专利名称：槲蕨的人工繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种野生中药材骨碎补原植物——槲蕨的人工种植方法。
背景技术：
槲蕨[Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm]为槲蕨科槲蕨属植物，为多年附生草本，野生植株高20cm～40cm，根状茎肉质粗壮，长而横走。3月中旬，根茎开始生长延长，营养叶生长并延续到6、7月份，5月下旬到7月份，孢子叶逐渐枯萎凋零，8月上旬开始，根茎开始第二次生长延伸，并且孢子叶呈拳状开始生长，到9月中旬，大部分孢子叶完全伸展长成，孢子囊发育始于9月下旬，10月末开始有孢子成熟。槲蕨作为中药骨碎补的来源，完全依靠野生，其野生资源难以满足市场需求。
近些年，随着人们保健意识的增强促进了功能食品和新药的开发。两年前北京岐黄药业科技投资有限责任公司已将骨碎补作为医药工业原料生产治疗老年骨质疏松的新药“强骨胶囊”，进一步突出了骨碎补药材的供需矛盾。但迄今为止在其原植物槲蕨繁殖生物学及繁殖技术的研究方面还处于空白。在“长角蕨的引种栽培”(浙江师范大学学报(自然科学版)1999-22-4)和“药用蕨类植物孢子繁殖方法”(中药材1993-16-11)研究中，孢子的播种都是将孢子叶剪成条状或捣成粉末撒于盆土表面，这样容易长霉。我们制备槲蕨孢子囊悬浊液采用喷壶喷洒的方法，既降低了污染又可确保均匀地播种。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状，旨在提供一种成本低、操作简单的槲蕨的人工繁殖方法。
本发明目的的实现方式为，槲蕨的人工繁殖方法采用无性繁殖或孢子繁殖，无性繁殖按以下步骤进行①将槲蕨根茎剪成10±2cm的小段，每段保留3-5个芽点，保留3-5片孢子叶，②用线将槲蕨根茎段固定在树上或山石上面，再覆盖少量的苔藓，覆盖住根茎即可，③加强喷水管理，两个月有新的营养叶和根状茎生成；孢子繁殖按以下步骤进行①火渣土在120℃灭菌1-2h，取出放冷，用pH为7.0～7.5的冷开水浸透，制成盆土，②采用槲蕨当年的孢子，当孢子囊由黄色变为黄褐色时，采集背面有孢子囊的孢子叶，置于纸袋中，风干后及时播种，③取20mg～40mg孢子囊置于50mL三角瓶中，加入灭菌的直径0.6～0.8cm的玻璃珠20～30颗和15mL-20mL无菌水，充分振摇，将振摇液转到喷壶中，再加150mL～200mL的无菌水摇匀配成孢子囊悬浊液，用喷壶均匀喷洒到盆土表面，放在加水的垫盘上，盖上平板玻璃，④在光照强度2500lx-3500lx，光照时间10h，温度20-25℃的条件下培养形成配子体，⑤当配子体的宽度长到0.3-0.5cm时，按照株行距2cm×2cm移栽到灭菌后的火渣土盆土中育苗，⑥之后进行喷水管理，配子体受精后形成孢子体，当孢子体长到4～6片孢子叶时，去掉平板玻璃，炼苗后，按照株行距5cm×5cm移栽到树上或山石上。
本发明具有以下优点1、建立了槲蕨根茎的营养繁殖方式，同时建立了槲蕨孢子繁殖的方法；2、采集当年的槲蕨孢子，特别在其孢子囊由黄色变为黄褐色时采集，孢子的萌发情况比保存一年的孢子萌发情况好，亦即萌发较早且萌发率高；3、所用土是烧制的火渣土，透气性较好，适宜于槲蕨孢子萌发和配子体生长；4、盆土的pH在7.0～7.5之间，利于配子体的发育；5、当配子体长到0.3-0.5cm左右时移栽，可以将成苗率由10％左右提高到70％以上。
具体实施例方式
