专利名称：棉花再生苗生根培养方法及其专用培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及农业组培技术领域中的一种棉花再生苗生根培养方法及其专用培养基。
背景技术：
在棉花的组织培养技术中，再生苗的生根定植一直是困扰研究人员的一个世界性难题。目前，棉花再生苗的定植有嫁接和生根移栽两种方法。由于棉花再生苗生根培养困难，一般要经过液体培养才能诱导根的发生，并且成活率极低，故很少应用。嫁接是目前在棉花再生苗的定植中应用最多、最广的方法。但嫁接需要培育砧木、嫁接和嫁接后管理等繁琐步骤。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于棉花组织培养的再生苗生根培养基。
本发明所提供的棉花再生苗生根培养基水剂，每1000mL水中含有下述物质KNO31.9-3.5g，NH4NO30.65-1.7g，MgSO40.64-1.2g，KH2PO40.15-0.6g，CaCl2·H2O0.3-1.2g，FeSO4·7H2O 0.02-0.04g，MnSO4·4H2O 0.017-0.085g，KI0.004-0.02g，CuSO40.00003-0.00006g、CoCl20.00003-0.00006g、HBO30.007-0.0095g，NAA 2-10mg，KT 0.5-2mg，谷氨酰胺0.4-0.8g，琼脂6-8g，pH值为6.2-6.8。
优选的棉花再生苗生根培养基水剂配方为每1000mL水中含有下述物质KNO32.85g，NH4NO31.47g，MgSO40.78g，KH2PO40.255g，CaCl2·H2O 0.667g，FeSO4·7H2O0.028g，MnSO4·4H2O 0.025g，KI 0.005g，CuSO40.00004g、CoCl20.00004g、HBO30.0093g，NAA 6mg，KT 2mg，谷氨酰胺0.6g，琼脂6.8g，pH值为6.5。
为得到较好的生根效果，所述棉花枝条扦插生根水剂中还添加有微量添加剂，包括下述微量添加剂中的一种或几种甘氨酸2mg，VB1 0.4mg，VB6 0.5mg，烟酸0.5mg和肌醇100mg。
为方便包装，上述棉花再生苗生根培养基可为粉剂。所述棉花再生苗生根培养基粉剂中包含有重量份数比为1.9-3.5∶0.65-1.7∶0.64-1.2∶0.15-0.6∶0.3-1.2∶0.02-0.04∶0.017-0.085∶0.004-0.02∶0.00003-0.00006∶0.00003-0.00006∶0.007-0.0095∶0.002-0.01∶0.0005-0.002∶0.4-0.8∶6-8的KNO3、NH4NO3、MgSO4、KH2PO4、CaCl2·H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、KI、CuSO4、CoCl2、HBO3、NAA、KT、谷氨酰胺和琼脂。
优选的棉花再生苗生根培养基粉剂配方包含有重量份数比为包含有重量份数比为2.85∶1.47∶0.78∶0.255∶0.667∶0.028∶0.025∶0.01∶0.00004∶0.00004∶0.0093∶0.006∶0.002∶0.6∶6.8的KNO3、NH4NO3、MgSO4、KH2PO4、CaCl2·H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、KI、CuSO4、CoCl2、HBO3、NAA、KT、谷氨酰胺和琼脂。
棉花再生苗生根培养基粉剂中也可添加有重量份数比为2∶0.4∶0.5∶0.5∶100的甘氨酸、VB1、VB6、烟酸或/和肌醇中的一种或几种微量添加剂。
上述再生苗生根培养基水剂使用前只需加热将琼脂融化，冷却后即可。粉剂则还需先用水将其溶解，配成水剂。
本发明的第二个目的提供一种用上述棉花再生苗生根培养基进行棉花再生苗生根培养的方法。
本发明所提供的棉花再生苗生根培养方法，是将再生苗的基部插入棉花再生苗生根培养基中，在20-25℃、散光下保湿培养12-18天(避免阳光直射)，然后在光下(可为阳光直射)通风培养。
所述棉花再生苗生根培养基使用前要在125-128℃下，灭菌12分钟。
在实际应用中，为扩大生根面，可将枝条基部的削成楔形，以利于扩大生根面，达到壮根、壮苗的效果。
本发明提供了一种适合棉花再生苗生根定植的自养型固体培养基，含有促进植物细胞生根生长的调节剂、植物生长发育所需的大量、微量营养元素及培养基固化剂。该培养基将再生苗从在人工添加蔗糖的培养基上的异养状态转变为靠自身光合作用生长、并可生根移栽的自然生长状态，故可称之为棉花再生苗自养型固体生根培养基。再生苗的生根效果良好，移栽成活率可达75.4％。本发明在棉花的组织培养中将再生苗由人工添加蔗糖的异养培养转变为无蔗糖的自养培养方式，使棉花的生根移栽技术成为可能，将在棉花的工厂化繁育中发挥重要作用。
具体实施例方式
下述实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。
