专利名称：一种胎牛血清生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种胎牛血清，更具体地说涉及一种胎牛血清的生产工艺。
技术背景胎牛血清系健康怀孕母牛八月龄左右胎牛的血液为原料，经无菌采集、低 温分离，微孔过滤分装而成。具有极佳的促细胞生长作用，适用于原代和传代 细胞株的保藏及娇贵细胞的培养，主要用于高、精、尖的生物和医学实验当中。 目前，由于国内技术上的原因，暂时还没有真正意义上的胎牛血清，几乎全部依赖进口，进口胎牛血清价格偏高，每升达到6000元左右。从美国、欧洲进口 胎牛血清不仅成本高，而且有疯牛病的隐患。发明内容本发明的目的是提供一种胎牛血清生产工艺，通过对胎牛血清生产的关键 过程，原血清的采集和生产过程的控制，开发并规模化生产高端优化的胎牛血 清产品，彻底改变我国胎牛血清完全依赖国外进口的状况，大幅度提升中国牛 血清产业的技术层次和产品级别。本发明包括全封闭无菌采集、低温分离、微孔膜过滤，其特点是将怀孕8个月左右的母牛进行剖腹产，产前采用侧卧保定方法，麻醉采用全身麻醉和术 部局部麻醉相结合的方法。手术切口位置选择在左肷窝腹壁的三分之一处，髂
结节下角IO公分的下方为起始位置，作反斜杠"/"标记，切口长为30公分， 到左乳房静脉前8公分处。切至腹膜时，用止血钳提出腹膜作一切U，再用手 术剪剪开腹膜，找准于宫，前推瘤胃，双手抱出子宫，隔着子宫壁握住胎牛的 脚或头，将子宫大弯拉出腹壁切口处，在子宫与腹壁切口之间塞上大块灭菌纱 布后，沿子宫角大弯，避开子宫阜，作一与腹壁切口等长的切口。然后抓住胎 牛前两肢，抬出胎牛带进洁净室层流罩下的采血架上，将其背高头低，头部朝 右悬挂保定。胎牛拉出后缝合母牛子宫，在此同时对胎牛也进行心脏穿刺采血。 缝合子宫采用3#羊肠线，然后用0.9%生理盐水冲洗腹腔，清理千净后，在子 宫切口处涂上大油剂，将子宫纳入腹腔，对整个腹腔作无菌处理，最后依次作 腹腔缝合。心脏穿刺采血前做好采血器械的准备和消毒工作，取一 30cm长的 20mm穿刺采血管，穿刺采血管通过离心瓶瓶盖，并固定在离心瓶瓶盖上，用牛 皮纸包裹严密，再用高压蒸汽灭菌器高压1个小时。在第三肋间胸骨左缘的lH 中，用听诊器来确定心跳最显的部位，用75%的酒精檫试消毒，最后将穿刺采血 管针头垂直刺入心脏，血液随即通过采血管进入离心瓶内。 一头胎牛一个瓶， 采血完毕，立即换上无孔瓶盖。将离心瓶放入大容量冷冻离心机以3400转/分 的转速离心30分钟，析出血清在洁净室的超净台上收集到己灭菌的容器内冷冻 保存。胎牛血清成品的生产在净化车间内进行，首先做好原血清的解冻工作， 将原血清整齐地摆放在融冻间的铁架上，核对容器编号，做好记录，用26° C 热风均匀地循环整个房间，使原血清化开。过滤和分装在局部百级下进行，采 用进口的微孔过滤膜，过滤孔径为0.1um，经过3次过滤；成品分装贴完瓶签 后，放入-2(TC以下速冻库内快速冷冻24小时。本发明的优点是目前，胎牛血清几乎全部依赖进口，进口胎牛血清价格 偏高，达到每升6000元左右。从美国、欧洲进口胎牛血清不仅成本高，而且有
疯牛病的隐患。而我们采用本工艺生产的胎牛血清价格每升只有4000—5000元 左右，彻底改变了我国胎牛血清完全依赖国外进口的状况，这样可以大幅度提 升中国血清产业的技术层次和产品级别。
具体实施方式