本发明采用无性繁殖或孢子繁殖。无性繁殖是将槲蕨根茎剪成10±2cm的段，每段保留3-5个芽点，3-5片孢子叶，用线将槲蕨根茎固定在树上或山石上面，再覆盖少量的苔藓，加强喷水管理，两个月有新的营养叶和根状茎生成。孢子繁殖按以下步骤进行火渣土灭菌，用pH为7.0～7.5的冷开水浸透，采集当年孢子囊，置于牛皮纸袋内，风干，用无菌水加玻璃珠将孢子囊振摇制成悬浊液，悬浊液均匀喷洒到火渣土盆土表面，光照培养形成配子体，配子体移栽到灭菌后的盆土中育苗，加强喷水管理，受精后形成孢子体，再移栽在树上或山石上。槲蕨根茎固定和孢子体移栽的树为桑树、槐树、榆树、杨树、枫杨、椴树、栗树、榉树、樟树等。山石有假山石、可长苔藓的石壁等。
下面详述本发明1.无性繁殖在3～9月份，选择株形较好，没有病虫害的植株，挖其根茎，剪成10±2cm左右的段，每段保留3-5个芽点，保留3-5片孢子叶，选择适宜树种和山石，用线将槲蕨根茎固定在上面，覆盖少量的苔藓，加强喷水管理即可。
2.孢子繁殖在10月末或11月份采集孢子囊由黄色变为黄褐色时的孢子叶，置于牛皮纸信封，风干，将火渣土过24目筛，大颗粒的土垫于盆底，过筛后的细土置于盆表，覆细土4cm～5cm厚，稍压实，在120℃灭菌1-2h小时，取出冷却，用pH为7.0～7.5的冷开水浇透。
取20mg～40mg孢子囊置于50mL三角瓶中，加入灭菌的玻璃珠(直径0.6cm～0.8cm)20～30颗和20mL无菌水，充分振摇，再加150mL～200mL的无菌水摇匀配成孢子囊悬浊液，喷洒到盆土表面，放在加水的垫盘上，盖上平板玻璃，在光照强度2500lx-3500lx、光照时间10h和室温20℃-25℃的条件下培养。
当配子体的宽度长到0.3cm-0.5cm左右时，按照株行距2cm×2cm移栽到灭菌后的盆土中育苗，此后要加强喷水管理，保证配子体表面能看到流动的水珠。
下面举出
具体实施例方式例1、在武汉植物园，于6月和9月份，将槲蕨根茎剪成9cm左右的根茎段，每段保留3-5个芽点，留3片孢子叶，分别栽种到樟树、杨树、槐树、桑树和假山石头上，用线将槲蕨根茎固定，覆盖少量的苔藓，加强喷水管理，两个月后看到有新的营养叶和根状茎生成，成活率95％以上。
例2、2003年6月，在五峰土家族自治县泗洋河流域的二叉口地区，将槲蕨根茎剪成10cm的根茎段，每段保留4～5个芽点，留3～5片孢子叶，栽种到灌丛边缘，使槲蕨根茎紧贴在湿润的可长苔藓的石壁上，覆盖少量的苔藓，喷水，一个月后看到有新的营养叶生成和根状茎生长延长，成活率90％以上。
例3、采用当年采集的孢子，取约30mg槲蕨孢子囊到50mL三角瓶中，加入灭菌玻璃珠25颗和20mL无菌水，充分振摇，将振摇液转到喷壶中，再加200mL的无菌水摇匀配成孢子囊悬浊液，用喷壶均匀喷洒到盆土表面，放在加水的垫盘上，盖上平板玻璃。在光照强度3000lx、光照时间10小时和室温23±2℃的条件下培养。一个月左右孢子萌发，7周后可以明显看到槲蕨孢子萌发形成的丝状配子体，并且向光性很强，所有配子体的背面向着阳光生长。当配子体的宽度长到0.3cm左右时，按照株行距2cm×2cm移栽到灭菌后的盆土中育苗，此后加强喷水管理，保证配子体表面能看到流动的水珠。移栽一周后，生长速度明显加快，配子体增宽明显，半个月后呈较大的心形薄片状，配子体的腹面有大量的假根生成；一个月后，受精形成孢子体，成苗率70％以上。第一片孢子叶呈长卵圆形不分裂，第二片以后生长的孢子叶边缘稍有缺刻或前端不对称分裂。当出现34片孢子叶时，原叶体消失且在胚的分化处形成一个根茎分化组织，同时有少量较粗的不定根形成，此时慢慢移去平板玻璃，炼苗，当长至4～6片孢子叶时，移栽到武汉植物园的榆树、桑树、椴树、栗树、榉树上和荫棚下的假山上，加强喷水，一周后成活，成活率90％以上。
