专利名称：：一种利用生物疫苗浸种技术防治水稻条纹叶枯病的方法
技术领域：
：本发明涉及水稻病害防治领域，具体涉及水稻条纹叶枯病的防治方法。
背景技术：
：水稻条纹叶枯病是由灰飞虱等害虫传播条纹病毒(RSV)引起的一种病毒病。自上世纪末，该病毒病在江苏以及周边地区重新抬头，最近几年已成为江苏地区水稻生产上最重要的病害，给江苏省的水稻生产和农民的经济利益造成了灾难性影响。这几年因灰飞虱引起的条纹叶枯病一项，就给江苏地区的经济每年造成近100亿元的损失。由于水稻品种和栽培制度的多样化、以及条纹病毒毒源的不断累积，水稻条纹叶枯病的发生态势还将会持续严重。在生产上，为了防治这种病毒病，在没有好的病毒钝化剂的背景下，不得不采取"治虫防病、切断毒源"的策略。为此，在大麦田、小麦田、秧池田以及本田，不得不大量和重复使用吡虫啉、锐劲特等化学农药防治灰飞虱。虽然在水稻一个生育期要用多次乃至10多次杀虫剂，仍然不能解决病毒病流行的问题。因为只要残存10%或20%的灰飞虱带毒个体，它们仍能在短时间内传毒并导致稻株严重发病。不但如此，化学农药的大量使用还造成了灰飞虱抗药性的上升、稻田生态系统的严重破坏和农民们生产成本的不断加大。由于对条纹叶枯病付出了沉重的代价和成本，农民们现在对这个病害已是深恶痛绝，防治效果不好后又怨声载道。因此，研制和开发防病与控病效果极佳的新型生物农药，对于控制条纹叶枯病的发生流行有重要的现实意义和深远的历史意义。国内外研究表明，引起水稻条纹叶枯病的条纹病毒(Ricestripevirus，RSV)是纤细病毒属(Tenuivirus)的代表成员。日本对其分离物进行了全序列测定，基因组全长为17145bp，由4种单链RNA组成，除RNA1采用负链编码外，RNA2RNA4皆采用双义(Am-bisense)的编码策略。至目前止，条纹病毒的基因组结构和序列已很明确，相关功能基因的功能也基本明确。在此基础上，梁国华等已研制并生产出防治条纹病毒的干扰病毒基因表达载体(中国专利申请200610038267.5)，作为生物疫苗。然而，由基因干扰技术(RNAi)研制的生物疫苗目前只能以注射、饲喂、基因枪、转基因等方式进入目标生物体内，这对于防治一些动物的病毒病会有较好效果，而对于生产上防治水稻条纹叶枯病带来了不可操作性。
发明内容为了解决生物疫苗在生产上大规模运用的技术难题，本发明提供了一种新的方法，即通过"生物疫苗"浸种技术防治水稻条纹叶枯病。本发明所采用的技术方案是一种利用生物疫苗浸种防治水稻条纹叶枯病的方法，是在水稻浸种时以"生物疫苗"加渗透性强的制剂代替水，以浸种的方式让"生物疫苗"自动渗透入稻谷，并在稻苗体内表达。水稻播种前需要浸种催芽，本发明利用这一基本的农事操作，在水稻浸种时将生物疫苗加一些渗透性强的制剂以浸种的方式，让其自动渗透入稻谷，并在稻苗体内表达，从而有效地阻断了水稻植株体内条纹病毒的增殖。本发明中所说的生物疫苗是专门用于防治条纹病毒RSV的疫苗。在上述方法中所说的渗透剂，一般是常规的。但我们运用系统学方法，研究了各种渗透剂的渗透作用，从中筛选出渗透性好、对水稻无副作用且价格低廉的几种渗透剂，如月桂氮酮、高渗、有机硅等；渗透剂的添加量是在100体积单位生物疫苗中添加0.01到1.0体积单位的渗透剂。本发明具有以下有益效果A.所选用的几种渗透剂渗透性强，对水稻生长无影响。与不添加渗透剂的"生物疫苗"相比，添加了渗透剂的"生物疫苗"在稻株体内能检测到疫苗的存在;B.生物疫苗添加一定浓度的渗透剂后，对水稻发芽、出苗无影响。与对照相比，只要渗透剂添加浓度控制得当，不会对水稻种子的发芽与出苗产生不良影响；C.控制条纹病毒的增殖效果显著。室内盆栽试验和大田试验以及通过系统检测，表明以"生物疫苗"浸种技术防治水稻条纹叶枯病效果显著。首先，通过系统检测，生物疫苗在稻株体内能维持40天以上；其次，将带毒率达20%的灰飞虱接入经生物疫苗浸种处理过的稻株上，或者以田间大面积发生的灰飞虱迁入经生物疫苗浸种处理过的大田稻苗上，均能检测到条纹病毒的存在;第三，在出苗后15天左右，开始系统调査稻株发病情况，至出苗后83天结束。