专利名称：一种紫叶白桦的微繁方法
技术领域：
本发明涉及一种微繁方法。
背景技术：
紫叶白桦0Se^/apo;w/i/b/z'a x抓^^/w 'Royal Frost')是欧洲白桦和亚洲白 桦经过反复杂交并根据叶色特征长期选育出来的新品种，英文名为"5&w/a Royal Frost Penci-2"。紫叶白桦是适合一年四季观赏的优良树种，其叶片在整 个春季和夏季保持为葡萄酒红色，秋季则变为黄色、橙黄色或橙红色，冬季叶 片脱落后，其肉桂色至白色的片状剥落状的树干同样具有很高的观赏价值。紫 叶白桦还具有抗虫性强，喜光照，耐潮湿，适应性广，易种植的特点。由于紫 叶白桦常表现为花无育性、不产生种子或产生的种子不能形成具有稳定遗传性 状的小植株，所以一直以嫩枝扦插或嫁接的方式进行繁殖。紫叶白桦经由试管 内无菌苗的形式引入我国，引进后经过移栽成活，但引进的数量有限，且成本 高，难实现规模化生产；如果利用嫩枝扦插或嫁接的方式进行繁殖，存在苗木 幼年期长，繁殖周期长，增殖效率低、苗木成活率不高的问题，因此很难在短 时间内实现紫叶白桦苗木的大量扩繁和规模化生产，使紫叶白桦的推广栽培和 资源利用受到了极大的限制。
发明内容
本发明的目的是为了解决紫叶白桦的繁殖周期长、增殖效率低、成本高、 成活率低和遗传稳定性差的问题，而提供的一种紫叶白桦的微繁方法。
紫叶白桦的微繁方法按以下步骤实现 一、将清洗后的紫叶白桦外植体在 超净工作台上用质量浓度为75。/。的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份质量浓度为 75%的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3 5次，再用质量浓度为0.1% 的氯化汞溶液消毒12 15min，然后用无菌水冲洗3 5次；二、将消毒后的 外植体切割成带有顶芽或2 3个腋芽、且长度为1.5 3cm的茎段，然后接种 于诱导培养基中，在温度为22 26t:、湿度为70% 80%、光照强度为100 200pmohcm^s—1、每天光照12 24h、每20 30天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养4 6个月，获得微枝(无根试管苗)；三、将微枝的叶片去掉，切割 成带有顶芽或1 2个腋芽、且长度为1 1.5cm的茎段，然后接种于增殖培养 基中，在温度为22 26°C、湿度为70°/。 80%、光照强度为100 20(VmoLcm—、'1、每天光照12 24h、每20 25天更换新鲜的增殖培养基的条 件下培养至微枝生长长度为0.5 1.5cm;四、将增殖后的微枝接种于增壮培养 基中，在温度为22 26°C、湿度为70% 80%、光照强度为100 200)amohcm'、"、每天光照12 24h的条件下培养至微枝生长长度为2.5 4.5cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁；其中步 骤二中诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.2 0.5mg/L 的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的琼脂，pH值为5.2; 步骤三中增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.5 1.5 mg/L 的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的琼脂，pH值为5.2; 步骤四中增壮培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.1 0.5mg/L 的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的琼脂，pH值为5.2; 步骤四中生根基质按体积份数比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠岩组 成，生根基质含水量为50% 60%。
本发明中紫叶白桦的微繁，繁殖周期短，效率高，其增殖效率为每30 40天增殖30 40倍，而且利用母株上原有的顶芽或腋芽直接进行芽的增殖， 所产生的后代遗传稳定性好；增壮培养后的微枝在试管外不需要任何化学试剂 和植物激素可直接生根成完整的再生植株，生根和驯化同时进行，操作技术简 单，省工省时，成本低，比现有方法节省30% 50%费用，且生根率和移苗成 活率均可达100%,实现了紫叶白桦的快速、高效繁殖及大规模推广种植的目 标。
具体实施例方式
具体实施方式
一本实施方式紫叶白桦的微繁方法按以下步骤实现一、 将清洗后的紫叶白桦外植体在超净工作台上用质量浓度为75%的乙醇溶液浸
泡60s后再用另一份质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡60s,然后用无菌水冲洗 3 5次，再用质量浓度为0.1%的氯化汞溶液消毒12 15min，然后用无菌水 冲洗3 5次；二、将消毒后的外植体切割成带有顶芽或2 3个腋芽、且长度