实施例1、棉花再生苗生根培养基的配制称取如下物质KNO32.5g，NH4NO31.0g，MgSO40.78g，KH2PO40.3g，CaCl2·H2O0.8g，FeSO4·7H2O 0.028g，MnSO4·4H2O 0.05g，KI 0.01g，NAA 5mg，KT 1.0mg，琼脂6.8g，CuSO40.00004g，CoCl20.00004g，HBO30.0093g和谷氨酰胺0.5g。
将上述物质溶于1升蒸馏水中，调pH值为6.5，分装到20个25mL的三角瓶中，每瓶50mL，用封口膜封口，125℃加热12分钟后，冷却备用。
实施例2、棉花再生苗的生根培养在无菌的超净工作台中进行再生苗的转接，具体方法为选用带有2-3片真叶的健壮无病的棉花再生苗，将基部削成约5mm长的楔形，扦插到实施例1制备的培养基中，对照为采用棉花再生苗常用的生长培养基(在MS基本培养基的基础上添加25g/L蔗糖、0.01mg/L NAA和0.005mg/L KT)在22℃、散光下保湿培养12-18天(避免阳光直射)，然后在光下(可为阳光直射)通风培养，约一个月后移栽，对照取生根量相当的棉苗移栽，结果用实施例1培养的再生苗成活率高达75.4％，对照全部死亡。
权利要求
1.一种棉花再生苗生根培养基水剂，每1000mL水中含有下述物质KNO31.9-3.5g，NH4NO30.65-1.7g，MgSO40.64-1.2g，KH2PO40.15-0.6g，CaCl2·H2O0.3-1.2g，FeSO4·7H2O 0.02-0.04g，MnSO4·4H2O 0.017-0.085g，KI 0.004-0.02g，CuSO40.00003-0.00006g、CoCl20.00003-0.00006g、HBO30.007-0.0095g，NAA2-10mg，KT 0.5-2mg，谷氨酰胺0.4-0.8g，琼脂6-8g，pH值为6.2-6.8。
2.根据权利要求1所述的棉花再生苗生根培养基水剂，其特征在于所述每1000mL水中含有下述物质KNO32.85g，NH4NO31.47g，MgSO40.780g，KH2PO40.255g，CaCl2·H2O 0.667g，FeSO4·7H2O 0.028g，MnSO4·4H2O 0.025g，KI 0.01g，CuSO40.00004g、CoCl20.00004g、HBO30.0093g，NAA 6mg，KT 2mg，谷氨酰胺0.6g，琼脂6.8g，pH值为6.5。
3.根据权利要求1或2所述的棉花再生苗生根培养基水剂，其特征在于所述棉花再生苗生根培养基中添加有下述微量添加剂中的一种或几种甘氨酸2mg，VB10.4mg，VB6 0.5mg，烟酸0.5mg和肌醇100mg。
4.一种棉花再生苗生根培养基粉剂，包含有重量份数比为1.9-3.5∶0.65-1.7∶0.64-1.2∶0.15-0.6∶0.3-1.2∶0.02-0.04∶0.017-0.085∶0.004-0.02∶0.00003-0.00006∶0.00003-0.00006∶0.007-0.0095∶0.002-0.01∶0.0005-0.002∶0.4-0.8∶6-8的KNO3、NH4NO3、MgSO4、KH2PO4、CaCl2·H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、KI、CuSO4、CoCl2、HBO3、NAA、KT、谷氨酰胺和琼脂。
5.根据权利要求4所述的棉花再生苗生根培养基粉剂，其特征在于所述棉花再生苗生根培养基粉剂包含有重量份数比为包含有重量份数比为2.85∶1.47∶0.78∶0.255∶0.667∶0.028∶0.025∶0.01∶0.00004∶0.00004∶0.0093∶0.006∶0.002∶0.6∶6.8的KNO3、NH4NO3、MgSO4、KH2PO4、CaCl2·H2O、FeSO4·7H2O、MnSO4·4H2O、KI、CuSO4、CoCl2、HBO3、NAA、KT、谷氨酰胺和琼脂。
6.根据权利要求4或5所述的棉花再生苗生根培养基粉剂，其特征在于所述棉花再生苗生根培养基粉剂中添加有重量份数比为2∶0.4∶0.5∶0.5∶100的甘氨酸、VB1、VB6、烟酸或/和肌醇中的一种或几种微量添加剂。
7.一种棉花再生苗生根培养的方法，是将再生苗的基部插入棉花再生苗生根培养基中，在20-25℃、散光下保湿培养12-18天，然后在光下通风培养。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述棉花再生苗生根培养基使用前要在125-128℃下，灭菌12分钟。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于培养前，将棉花枝条的基部削成楔形。
全文摘要
本发明公开了一种棉花再生苗生根培养方法及其专用培养基。棉花再生苗生根培养基水剂，每1000mL水中含有下述物质KNO
文档编号A01H4/00GK1908160SQ20051008896
公开日2007年2月7日 申请日期2005年8月3日 优先权日2005年8月3日
发明者李付广, 张朝军, 王玉芬, 武芝侠, 李凤莲, 刘传亮 申请人:中国农业科学院棉花研究所