胎牛原血清采集的关键技术主要是怀孕母牛的剖腹产和胎牛的全封闭无菌 心脏穿刺采血。对怀孕8个月左右的母牛进行剖腹产，产前采用侧卧保定方法， 保定时两前腿绑好向前拉，两后腿绑好向后拉，头部用绳固定。麻醉时采取全 身麻醉和术部局部麻醉相结合的方法，即全身麻醉采用2%普鲁卡因腰旁神经干 传导麻醉，局部麻醉分别麻醉第18肋间神经、髂腹下神经和髂腹股沟神经。确 实有效的麻醉是顺利进行剖腹产的重要保证。因此，找准注射位置，垂直进针 达腰椎横突游离端前角或后角，并将针前移至横突前缘或后缘下刺1公分左右， 注射药液10ml，然后提至皮下注射10ml，分别各点注射。术部表面用0.5%盐 酸普鲁卡因麻醉。用囊肿穿刺针，外套16号针头作护套保护进针，边推液边后 退，效果较好。手术切口位置选择在左肷窝腹壁的上三分之一处，髂结节下角 10公分的下方为起始部位，作反斜杠"/ "标记，切口长约30公分，到左乳房 静脉前8公分左右处。该切口的优点是靠近子宫角，便于术中缝合快速收縮的 子宫，其次是内容物不易流入腹腔，减少腹腔被污染而带来腹、盆两腔感染而 引发的生殖系统器质性病变的风险。手术切口处一定要剃毛，并作严格消毒， 防止切口处的毛物污染术者的手及器械而引发术后感染伤口及两腔。确保无菌 操作，防止污染腹腔，正确科学选定手术部位是成功手术的前提，也利于后续 操作的顺利进行。手术时，术者手、器械要严格消毒。切开皮肤，肌层要果断， 避免复刀。为避免手术刀伤及子宫或瘤胃，当切开腹腔切至腹膜时，用止血钳 提出腹膜作一切口，再用手术剪剪开腹膜，找准子宫切口，前推瘤胃，双手抱 出子宫，隔着子宫壁握住胎牛的脚或头，小心地将子宫大弯拉出腹壁切l」处， 在子宫与腹壁切口之间塞上大块灭菌纱布后，沿着子宫角大弯，避开子宫阜， 作一与腹壁切口等长的切口。先剥离一部分子宫切口附近胎膜，然后抓住胎牛 两前肢，由助手抬出胎牛后迅速带进洁净室，空气洁净度达到百级的层流罩卩 的采血架上，将其背高头低、头部朝右悬挂保定。快速、有效的子宫缝合是手 术成败的关键，由于产出胎牛后的子宫收縮极快，因此，在胎牛拉出后一定要快速缝合子宫，在此同时对胎牛也进行心脏穿剌采血。缝合子宫使用3#羊肠线， 第一层对子宫切口全层连续缝合，第二层进行浆膜肌层连续内翻缝合术口，然 后用0.9%生理盐水对腹腔冲洗、清理干净，在腹壁切口处涂上大油剂，把子宫 纳入腹腔。对整个腹腔作无菌化处理，最后依次作腹腔缝合，并对各层作无菌 化处理。在整个腹腔内操作过程中，严格做到无菌操作，杜绝术者手、针、刀、 剪等器械碰及卵巢、输卵管等生殖附件。严格控制羊水、胎盘等碎片流入腹腔， 以免引起腹腔内感染。子宫要缝合确实，以防止子宫内容物流入腹腔引发的术 后感染。该阶段操作中，关键是控制腹腔、盆腔污染，避免两腔感染而引发生 殖道附件器质性病变而致不育。胎牛心脏穿刺采血前应做好采血器械的准备和消毒工作。取一 30cm长的 20mm穿刺采血管，然后将离心瓶瓶盖打孔，其孔径与穿刺采血管直径相同，使 穿刺采血管通过1000ml离心瓶瓶盖，并固定在离心瓶瓶盖上，用牛皮纸包裹严 密，再用高压蒸汽灭菌器12rC高压'l个小时左右。这样穿刺采血管和离心瓶连 成一体，可以减少胎牛血接触空气污染机会，同时避免了由于红细胞破裂，血 清溶血。采血前要探明心脏搏动最强部位，通常在第三肋间胸骨左缘的正中， 用听诊器来确定心跳最显的部位，用75%的酒精擦试消毒后，将穿刺采血管针
头垂直刺入心脏，血液随即通过釆血管进入离心瓶内。注意事项(l)动作宜迅 速，縮短在心脏内的留针时间和防止血液凝固。(2)如果针头已进入心脏但抽不 出血时，应将针头稍微后退一点。(3)在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心， 肺。 一头胎牛一个瓶，待血液收集完后，立即换掉采血时使用的离心瓶瓶盖， 拧上无孔的离心瓶瓶盖。将离心瓶放入大容量冷冻离心机内，以3400转/分的转 速离心30分钟，再将析出的血清在洁净室的超净台上收集到已灭菌的容器内， 并迅速冷冻保存。原血清在整个贮存过程温度要求在-2(TC以下。为了便于溯源， 从开始就要做好各项记录，如母牛的相关资料、生产过程记录、 一只胎牛血清 的数量及其装入容器的编号等等。胎牛血清成品生产在净化车间内进行，首先做好原血清的解冻工作。根据 生产计划，将原血清整齐地摆放在融冻间的铁架上(要一一核对容器编号，并 做好记录)，用26"C热风均匀地循环整个房间，使得原血清能化开。尤其过滤和 分装两个关键过程是在空气洁净度达到百级的层流罩下的洁净台上进行的。采 用进口的微孔过滤膜，最小过滤孔径为0.1um (100nm)，经过3次过滤。成品 分装贴完瓶签后马上放入-2(TC以下速冻库内快速冷冻24小时。胎牛血清成品 的贮存也在-2(TC以下。
