专利名称：一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法
技术领域：
本发明涉及微生物真菌及其提取物，尤其涉及一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法。
背景技术：
果蔬采后腐烂大多由真菌引起的，长期以来防治真菌病害的方法主要是采用化学杀菌剂(农药)。然而，由于长期使用化学杀菌剂，病原菌会对杀菌剂产生抗药性而降低农药使用的效果，更严重的是，农药的使用会对公众的健康造成危害，农药残留会对环境造成污染，目前，化学杀菌剂在许多国家已被禁止使用。为了提高水果的保鲜期，人们不得不寻求能取代当前化学杀菌剂的安全、无毒和有效的新方法。近年来，我国对食品的安全性非常重视，各地都在推行放心菜、放心肉、放心水果工程，不使用化肥农药的绿色水果已成为广大消费者的首选。另外，我国已加入WTO，国外对水果上的农药残留有严格的规定，特别是有些国家为了保护本国的经济利益，实行贸易壁垒，对水果上的农药残留实行近乎苛刻的规定。所有这一切都要求我们开发安全、无公害、高效的水果生物保鲜剂。安全的病害防治措施是实施安全食品生产的重要内容之一。生物杀菌剂既能减轻有害微生物对果蔬侵染，又能保护环境，是生产安全性食品的有效方法。因而研究天然生物杀菌取代农药进行果蔬采后病害的防治，对减少食品中农药的残留，保护环境，确保人体健康，增加果蔬出口，都具有深刻的意义。
生物杀菌剂可分为植物杀菌剂、动物杀菌剂和微生物杀菌剂三种。用微生物进行采后病害的生物防治是国外近几年来发展起来的一个新的研究领域，自从Guter首次报道枯草杆菌(Bacillus subtilis)对水果病原菌有拮抗作用以来，国外学者对用微生物拮抗菌对果蔬采后病害的防治进行了广泛的研究。
从国外文献中可知当前以有效微生物取代化学杀菌剂对水果用于采后果蔬病害的防治已显示出巨大的应用前景，采后果蔬的生物防治成为一个新的研究热点。但目前的研究主要集中在苹果和桃的病害防治上，而且还存在抑菌效果低、抑菌时间短、在果实表面附着性差及拮抗菌安全性等问题，限制了它们的广泛使用，尤其是拮抗微生物抑菌的机理还不十分明了，因而筛选活力高、存活时间长、附着性好的安全菌种，是提高采后果蔬生物防治效果的关键。同时搞清采后病害生物防治的机理也十分重要。
在众多的拮抗微生物如拮抗细菌、拮抗真菌和拮抗放线菌中，人们的关注焦点已逐渐由拮抗细菌转向了拮抗真菌中的酵母生物制剂。因为拮抗酵母具有以下优点酵母不会产生抗生素，不会对人体产生危害；能在干燥的条件下长期占据在果蔬表面并生长存活；它本身能产生胞外多糖以增强其自身生存能力；酵母能快速利用营养物质繁殖，生长快速。酵母的抑菌机理主要是通过其与病原菌之间对营养物质和空间的竞争来达到对病原菌的抑制效果。
发明内容
为了替代化学杀菌剂或尽量减少化学杀菌剂使用量，本发明的目的是提供一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法。根据微生物之间的相生相克原理，利用酵母菌来抑制果蔬上病害真菌的生长而达到抑制腐烂的效果。
本发明的技术方案将粘红酵母菌菌体在10-12°Brix的麦芽汁培养基中26-30℃下在摇床中180-220转/分钟摇动20-26小时，进行培养，在2500-3000转/分钟下离心分离10-15分钟，收集菌体，直接配制成1×108-5×108个/毫升的酵母菌悬液，或者采用冷冻干燥机在零下40-45℃冷冻干燥制成干粉，贮藏。
