专利名称：一种微生物植物生长调节剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种生物植物生长调节剂及其制备方法，特别涉及由已知微生物通过发酵得到的生物植物生长调节剂及其制备方法，具体地说是由哈茨木霉发酵制备的微生物植物生长调节剂及其制备方法。
背景技术：
木霉(Trichoderma.spp)属于半知菌类丛梗孢目，丛梗孢科真菌(Troiosporae)，是一种普遍存在的真菌，常见于土壤中，是土壤微生物的重要群落组成部分，也见于植物残体及动物粪便上。从植物根围、叶围及种子，球茎表面经常可以分离得到。木霉具有活性很强的纤维素酶和其他分解酶，同时木霉还是多种植物病原菌的寄生菌或拮抗菌，早在1981年，就将用于防治李属果树银叶病的木霉制剂已在西欧国家商品化生产，具有重要的经济意义。
哈茨木霉所产生的物质能够有效地抑制病原菌的生长。特别是通过裂解酶消除病原菌的细胞壁，使病原菌不易产生抗病性黄萎病。因此，该技术可以用于多种病害的防治，提高物的质量，具有广阔的应用前景。
在现有技术中，哈茨木霉发酵多用于制备生物农药，特别是生物杀菌剂。
目前我国的环境污染和生态破坏已经造成了巨大的经济损失。据世界银行测算，我国空气和水的污染造成的损失已经占到当年GDP的8％，而中科院的测算数据表明，环境污染使我国的发展成本比世界平均水平高了7％，环境污染和生态破坏造成的损失占到GDP的15％(《科技日报》2005年1月26日第3版)。
我国农业生产已离不开化学植物生长调节剂和化学农药，其生产和使用多有不当，这不仅污染环境、破坏生态，而且也污染了农产品，直接或间接地影响到人的身体健康。发展生物植物生长调节剂和生物农药不失为可持续发展战略的一种重要组成部分。
发明内容
本微生物植物生长调节剂是由哈茨木霉通过发酵培养得到的液体微生物植物生长调节剂或者固体微生物植物生长调节剂，所要解决的问题是选择合适的培养基和在此培养基上的发酵培养。
本发明选择血红蛋白粉作为培养基的氮源。选择小麦秸杆、玉米杆、玉米芯或甘蔗渣经干燥、粉碎后作为培养基碳源(下称碳源粉)，当取其汁液时则配制液体培养基，当取其粉末时则配制固体培养基，经灭菌处理后分别接种、发酵。在液体培养基上发酵培养得到的发酵液经分离后便是液体微生物植物生长调节剂；在固体培养上发酵培养得到的固形物便是固体微生物植物生长调节剂。
所述的血红蛋白粉是由家禽、家畜的鲜血经脱血清、洗涤、脱血红素、分离和干燥处理得到的，用柠檬酸钠或肝素使血球凝集沉淀脱除血清，经洗涤、分离后用盐酸丙酮脱去血球中的血红素。最后分离、干燥得到血红蛋白粉，以代替通常使用的昂贵的蛋白胨。
液体培养基的配制与发酵培养取一定量的碳源粉加适量水煎煮0.5～1小时，冷却后分离取其汁液，再加入一定量的营养元素，最后用水稀释定容至一定体积，使各组份的含量相对固定。
各组份具体含量如下(重量百分比，下同)碳源粉汁液(以碳源粉计)2.5～3.5％血红蛋白粉0.1～0.3％FeSO40.01～0.03％NaNO30.1～0.7％MgSO40.1～0.3％K2HPO40.1～0.2％KH2PO40.05～0.2％水余量。
将以上液体培养基经高压灭菌后接种，于25～28℃条件下发酵5～7天。过滤分离后便得到液体微生物植物生长调节剂。
优选碳源粉3％(取其汁液)、血红蛋白粉0.2％、FeSO40.02％、NaNO30.4％、MgSO40.2％、K2HPO40.15％、KH2PO40.1％、余量为水的液体培养基，于26～28℃条件下发酵5～7天。
