专利名称：香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及菌种发酵培养方法，特别是香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基。
本发明的另一目的是提供一种在香菇液体菌种培养过程中用于母种繁殖的专用母种培养基，该母种培养基能促使菌丝生长旺盛、生长时间短、菌丝强壮，菌丝质量高。
本发明的第三个目的是提供一种在香菇液体菌种培养过程中使用的木屑原种培养基，该培养基能提供生长旺盛、发菌均匀的菌丝片段。
本发明的第四个目的是提供一种在香菇液体菌种培养过程中使用的深层发酵培养基，该培养基能降低成本，利于产生高质量菌种。
本发明的技术方案为一种香菇液体菌种的培养方法包括如下步骤1、将母种在母种培养基内进行培养；2、将在母种培养基内培养长满试管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养，培养条件为温度22-27±1℃，暗培养12-20天，待菌丝长满；3、将木屑菌种充分打碎后，立即移种到液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；4、将一级摇瓶内生长5-7天的菌液移入盛有新鲜液体培养基的二级摇瓶中进行扩增；5、将二级摇瓶出来的菌液进行发酵处理即可得到成品香菇液体菌种。
上述木屑原种培养基为含有木屑的培养基。
上述木屑原种培养基为含有木屑、棉子壳和豆粉的培养基。
上述木屑原种培养基培养是在三角瓶内进行的。
上述木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为蔗糖0.5-1.5％，棉子壳70-75％，木屑5-10％，麦麸5-10％，豆粉2-6％，石膏粉(CaCO3)0.5-2.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.2-1.4混合而得，其PH值为5.5-6.5上述母种培养基为专用母种培养基，在原有的马铃薯培养基内加入了香菇废料浸出液，其PH值范围为5.5-6.5，其成分和重量百分比含量范围为马铃薯10-30％，香菇废料1-5％，葡萄糖1-3％，酵母膏0.02-2％，蛋白胨0.05-0.2％，KH2PO40.05-0.2％，MgSO4·7H2O0.01-0.07％，琼脂1-3％，水60-85％。母种培养基内的培养条件为温度20-27±1℃，黑暗培养，时间5-10天。
上述液体培养基为深层发酵培养基，其成分及其重量百分比含量范围为酵母膏0.1-0.5％，麦麸0.5-3％，玉米粉1-5％，淀粉1-5％，石膏粉(CaCO3)0.05-0.5％，KH2PO40.02-0.1％，MgSO4·7H2O0.01-0.2％，NaCl0.01-0.1％，维生素B10.0001-0.008％，琼脂0.05-0.9％，水86-96％。采用本深层发酵培养基在一、二级摇瓶内液体菌种的培养条件为温度25-27±1℃，振荡频率125-155转/分，培养时间3-5天，接种量和液体培养基装料系数根据所需的产物不同，分别是10-15％和100ml-150ml/500ml。采用本深层发酵培养基在发酵阶段的培养条件为温度25-29±1℃，通气压力0.04-0.08Mpa，搅拌速度120-160转/分，频率指示20.0-26.6。时间5-7天。
技术效果本发明的香菇液体菌种的培养方法，在通常的液体菌种发酵培养工艺中增加了木屑原种培养基的过渡培养过程，即上述方法中的步骤2在现有技术中是没有的，该步骤由于木屑本身具有细小的间隙，香菇菌丝在该培养基内培养一段时间后再在接种时被充分打碎，就可增加大量菌丝片段，在液体培养基内形成大量发菌点，这些发菌点在合适的培养基中，就可形成大量细小均匀的有效菌丝球。因而能培养出大小均匀适中的菌种且缩短培养时间，从附图
的对比图中可以看到，通过木屑原种培养基培养的菌种接种后形成大量细小的有效菌球，直径在0-2mm之间的有效菌球达90％以上，最具有活力。而直接通过母种培养基培养的菌种接种的菌球大小不一，大的菌球由于直径太大，已失去活力。
木屑原种培养基是一种加入了木屑、棉子壳、豆粉和石膏粉的培养基，木屑和棉子壳的细小间隙有利于菌丝生长，豆粉等其他营养成分的加入，可以使菌丝生长旺盛。