例4、同实施例3，当孢子繁殖得到的孢子体长到6片孢子叶时，在五峰土家族自治县天池河流域水尽司地区，将其移栽到灌丛边缘湿润的石壁上，覆盖少量的腐殖土和苔藓，当年根状茎生长可达3cm～4cm。
例5、同实施例3，当孢子繁殖得到的孢子体长到6片孢子叶时，在五峰土家族自治县泗洋河流域采花地区，将其移栽到路边的榆树和枫杨树上，用线固定，喷水，当年根状茎生长可达2cm～3cm。
权利要求
1.槲蕨的人工繁殖方法，其特征在于采用无性繁殖或孢子繁殖，无性繁殖按以下步骤进行①将槲蕨根茎剪成10±2cm的小段，每段保留3-5个芽点，保留3-5片孢子叶，②用线将槲蕨根茎段固定在树上或山石上面，再覆盖少量的苔藓，覆盖住根茎即可，③加强喷水管理，两个月有新的营养叶和根状茎生成；孢子繁殖按以下步骤进行①火渣土在120℃灭菌1-2h，取出放冷，用pH为7.0～7.5的冷开水浸透，制成盆土，②采用槲蕨当年的孢子，当孢子囊由黄色变为黄褐色时，采集背面有孢子囊的孢子叶，置于纸袋中，风干后及时播种，③取20mg～40mg孢子囊置于50mL三角瓶中，加入灭菌的直径0.6～0.8cm的玻璃珠20～30颗和15mL-20mL无菌水，充分振摇，将振摇液转到喷壶中，再加150mL～200mL的无菌水摇匀配成孢子囊悬浊液，用喷壶均匀喷洒到盆土表面，放在加水的垫盘上，盖上平板玻璃，④在光照强度2500lx-3500lx，光照时间10h，温度20-25℃的条件下培养形成配子体，⑤当配子体的宽度长到0.3-0.5cm时，按照株行距2cm×2cm移栽到灭菌后的火渣土盆土中育苗，⑥之后进行喷水管理，配子体受精后形成孢子体，当孢子体长到4～6片孢子叶时，去掉平板玻璃，炼苗后，按照株行距5cm×5cm移栽到树上或山石上。
2.根据权利要求1所述的槲蕨的人工繁殖方法，其特征在于槲蕨栽培所用的火渣土为落枝落叶和秸杆杂草加5-10％的棕壤、或黄棕壤、或暗棕壤经烧制而成的火渣土。
3.根据权利要求1所述的槲蕨的人工繁殖方法，其特征在于槲蕨根茎固定的树、孢子体移栽的树为桑树、槐树、榆树、杨树、枫杨、椴树、栗树、榉树、樟树。
4.根据权利要求1所述的槲蕨的人工繁殖方法，其特征在于槲蕨根茎固定和孢子体移栽的山石有假山石、可长苔藓的石壁。
全文摘要
槲蕨的人工繁殖方法，涉及一种野生中药材骨碎补原植物——槲蕨的人工种植方法。采用无性繁殖或孢子繁殖。无性繁殖是将槲蕨根茎成10±2cm的小段，每段保留3－5个芽点，3－5片孢子叶，再固定在树上或山石上，覆盖少量苔藓，加强喷水管理，两个月有新的营养叶和根状茎生成。孢子繁殖步骤如下火渣土灭菌，用pH为7.0～7.5的冷开水浸透制成火渣土盆土，采集当年孢子囊，置于纸袋内，风干，制孢子囊悬浊液，悬浊液喷洒到火渣土盆土表面，光照培养形成配子体，配子体经移栽育苗，受精后形成孢子体，然后再移栽在树上或山石上。本发明采集当年的槲蕨孢子，萌发较早且萌发率较高；采用pH适中的火渣土作栽培盆土，适宜孢子萌发和配子体生长，成苗率可达70％以上。
文档编号A01G7/00GK1726760SQ200510018869
公开日2006年2月1日 申请日期2005年6月8日 优先权日2005年6月8日
发明者王有为, 王庆, 吴艳芳, 尤敏, 王跃进, 付慧英 申请人:中国科学院武汉植物园