固体培养基的配制与发酵培养取碳源粉和血红蛋白粉同营养液混合搅拌均匀，呈手捏成团、手松散开状，称固体培养基，各组份含量如下碳源粉55～75％血红蛋白粉10～20％营养液余量。
所述的营养液是每升水中含FeSO40.1～0.3g、NaNO31～7g、MgSO41～3g、K2HPO41～2g、KH2PO40.5～2g。
将以上固体培养基经高压灭菌后接种，20～25℃条件发酵12～18天，或者于25～28℃条件下发酵5～10天，发酵期间每天翻动一次，或者置于震荡器上震荡发酵，震荡频率70～90次/min。发酵结束后便是固体微生物植物生长调节剂。
优选碳源粉60～70％、血红蛋白粉12～18％、余量为营养液的固体培养基，于26～28℃条件下发酵7～9天。
优选营养成分为每升水中含FeSO40.2g、NaNO34g、MgSO42g、K2HPO41.5g、KH2PO41g。
本发明中培养基的碳源和氮源原料来源丰富，价格低廉，整个生产工艺绿色、环保、无污染。
本液体植物生长调节剂稀释后(50～100倍)可作为叶面肥直接喷施于作物叶面或茎杆上，也可以稀释后施于土壤中，每月施两次，每次亩用量25～35Kg。
本固体植物生长调节剂可直接与种子拌和施于土壤中，或者加入辅料制成颗粒施用，亩用量25～35Kg。
本微生物植物生长调节剂既可在播种期使用，也可作为叶面使用，不仅适用于水稻、小麦、玉米等粮食作物，也适用于瓜果、蔬菜使用，尤其适合大棚蔬菜。研究表明本微生物既能促进作物对土壤中N、P、K的吸收、利用，同时可以预防作物对来自土壤的病害感染，改善土壤结构，所以增产效果显著，对粮食作物、特别是玉米增产16％以上，蔬菜增产达21％，特别是瓜果类增产达26％。
具体实施例方式
1、碳源粉的制备取小麦秸杆、玉米杆、玉米芯或甘蔗渣经干燥后粉碎，过200目筛，备用。
2、血红蛋白粉的制备在盆内放柠檬酸三钠或肝素，以鲜血量计，为鲜血重量的0.5～1％，然后放入宰杀的家禽或家畜的鲜血，轻轻摇动后静置1～2小时，虹吸或离心去上清液，其血球用生理盐水洗涤，每次洗涤后用前述方法去清液，重复三次后，按1∶1～1.5比例加蒸馏水搅动，于0～10℃条件下静置1小时，即加入4～5倍含2～5％盐酸的丙酮，充分搅动，过滤，脱去血红素，滤布上沉淀物即血红蛋白，经干燥，研成粉末即成血红蛋白粉。余血红素丙酮—水溶液经减压蒸馏回收丙酮。
3、营养液的配制向1升水中加入FeSO40.15～0.25g、MgSO41.5～2.5g、NaNO32～5g、K2HPO41～2g、KH2PO40.5～2g，搅拌均匀。
4、液体微生物植物生长调节剂的制备取碳源粉30g加200～300ml水煮沸40分钟后过滤，向滤液中加入血红蛋白粉2g、FeSO40.2g、NaNO34g、MgSO42g、K2HPO41.5g、KH2PO41g，用蒸馏水稀释定容至1000ml，调pH5.8～6.8，装入发酵罐，高压灭菌处理。然后接种无杂菌的孢子液1ml，约含孢子1×107个，于25～28℃条件下发酵5～7天，搅拌转速为80r/min，供氧为160Pa。发酵完成后过滤分离，发酵液即是液体微生物肥。
5、固体微生物肥的制备取碳源粉650g、血红蛋白粉150g、取上述3配制的营养液200g，调制得1000g固体培养基，呈手捏成团、手松能散开的状态，高压灭菌后接种无杂菌孢子液60ml，含孢子约6×108个，于25～28℃发酵7～9天，发酵过程中每天翻动一次，并视含水情况每2～3天撒无菌水一次，保持湿度。发酵结束后即得固体微生物植物生长调节剂。可直接施用，也可以加入玉米杆粉或甘蔗渣粉或泥炭粉混合制成颗粒使用。