结果表明，经生物疫苗浸种处理过的水稻，条纹叶枯病病穴(枝)率比对照减少65%以上，比不添加渗透剂的减少40%以上，显示出防治条纹叶枯病的较好效果。具体实施例方式本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体的实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。所用试剂的来源、商品名以及有必要列出其组成成分者，均在首次出现时标明，其后所用相同试剂如无特歹朱说明，均以首次标明的内容相同。下述实施例中所说的生物疫苗是己公开的水稻条纹叶枯病干扰病毒基因表达载体，可参照中国专利申请200610038267.5制备。在下述实施例中，A指渗透剂月桂氮酮，B指渗透剂高渗，C指渗透剂有机硅。实施例1-在水稻浸种时以生物疫苗添加不同剂量的渗透剂代替水，研究几种渗透剂不同浓度对水稻发芽与出苗的影响(江苏扬州)，结果如表K2所示。表l200粒稻谷发芽率与出苗率试验(稻种先经漂洗涤除瘪粒，3.10-18)处理<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2高浓度渗透剂处理结果(100粒，3.10-18)(两个对照200粒，其它均100粒)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>试验结果表明，在生物疫苗中添加渗透剂浓度在0.01%-0.1%(体积)之间，对水稻的发芽与出苗影响不大，但达到0.3%及以上时，对水稻的发芽与出苗就有一定影响。实施例2:水稻浸种出苗后"生物疫苗"在稻株体内残留测定(江苏扬州)桶栽以生物疫苗浸种处理的稻苗，于出苗后15天、35天以PCR技术检测稻株体内是否仍带有"生物疫苗"。结果表明15天后对照疫苗(0/9)、对照水(0/9)、Cl(6/9)、C0.5(0/9)、C0.1(0/9)、Bl(1/9)、B0.5(0/9)、B0.1(6/9)、Al(7/9)、A0.5(3/9)、A0.1(1/9)(注1/9示测了9株稻苗，有l株中带疫苗)35天后:Cl(7/10)、C0.5(3/10)、C0.1(7/10)、Bl(2/10)、B0.5(5/10)、B0.1(7/10)、Al(6/10)、A0.5(4/10)、A0.1(7/10)(注1/10表示测了IO株稻苗，有l株中带疫苗，Cl表示添加了千分之l(体积)的c渗透剂，余类推)实施伊j3:生物疫苗浸种技术防治条纹叶枯病的效果测定(江苏扬州)以水泥池为试验场所，播种不同处理的稻谷，出苗后系统检查稻株发病情况。以下是苗后83天的检査结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>上表说明，以清水为对照，经过生物疫苗浸种处理后对条纹叶枯病的校正防效在55.6%-100.0%之间，显示出浸种处理的较好防效。(注处理A0.5表示在"生物疫苗"中添加千分之0.5(体积)的A渗透剂，余类推；"疫苗"处理是指没有添加任何渗透剂，仅是"生物疫苗")权利要求1、一种利用生物疫苗浸种防治水稻条纹叶枯病的方法，其特征在于是在水稻浸种时以生物疫苗加渗透剂代替水，以浸种的方式让生物疫苗渗透入稻谷，并在稻苗体内表达。2、根据权利要求1所说的防治水稻条纹叶枯病的方法，其特征在于，其中所说的渗透剂是月桂氮酮、高渗或有机硅。3、根据权利要求2所说的防治水稻条纹叶枯病的方法，其特征在于，其中所说的渗透剂的添加量为在100体积单位生物疫苗中添加0.01到1.0体积单位的渗透剂。全文摘要本发明涉及水稻病害防治领域，具体涉及水稻条纹叶枯病的防治方法。所说的防治方法是在水稻浸种时以生物疫苗加渗透剂代替水，以浸种的方式让生物疫苗渗透入稻谷，并在稻苗体内表达。经生物疫苗浸种处理过的水稻，条纹叶枯病病穴(枝)率比对照减少65％以上，比不添加渗透剂的减少40％以上，显示出防治条纹叶枯病的较好效果。文档编号A01C1/08GK101317506SQ200810022400公开日2008年12月10日申请日期2008年7月11日优先权日2008年7月11日发明者勇周,杨益众,梁国华,爽王申请人:扬州大学