专用母种培养基由于是一种针对香菇液体菌种培养的专用培养基，因此在该培养基中加入了香菇废料培养物的浸出液，同时去掉了麸皮和降低了酵母膏的含量，由于在香菇废料中含有原来菌丝分解木屑多糖时所用的激素物质和含有被原菌丝分解、但没有被吸收完的多糖营养物质，故经专用母种培养基的培养，可以缩短培养时间，使菌丝生长旺盛，菌丝强壮。
深层发酵培养基与原有的液体培养基不同点，在于它不含有单糖成份(葡萄糖)，菌球生长所需的糖源来自多糖的玉米粉和淀粉，这两种物质的使用，不光降低了培养基的成本，也使菌丝生长在更接近自然的环境中，同时玉米粉和淀粉提供给菌丝生长所需的碳源。由于这种培养基在矿物质元素和琼脂含量方面进行了适当的变动，产生的产物就大不相同，所以可根据我们需要的发酵产物，来使用不同的培养基。
通过液体培养基的改变，还可培养大量的菌球，通过过滤器大量提取菌球，在40-60℃的温度条件下烘干，粉碎后获得香菇菌球干粉，同时也可以直接销售培养好的培养液。
以本发明方法为基础进一步生产香菇的工艺流程，可在同一套设备上的不同阶段产生不同的产物(如香菇菌种、菌球干粉、菌棒、香菇)，为充分利用这套设备提供了可行的依据。
实施例2实施例1中的液体培养基采用原有的香菇液体培养基，其成分和含量为100分液体培养基中含马铃薯20份，葡萄糖2份，(NH3)SO40.2份，KH2PO40.1份，MgSO4·7H2O0.05份，维生素B10.001份，琼脂0.05份，其余为水。本配方中不含有玉米粉和淀粉，而是含有马铃薯和葡萄糖(单糖)，因此相对实施例1成本较高。本实施例的其他步骤和条件同实施例1。
实施例3专用母种培养基的成分和含量还可以为100份专用母种培养基中马铃薯15份，香菇废料3份，葡萄糖1份，酵母膏0.02份，蛋白胨0.2份，KH2PO40.2份，MgSO4·7H2O0.07份，琼脂2份，其余为水。
实施例4专用母种培养基的成分和含量还可以为；100份专用母种培养基中马铃薯30份，香菇废料1.5份，葡萄糖1份，酵母膏0.2份，蛋白胨0.05份，KH2PO40.05份，MgSO4·7H2O0.01份，琼脂1份，其余为水。
实施例5专用母种培养基的成分和含量还可以为100份专用母种培养基中马铃薯22份，香菇废料2份，葡萄糖3份，酵母膏0.1份，蛋白胨0.15份，KH2PO40.1份，MgSO4·7H2O0.03份，琼脂3份，其余为水。
实施例6木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量还可以为蔗糖0.5％，棉子壳70％，木屑5％，麦麸10％，豆粉6％，石膏粉(CaCO3)2.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.3混合而得。
实施例7木屑原种培养基原料部分的成分和重量百分比含量还可以为蔗糖1.5％，棉子壳75％，木屑5％，麦麸5％，豆粉2％，石膏粉(CaCO3)0.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.4混合而得。
实施例8深层发酵培养基，其成分和重量百分比含量还可以为100分发酵罐培养基中酵母膏0.1份，麦麸0.5份，玉米粉5份，淀粉5份，石膏粉(CaCO3)0.5份，KH2PO40.1份，MgSO4·7H2O0.2份，NaCl0.1份，维生素B10.008份，琼脂0.9份，其余为水。
实施例9深层发酵培养基，其成分和重量百分比含量还可以为100份培养基中酵母膏0.5份，麦麸3份，玉米粉1份，淀粉1份，石膏粉(CaCO3)0.05份，KH2PO40.02份，MgSO4·7H2O0.01份，NaCl0.01份，维生素B10.0001份，琼脂0.05份，其余为水。
权利要求
1.一种香菇液体菌种的深层发酵培养方法其特征在于包括如下步骤(1)、将母种在母种培养基内进行培养；(2)、将在母种培养基内培养长满试管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养，培养条件为温度22-27±1℃，暗培养12-20天，待菌丝长满；(2)将木屑菌种充分打碎后立即移种到液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；(4)、将一级摇瓶内生长5-7天的菌液移入盛有液体培养基的二级摇瓶中进行扩增；(5)、将二级摇瓶出来的菌液进行发酵处理即可得到成品香菇液体菌种。