权利要求
1.一种微生物植物生长调节剂，其特征在于由哈茨木霉通过发酵培养得到的液体微生物植物生长调节剂或者固体微生物植物生长调节剂。
2.一种由哈茨木霉发酵制备微生物植物生长调节剂的方法，包括液体培养基的配制、灭菌、接种和发酵以及分离各单元过程，其特征在于在以下液体培养基上接种后于25～28℃条件下发酵5～7天；所述的液体培养基含碳源粉汁液(以碳源粉计)2.5～3.5％、血红蛋白粉0.1～0.3％、FeSO40.01～0.03％、NaNO30.1～0.7％、MgSO40.1～0.3％、K2HPO40.1～0.2％、KH2PO40.05～0.2％、余量为水。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于在以下液体培养基上接种后于26～28℃条件下发酵5～7天；所述的液体培养基含碳源粉汁液(以碳源粉计)3％、血红蛋白粉0.2％、FeSO40.02％、NaNO30.4％、MgSO40.2％、K2HPO40.15％、KH2PO40.1％、余量为水。
4.一种由哈茨木霉发酵制备微生物植物生长调节剂的方法，包括固体培养基的配制、灭菌、接种和发酵各单元过程，其特征在于在以下固体培养基上接种后于20～25℃条件下发酵12～18天，或者于25～28℃条件下发酵5～10天；所述的固体培养基含碳源粉55～75％、血红蛋白粉10～20％，余量为营养液，所述的营养液为每升水中含FeSO40.1～0.3g、NaNO31～7g、MgSO41～3g、K2HPO41～2g、KH2PO40.5～2g。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于在以下固体培养基上接种于26～28℃条件下发酵7～9天，所述的固体培养基含碳源粉60～70％、血红蛋白粉12～18％、余量为营养液，所述的营养液为每升水中含FeSO40.2g、NaNO34g、MgSO42g、K2HPO41.5g、KH2PO41g。
6.在权利要求2～5所述的方法中所用的血红蛋白粉是由家禽家畜的鲜血经脱血清、洗涤、脱血红素和干燥处理得到的，其特征在于用柠檬酸钠或肝素脱去血清，用盐酸丙酮脱去血红素。
7.根据权利要求6所述的血红蛋白粉的制备，其特征在于柠檬酸钠或肝素用量为0.5～1％，盐酸丙酮中含盐酸2～5％。
全文摘要
一种微生物植物生长调节剂，由哈茨木霉通过发酵培养得到液体微生物植物生长调节剂或固体微生物植物生长调节剂。所用的培养基以小麦秸秆、玉米杆、玉米芯或甘蔗渣为碳源，以家禽、家畜的鲜血经加工得到的血红蛋白粉为氮源，辅之其他基础营养物质配制而成。本微生物植物生长调节剂既适用于水稻、小麦、玉米等粮食作物，又适用于瓜果、蔬菜使用，尤其适合大棚蔬菜施肥用。本微生物植物生长调节剂既能促进作物对土壤中N、P、K的吸收、利用，又可预防由土壤传染的病害，增产效果十分显著，粮食作物增产16％以上，蔬菜增产21％以上。
文档编号A01N63/04GK1685835SQ20051003912
公开日2005年10月26日 申请日期2005年4月25日 优先权日2005年4月25日
发明者岳永德, 蒋立科, 花日茂, 罗曼, 汤锋, 操海群 申请人:安徽农业大学