本发明具有的有益的效果是该生物制剂可以防治柑橘上由两种主要病原真菌引起的病害，并且使用后不会影响到果品品质，不会危害人体健康；酵母菌体通过某种作用机制，可以很好地抑制病原真菌的生长繁殖，并且其本身能很好的适应柑橘的伤口环境，适应采前恶劣的大田环境，如高温、干燥和使用化学杀菌剂；或者适应采后的贮藏环境，如低温环境。并且长期地发挥抑菌作用；食用使用了该酵母生物制剂的梨果实后，对健康不会产生影响，因为该酵母生物制剂是安全，对人体无毒的；酵母菌体能够较好地附着在柑橘果实表面上，而不会轻易地脱落下来；在柑橘果实上使用该粘红酵母菌生物制剂后，不会对柑橘的风味、外观等品质产生影响。
具体实施例方式
本发明提供的酵母生物保鲜剂粘红酵母(Rhodotorula glutinis)，菌体颜色是红色的，安全，对人体无毒无害。该酵母在国外已有人作过生防实验，证实是安全的，但在柑橘上的应用未见报道。
本发明中使用的粘红酵母，经实验研究证实，对许多病原菌有抑制作用，对引起柑橘腐烂的两种主要病原真菌是指状青霉(Penicillium digitatum)和意大利青霉(Penicillium italicum)有很好的抑制效果，并且在室温和冷藏低温时都能在柑橘伤口环境上生长。
粘红酵母在低温下仍然能够在水果上缓慢生长，且在低温下仍然能够发挥生物防治作用，因此可以和低温贮藏一起使用；该粘红酵母可以耐受较低浓度的某些化学杀菌剂，因此可以混合使用，以降低化学杀菌剂的使用量；此外该粘红酵母与一些金属离子结合使用还可以提高抑菌效果。
实施例1将粘红酵母菌菌体在12°Brix的麦芽汁培养基中28℃下200转/分钟摇动，培养活化20小时，在3000转/分钟下离心分离10分钟，收集菌体，直接配制成1×108个/毫升的酵母菌悬液，将菌体分离后直接悬浮在无菌生理盐水中，配成浓度为2×108个/毫升的酵母菌悬液，直接喷洒使用。
实施例2将粘红酵母菌菌体在12°Brix的麦芽汁培养基中28℃下190转/分钟摇动，培养活化22小时，在2800转/分钟下离心分离10分钟，收集菌体，直接配制成1×108个/毫升的酵母菌悬液，将菌体分离后直接悬浮在无菌生理盐水中，配成浓度为3×108个/毫升的酵母菌悬液，直接喷洒使用。
实施例3将粘红酵母菌菌体在10°Brix的麦芽汁培养基中29℃下180转/分钟摇动，培养活化24小时，在2500转/分钟下离心分离12分钟，收集菌体，用冷冻干燥机在零下40℃冷冻干燥制成干粉，在4℃贮藏备用.用时将干粉直接悬浮在无菌生理盐水中，配成浓度为2×108个/毫升的酵母菌悬液，直接喷洒使用。
实施例4将粘红酵母菌菌体在10°Brix的麦芽汁培养基中28℃下190转/分钟摇动，培养活化23小时，在3000转/分钟下离心分离10分钟，收集菌体，用冷冻干燥机在零下40℃冷冻干燥制成干粉，在4℃贮藏备用.用时将干粉直接悬浮在无菌生理盐水中，配成浓度为5×108个/毫升的酵母菌悬液，直接喷洒使用。
权利要求
1.一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法，其特征在于将粘红酵母菌菌体在10-12°Brix的麦芽汁培养基中26-30℃下在摇床中180-220转/分钟摇动20-26小时，进行培养，在2500-3000转/分钟下离心分离10-15分钟，收集菌体，直接配制成1×108-5×108个/毫升的酵母菌悬液，或者采用冷冻干燥机在零下40-45℃冷冻干燥制成干粉，贮藏。
全文摘要
本发明公开了一种用于防治柑橘采后病害的酵母生物制剂制备方法，将粘红酵母菌菌体在麦芽汁培养基中摇床培养，离心分离，收集菌体,直接配制成1×10
文档编号A01N63/02GK1557166SQ20041001594
公开日2004年12月29日 申请日期2004年1月16日 优先权日2004年1月16日
发明者郑晓冬, 傅承新, 孙萍, 张红印 申请人:浙江大学