5为1.5 3cm的茎段，然后接种于诱导培养基中，在温度为22 26。C、湿度为 70% 80%、光照强度为100 200pmol'cm^s"、每天光照12 24h、每20 30天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养4 6个月，获得微枝(无根试管苗); 三、将微枝的叶片去掉，切割成带有顶芽或1 2个腋芽、且长度为l 1.5cm 的茎段，然后接种于增殖培养基中，在温度为22 26。C、湿度为70% 80%、 光照强度为100 20(Himol'cm々's'1、每天光照12 24h、每20 25天更换新鲜 的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为0.5 1.5cm;四、将增殖后的微 枝接种于增壮培养基中，在温度为22 26°C、湿度为70% 80%、光照强度 为lOONSOOiimol'cmAs^每天光照12 24h的条件下培养至微枝生长长度为 2.5 4.5cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁；其 中步骤二中诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.2 0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的琼脂，pH 值为5.2;步骤三中增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.5 1.5 mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的琼脂，pH 值为5.2;步骤四中增壮培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.1 0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、 20 30g/L的蔗糖和6 7g/L的琼脂，pH 值为5.2;步骤四中生根基质按体积份数比由5份的草炭、4份的蛭石和4份 的珍珠岩组成，生根基质含水量为50% 60%。
本实施方式中选择生长旺盛的幼嫩植株为采集外植体的母株，以春天新萌 发的枝条或人工催发的枝条为外植体。
本实施方式步骤一中清洗是用清水洗净外植体(水中可加入一滴洗涤剂)， 清洗时用细毛刷轻轻刷洗枝条表面的灰尘和杂菌，注意不要损伤休眠芽，然后 将枝条在自来水下冲洗0.5 lh。
本实施方式步骤三中茎段接种于增殖培养基，是将具顶芽的茎段垂直插入 到增殖培养基中，深度为0.5cm;将具腋芽的茎段平放在增殖培养基表面。
本实施方式步骤三中微枝的增殖培养，增殖效率为每30 40天增殖30 40倍，可以转接到新鲜的增殖培养基中继续培养，步骤三可循环进行，直至 产生能够满足需求的微枝数量。
本实施方式步骤四中增壮培养使细弱微枝的直径加粗，叶片增大且加厚，能提高微枝生根存活率。
本实施方式步骤四中生根培养室温度为22 26°C，湿度为70% 80%， 每天光照12 24h，光照强度为100 200 nmol'cm义s"。
本实施方式步骤四中生根培养可与驯化培养同时进行，是将微枝周围的生 根基质压实并在生根基质表面和微枝叶面上略喷水，然后覆上保鲜膜在培养室 内培养；每天以喷洒的方式浇水2次，每天早晚揭膜2 5min通风换气，每隔 7天左右喷施1次0.2%的多菌灵溶液预防病虫害，培养2周时生根率可达 100%， 2周后逐步去掉保鲜膜、增强通风和光照，培养60天时生根后的微枝 生长长度可达20cm以上。
本实施方式中紫叶白桦的微繁完成后，可进行苗木移栽，即生根后的微枝 生长长度达20cm后移栽到塑料小钵中(小钵中的培养基质为草炭土和沙土的 混合物)，然后放到温室或大棚中进行培养，培养温度为15 30°C，湿度为60% 以上，注意通风，移栽成活率达100%。
具体实施方式
二本实施方式与具体实施方式
一的不同是步骤一中用无菌 水洗净冲洗4次，再用质量浓度为0.1%的氯化汞溶液消毒14min，然后用无 菌水冲洗4次。其它步骤及参数与具体实施方式
一相同。
本实施方式中氯化汞溶液可加入一滴吐温-20。
具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
二的不同是步骤二中外植体 切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为2cm的茎段。其它步骤及参数与具体 实施方式二相同。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
三的不同是步骤二中在温度 为24"C、湿度为75%、光照强度为16(^mol'cm'、'1、每天光照16h、每25天 更换新配制诱导培养基的条件下培养5个月。其它步骤及参数与具体实施方式
三相同。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
四的不同是步骤三中切割成 带有顶芽或2个腋芽、且长度为1.2cm的茎段。其它步骤及参数与具体实施方 式四相同。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
五的不同是步骤三中在温度 为25。C、湿度为78%、光照强度为140frniol'cm'2's"、每天光照18h、每22天更换新配制增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为lcm。其它步骤及参数 与具体实施方式