权利要求
1、一种胎牛血清生产工艺，包括全封闭无菌采集、低温分离、微孔膜过滤，其特征在于a、将怀孕8个月的母牛进行剖腹产，产前采用侧卧保定方法；麻醉采用全身麻醉和术部局部麻醉相结合的方法；b、手术切口位置选择在左肷窝腹壁的三分之一处，髂结节下角10公分的下方为起始位置，作反斜杠“/”标记，切口长为30公分，到左乳房静脉前8公分处；c、切至腹膜时，用止血钳提出腹膜作一切口，再用手术剪剪开腹膜，找准子宫，前推瘤胃，双手抱出子宫，隔着子宫壁握住胎牛的脚或头，将子宫大弯拉出腹壁切口处，在子宫与腹壁切口之间塞上大块灭菌纱布后，沿子宫角大弯，避开子宫阜，作一与腹壁切口等长的切口，然后抓住胎牛前两肢，抬出胎牛带进放置在洁净室层流罩下的采血架上，将其背高头低，头部朝右悬挂保定；d、胎牛拉出后缝合母牛子宫，在此同时对胎牛也进行心脏穿刺采血；缝合子宫采用3#羊肠线，然后用0.9％生理盐水冲洗腹腔，清理干净后，在子宫切口处涂上大油剂，将子宫纳入腹腔，对整个腹腔作无菌处理，最后依次作腹腔缝合；胎牛心脏穿刺采血是在洁净室层流罩下进行的，心脏穿刺采血前要做好采血器械的准备和消毒工作，取一30cm长的20mm穿刺采血管，穿刺采血管通过离心瓶瓶盖，并固定在离心瓶瓶盖上，用牛皮纸包裹严密，再用高压蒸汽灭菌器高压1个小时；在第三肋间胸骨左缘的正中，用听诊器来确定心跳最显的部位，用75％的酒精檫试消毒，最后将穿刺采血管针头垂直刺入心脏，血液随即通过采血管进入离心瓶内；一头胎牛一个瓶，采血完毕，立即换上无孔瓶盖；e、将离心瓶放入大容量冷冻离心机中，以3400转/分的转速离心30分钟，析出血清在超净台上收集到已灭菌的容器内冷冻保存；f、胎牛血清成品生产在净化车间内进行，首先做好原血清的解冻工作，将原血清整齐地摆放在融冻间的铁架上，核对容器编号，做好记录，用26℃热风均匀地循环整个房间，使原血清化开；g、胎牛血清的过滤和分装在局部百级下进行，采用进口的微孔过滤膜，过滤孔径为0.1μm，经过3次过滤；成品分装贴完瓶签后，放入-20℃以下速冻库内快速冷冻24小时。
2. 根据权利要求1所述的一种胎牛血清生产工艺，其中所说的产前侧卧保 定方法是将母牛两前腿绑好向前拉，两后腿绑好向后拉，头部用绳固定。
3. 根据权利要求1所述的一种胎牛血清生产工艺，其中所说的麻醉时采用 全身麻醉和术部局部麻醉相结合的方法是全身麻醉采用2%普鲁卡因腰旁神经 干传导麻醉；局部麻醉分别麻醉第18肋间神经，髂腹下神经和髂腹股沟神经。
全文摘要
本发明涉及一种胎牛血清生产工艺。本发明包括全封闭无菌采集、低温分离、微孔膜过滤，其特点是将怀孕8个月左右的母牛进行剖腹产，产前采用侧卧保定方法，麻醉采用全身麻醉和术部局部麻醉相结合的方法。对胎牛进行全封闭无菌心脏穿刺采血，待血液收集完后，用大容量冷冻离心机以3400转/分的转速离心30分钟，析出的血清在“局部百级”下收集到已灭菌的容器内，迅速冷冻保存。本发明的优点是进口胎牛血清价格偏高，达到每升6000元左右。从美国、欧洲进口胎牛血清不仅成本高，而且有疯牛病的隐患。而我们采用本工艺生产的胎牛血清价格每升只有4000-5000元左右，彻底改变了我国胎牛血清完全依赖国外进口的状况。
文档编号A61D1/00GK101112334SQ20061010447
公开日2008年1月30日 申请日期2006年7月28日 优先权日2006年7月28日
发明者富小刚, 马忠仁 申请人:兰州民科生物技术中心