2.根据权利要求1所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法其特征在于所述木屑原种培养基为含有木屑的培养基。
3.根据权利要求1所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法其特征在于所述木屑原种培养基为含有木屑、棉子壳和豆粉的培养基。
4.根据权利要求1所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法其特征在于所述木屑原种培养基培养是在三角瓶内进行的。
5.权利要求1-4之一所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的木屑原种培养基，其特征在于该培养基原料部分的成分和重量百分比含量范围为蔗糖0.5-1.5％，棉子壳70-75％，木屑5-10％，麦麸5-10％，豆粉2-6％，石膏粉(CaCO3)0.5-2.5％，木屑原种培养基由上述原料与水按1∶1.2-1.4混合而得，其PH值为5.5-6.5
6.权利要求1-4之一所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的母种培养基为专用母种培养基，其特征在于该培养基在原有的马铃薯培养基内加入了香菇废料浸出液，其PH值范围为5.5-6.5，该培养基成分和重量百分比含量范围为马铃薯10-30％，香菇废料1-5％，葡萄糖1-3％，酵母膏0.02-2％，蛋白胨0.05-0.2％，KH2PO40.05-0.2％，MgSO4·7H2O0.01-0.07％，琼脂1-3％，水60-85％。母种培养基内的培养条件为温度20-27±1℃，黑暗培养，时间5-10天。
7.权利要求1-4之一所述的香菇液体菌种的深层发酵培养方法所涉及的液体培养基为深层发酵培养基，该培养基成分和重量百分比含量范围为酵母膏0.1-0.5％，麦麸0.5-3％，玉米粉1-5％，淀粉1-5％，石膏粉(CaCO3)0.05-0.5％，KH2PO40.02-0.1％，MgSO4·7H2O0.01-0.2％，NaCl0.01-0.1％，维生素B10.0001-0.008％，琼脂0.05-0.9％，水86-96％。
8.根据权利要求7所述的深层发酵培养基，其特征在于采用本深层发酵培养基在一、二级摇瓶内液体菌种的培养条件为温度25-27±1℃，振荡频率125-155转/分，培养时间3-5天，接种量和液体培养基装料系数根据所需的产物不同，分别是10-15％和100ml-150ml/500ml。
9.根据权利要求7所述的深层发酵培养基，其特征在于采用本深层发酵培养基在发酵阶段的培养条件为温度25-29±1℃，通气压力0.04-0.08Mpa，搅拌速度120-160转/分，频率指示20.0-26.6。时间5-7天。
全文摘要
本发明香菇液体菌种的深层发酵培养方法及其培养基涉及菌种深层发酵培养方法及其培养基。本发明解决液体菌种发酵培养技术中母种繁殖时间较长，菌丝质量不高、生产菌球的时间长、菌球大小不一、生产成本较高的技术缺陷，提供一种解决上述问题的液体菌种深层发酵培养方法。该培养方法包括(1)将母种在母种培养基内进行培养；(2)将在母种培养基内培养长满试管的菌丝移种到木屑原种培养基内进行过渡培养，培养条件为温度22－27±1℃，暗培养12－20天，待菌丝长满，(3)将木屑菌种充分打碎后立即移种到液体培养基中进行一级摇瓶的培养扩增；(4)将一级摇瓶内生长5－7天的菌液移入盛有新鲜液体培养基的二级摇瓶中进行扩增；(5)将二级摇瓶出来的菌液进行发酵处理即可得到成品香菇液体菌种。本发明涉及的培养基包括香菇母种专用培养基、木屑原种培养基和深层发酵培养基。
文档编号A01G1/04GK1463578SQ0212409
公开日2003年12月31日 申请日期2002年6月20日 优先权日2002年6月20日
发明者林翔鹰, 党俊梅, 刘富, 段新梅, 王玉忠, 李荣旗 申请人:北京锦绣大地农业股份有限公司