专利名称：一种复合杀虫剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物杀虫剂，具体地说是一种植物提取液与核型多角体病毒复合杀虫剂，属于生物技术领域。
背景技术：
随着中国加入WTO，与国外农业接轨，参与国外的经济竞争，搞出口农业已迫在眉睫。而影响我国蔬菜出口的关键因素是出口蔬菜的安全、卫生不符合进口国的要求，以2001年我国出口日本的蔬菜为例，2001年我国出口日本的新鲜蔬菜有近20-30批次被日方检出农药残留物质超标，从目前我国出口蔬菜的品种来看，出口品种还比较单一，主要是大葱、大蒜类产品，产品主要销往日本，而一些深受欧美等发达国家欢迎的、更具有市场发展潜力和前景的绿叶蔬菜，几乎没有一个品种可以出口，造成这一原因的关键因素是蔬菜中含有的农药残留物质及有毒有害物质的检出率还比较高。因此，开发化学农药的替代品势在必行。
甜菜夜蛾(Spodoptera exigua Hünber)为鳞翅目，夜蛾科，该虫食性杂，分布广，取食量大，抗药性强。近年来在我国南方各省菜区危害愈趋严重，尤其危害夏、秋季蔬菜，巳成为6-7月份重要的蔬菜害虫之一。蔬菜常年损失达30％以上。防治夜蛾类害虫，长期以来主要依赖化学农药，由于一般化学农药对其防治效果不理想，结果不得不加大剂量，这不仅增加成本，造成药害和污染环境，也容易引起人体中毒。因而寻求有效的而又能减少环境污染的微生物杀虫制剂，很有必要。苏云金芽孢杆菌(Bt.)虽然被广泛用防治蔬菜害虫(小菜蛾和菜青虫)，但灰翅夜蛾属的斜纹夜蛾和甜菜夜蛾对苏云金芽孢杆菌(Bt.)不敏感。一些研究表明，病毒是夜蛾类害虫综合治理中最有希望的微生物防治物。
昆虫病毒是抑制害虫种群的病原性天敌。致病力强，对天敌安全，不污染环境，可长期保存，并与化学杀虫剂具有相似的施用方法，尤其是它能在害虫种群中造成流行病而长期控制害虫密度。迄今，尚未发现昆虫对病毒杀虫剂产生抗药性。因此，它是生物控制害虫的强有力手段，得到世界各国的广泛重视与研究。
植物是生物活性化合物的天然宝库，其产生的次生代谢产物超过400,000，其中的大多数化学物质如萜烯类、生物碱、类黄酮、甾体、酚类、独特的氨基酸和多糖等均具有杀虫或抗菌活性。Grange和Ahmed(1988)曾报道约有2400种植物具有控制有害生物的活性，而这些在化学性质上作过调查研究的植物仅占全世界现有植物种类的10％，因此开发利用植物资源用于有害生物防治的前景十分广阔。从植物中探寻新的活性先导物或新的作用靶标，通过类推合成或生物合理设计进行新农药的开发已成为当前农药化学和农药毒理学研究的热点。
目前投资研究新化学农药的成本越来高，成功率不断下降，其难度和风险性都在加大。据有关部门统计，1990年一项化学农药的开发投入已从上世纪60年代的4000-5000万元美元增加到8000万美元，而成功率却从1∶5000下降到1∶20000。当今世界化学农药的发展已呈停滞状态，只有极少数大公司敢于投资。即使是这些大公司，如瑞士山德士、美国杜邦等也都从上世纪90年代起投入部分资金用于生物农药的研制。且生物农药的研究开发所需投入仅为化学农药的1/30。
植物源农药和病毒杀虫剂作为生物农药的重要组成部分，因其具有高效、低毒或无毒、无污染、抗药性弱等优点，在当今环保及农业生态系统日益受到重视的情况下，被视为防治害虫的主要手段。因此有关植物源杀虫剂和微生物农药的研究和开发利用也成为重要的研究领域之一。
