.0花生饼粉3.0淀粉1.0酵母粉 0.05NaCl 1.5(NH4)2SO40.02MgSO4·7H2O 0.002K2HPO40.0025；其余为水培养条件采用三角瓶培养结合种子罐培养30小时～60小时；其温度控制在25℃～35℃，PH值7.0～7.4，压强控制在0.05～0.2Mpa，灭菌20分钟～40分钟备用；(B)发酵抗生素生成过程；将A步骤形成的培养液送入发酵罐进行发酵；在发酵罐内加入下列培养基(重量百分含量)玉米粉 2.0淀粉 1.0葡萄糖 2.0花生饼粉3.0酵母粉 0.2硫酸铵 0.4硫酸钙 0.4碳酸钙 0.4氯化钠 0.3其余为水；在上述物料放入发酵罐后，消毒前调整PH值使其控制在6.0～7.0，压强控制在0.1～0.12Mpa，空气流量1(0.2～1.0)；培养时间为50小时～70小时；(C)发酵后处理；按以下步骤依次进行1)放罐前，预先用蒸汽对送料管路进行消毒；2)通过加热装置对送料管路中的发酵液进行加热使其温度达到100℃；3)用空气压缩机将送料管路中的发酵液压入板框过滤机，过滤得清液，用浓度为6N的HC或草酸调整清液的PH值使其控制在4.0～5.0；4)将最终得到的清液抽入到浓缩罐中，在700mmHg真空度，蒸汽压0.02～0.06Mpa，温度在70℃～80℃条件下进行减压浓缩，使浓缩液效价控制在15000单位/ml以上；5)加入稳定剂，助剂，抽样测定生物效价后，得成品。
3.根据权利要求2所述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于上罐接种量7.5％～15％(V/V)，液体种子的种龄30～40小时。
4.根据权利要求2或3所述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于发酵罐中加硅酮消泡剂0.5～0.8/万(V/V)。
5.根据权利要求2或3所述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于发酵后处理时，发酵液加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸钠或0.5～1.5％(重量百分含量)的尼泊金稳定剂；及Toween80助剂。
6.根据权利要求4所述抗植物病毒农用嘧肽霉素的制备工艺，其特征在于发酵后处理时，发酵液加入0.8％(重量百分含量)苯甲酸钠或0.5～1.5％(重量百分含量)的尼泊金稳定剂及Toween80助剂。
全文摘要
本发明属于微生物发酵工程技术领域，特别涉及一种抗植物病毒农用抗生素及其制备工艺领域，其化学结构式为其制备工艺按如下步骤依次进行(A)菌种扩繁；采用三角瓶培养结合种子罐培养30小时～60小时；温度控制在25C～35℃，pH值7.0～7.4，压强在0.05～0.2Mpa，灭菌20分钟～40分钟备用；(B)发酵抗生素生成；(C)发酵后处理。
文档编号A01N43/90GK1428429SQ01138949
公开日2003年7月9日 申请日期2001年12月28日 优先权日2001年12月28日
发明者贝纳新, 吴元华, 杜春梅, 刘秋 申请人:吴元华