发明内容
本发明的目的是为弥补两类生物农药的不足而提供的一种安全性好、药效高的复合生物杀虫剂。
本发明的目的是这样实现的一种复合杀虫剂，其特征在于它是由植物提取液与核型多角体病毒液在常温、常压下混合而成，其体积比为植物提取液∶核型多角体病毒液为1～9∶9～1。
制备上述杀虫剂的方法包含以下步骤a、植物提取液的制备称取一定量的植物干粉置于广口瓶中，加入溶剂，于室温下浸泡12h，取出浸液，再加入溶剂浸泡12h，重复浸提3次，用溶剂冲洗残渣2次，用滤纸过滤后合并全部滤液；滤液经旋转蒸发器浓缩，蒸发温度控制在45-50℃，以1克干粉加1ml水定容，得到母液，并将母液密封贮存于0-4℃下待用。
b、病毒液的制备将从田间自然感染致死的甜菜夜蛾虫尸中提纯的核型多角体分别稀释成不同浓度，饲喂室内人工大量饲养的4龄幼虫，具体做法在人工饲料表面定量滴加病毒液，每处理2次重复，每重复20头幼虫，每试管饲虫两头，饲毒48小时后更换无毒饲料，每天观察幼虫发病情况，频死前收取病虫，体表消毒后加无菌水，置4℃下保存。
称取定量的病虫死尸加2-3倍无菌水稀释，用研钵研磨两次，用2层纱布过滤，取滤液备用；取出滤液加蒸馏水按1∶10稀释，混合液先用3200r/min离心30分钟，弃上清液，沉淀加入适量的0.1％的中性洗洁精完全悬浮，经低速400r/min离心4分钟，取上清液，重复洗涤离心2-3次，得纯净的核型多角体病毒，以1克病虫死尸加100ml水定容，得到母液，置4℃下待用。
c、复合杀虫剂的制备将植物提取液与核型多角体病毒液按1～9∶9～1的比例在常温、常压下混合，得到复合杀虫剂。
所述溶剂为乙醇、丙酮或乙醚。
具体实施例方式
1、病毒液的制备将从田间自然感染致死的甜菜夜蛾虫尸中提纯的核型多角体分别稀释成不同浓度，饲喂室内人工大量饲养的4龄幼虫，具体做法在人工饲料表面定量滴加病毒液，每处理2次重复，每重复20头幼虫，每试管饲虫两头，饲毒48小时后更换无毒饲料，每天观察幼虫发病情况，频死前收取病虫，体表消毒后加无菌水，置4℃下保存；称取定量的病虫死尸加2-3倍无菌水稀释，用研钵研磨两次，用2层纱布过滤，取滤液备用；取出滤液加蒸馏水按1∶10稀释，混合液先用3200r/min离心30分钟，弃上清液，沉淀加入适量的0.1％的中性洗洁精完全悬浮，经低速400r/min离心4分钟，取上清液，重复洗涤离心2-3次，得纯净的核型多角体病毒，以1克病虫死尸加100ml水定容，得到母液，置4℃下待用。
2、植物提取液的制备实施例1称取一定量的辣椒干粉置于1000ml广口瓶中，加入90％的乙醇溶剂，于室温下浸泡12h，取出浸液，再加入90％的乙醇溶剂浸泡12h，如此重复浸提3次，然后用90％的乙醇溶剂冲洗残渣2次，用滤纸过滤后合并全部滤液。滤液经旋转蒸发器(45-50℃)浓缩，最后以1克干粉加1ml水定容制取母液，并将母液密封贮存于0-4℃的冰箱内待用。
实施例2称取一定量的鱼藤干粉置于1000ml广口瓶中，加入90％的丙酮溶剂，于室温下浸泡12h，取出浸液，再加入90％的丙酮溶剂浸泡12h，如此重复浸提3次，然后用90％的丙酮溶剂冲洗残渣2次，用滤纸过滤后合并全部滤液。滤液经旋转蒸发器(45-50℃)浓缩，最后以1克干粉加1ml水定容制取母液，并将母液密封贮存于0-4℃的冰箱内待用。
3、复合杀虫剂的制备将辣椒提取液与核型多角体病毒液按2∶8的比例在常温、常压下混合，得到复合杀虫剂；将鱼藤提取液与核型多角体病毒液按8∶2的比例在常温、常压下混合，得到复合杀虫剂。
本发明具有较高的毒力，缩短了杀虫时间，提高了杀虫效果，与植物单剂相比，具有明显的增效作用，相对纯病毒制剂，降低了生产成本，具有很大的市场发展潜力。
试验结果核型多角体病毒液与辣椒提取液配比试验结果(体积比)
核型多角体病毒液与鱼藤提取液配比试验结果(体积比)
选择上述试验数据(浓度对数X，校正死亡率Y)进行毒力回归测定，其结果如下(单位mg/ml)
*LC50为杀死种群50％的个体所需要的浓度；LC95为杀死种群95％的个体所需要的浓度。
共毒系数计算公式及结果共毒系数＝实测的毒力指数/理论上的毒力指数×100毒力指数＝标准单剂的LC50/供试药剂的LC50×100实测的毒力指数＝标准单剂的LC50/混剂的LC50×100理论毒力指数＝单剂1的毒力指数×单剂1在复合杀虫剂中所占的百分率+单剂2的毒力指数×单剂2在复合杀虫剂中所占的百分率其中共毒系数显著大于100为增效作用，接近或略小于100为相加作用，显著小于100为拮抗作用。
共毒系数
权利要求
1.一种复合杀虫剂，其特征在于它是由植物提取液与核型多角体病毒液在常温、常压下混合而成，其体积比为植物提取液∶核型多角体病毒液为1～9∶9～1。
2.根据权利要求1所述的复合杀虫剂，其特征在于其制备方法包含以下步骤a、植物提取液的制备称取一定量的植物干粉置于广口瓶中，加入溶剂，于室温下浸泡12h，取出浸液，再加入溶剂浸泡12h，重复浸提3次，用溶剂冲洗残渣2次，用滤纸过滤后合并全部滤液；滤液经旋转蒸发器浓缩，蒸发温度控制在45-50℃，以1克干粉加1ml水定容，得到母液，并将母液密封贮存于0-4℃下待用；b、病毒液的制备将从田间自然感染致死的甜菜夜蛾虫尸中提纯的核型多角体分别稀释成不同浓度，饲喂室内人工大量饲养的4龄幼虫，具体做法在人工饲料表面定量滴加病毒液，每处理2次重复，每重复20头幼虫，每一试管饲虫两头，饲毒48小时后更换无毒饲料，每天观察幼虫发病情况，频死前收取病虫，体表消毒后加无菌水，置4℃下保存；称取定量的病虫死尸加2-3倍无菌水稀释，用研钵研磨两次，用2层纱布过滤，取滤液备用；取出滤液加蒸馏水按1∶10稀释，混合液先用3200r/min离心30分钟，弃上清液，沉淀加入适量的0.1％的中性洗洁精完全悬浮，经低速400r/min离心4分钟，取上清液，重复洗涤离心2-3次，得纯净的核型多角体病毒，以1克病虫死尸加100ml水定容，得到母液，置4℃下待用；c、复合杀虫剂的制备将植物提取液与核型多角体病毒液按1～9∶9～1的比例在常温、常压下混合，得到复合杀虫剂。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于所述溶剂为乙醇、丙酮或乙醚。
全文摘要
本发明公开了一种复合杀虫剂，它是由植物提取液与核型多角体病毒液在常温、常压下混合而成，其体积比为植物提取液∶核型多角体病毒液为1～9∶9～1。所述植物提取液可以是辣椒素、鱼藤酮。本发明具有较高的毒力，缩短了杀虫时间，提高了杀虫效果，与植物单剂相比，具有明显的增效作用，相对纯病毒制剂，降低了生产成本，具有很大的市场发展潜力。
文档编号A01N65/20GK1864492SQ200510026040
公开日2006年11月22日 申请日期2005年5月20日 优先权日2005年5月20日
发明者蒋杰贤, 季香云 申请人:上海市农业科学院