五相同。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
六的不同是步骤四中在温度
为23°C、湿度为76%、光照强度为180^imol'cm、"、每天光照20h的条件下 培养至微枝生长长度为3cm。其它步骤及参数与具体实施方式
六相同。
权利要求
1、一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于紫叶白桦的微繁方法按以下步骤实现一、将清洗后的紫叶白桦外植体在超净工作台上用质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s后再用另一份质量浓度为75％的乙醇溶液浸泡60s，然后用无菌水冲洗3～5次，再用质量浓度为0.1％的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用无菌水冲洗3～5次；二、将消毒后的外植体切割成带有顶芽或2～3个腋芽、且长度为1.5～3cm的茎段，然后接种于诱导培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm-2·s-1、每天光照12～24h、每20～30天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养4～6个月，获得微枝；三、将微枝的叶片去掉，切割成带有顶芽或1～2个腋芽、且长度为1～1.5cm的茎段，然后接种于增殖培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm-2·s-1、每天光照12～24h、每20～25天更换新鲜的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为0.5～1.5cm；四、将增殖后的微枝接种于增壮培养基中，在温度为22～26℃、湿度为70％～80％、光照强度为100～200μmol·cm-2·s-1、每天光照12～24h的条件下培养至微枝生长长度为2.5～4.5cm，再扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁；其中步骤二中诱导培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.2～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤三中增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.5～1.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中增壮培养基是以WPM培养基为基本培养基，且还包含0.1～0.5mg/L的6-苄基氨基嘌呤、20～30g/L的蔗糖和6～7g/L的琼脂，pH值为5.2；步骤四中生根基质按体积份数比由5份的草炭、4份的蛭石和4份的珍珠岩组成，生根基质含水量为50％～60％。
2、 根据权利要求1所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤一 中用无菌水冲洗4次，再用质量浓度为0.1%的氯化汞溶液消毒14min，然后 用无菌水冲洗4次。
3、 根据权利要求2所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤二 中外植体切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为2cm的茎段。
4、 根据权利要求3所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤二 中在温度为24。C、湿度为75%、光照强度为WOpmol'cm-W每天光照16h、 每25天更换新鲜的诱导培养基的条件下培养5个月。
5、 根据权利要求4所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤三 中切割成带有顶芽或2个腋芽、且长度为1.2cm的茎段。
6、 根据权利要求5所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤三 中在温度为25。C、湿度为78%、光照强度为MOpmol'cm-W每天光照18h、 每22天更换新鲜的增殖培养基的条件下培养至微枝生长长度为lcm。
7、 根据权利要求6所述的一种紫叶白桦的微繁方法，其特征在于步骤四 中在温度为23°C、湿度为76%、光照强度为180^imol'cm、"、每天光照20h 的条件下培养至微枝生长长度为3cm。
全文摘要
一种紫叶白桦的微繁方法，它涉及一种微繁方法。它解决了紫叶白桦的繁殖周期长、增殖效率低、成本高和成活率低的问题。方法1.外植体的消毒；2.将外植体切割成茎段，然后诱导培养，获得微枝；3.将微枝切割成茎段，然后增殖培养基；4.将增殖后的微枝进行增壮培养，然后扦插于生根基质中进行生根培养后即完成紫叶白桦的微繁。本发明中紫叶白桦的微繁，繁殖周期短，效率高，遗传稳定性好，其增殖效率为每30～40天增殖30～40倍，操作技术简单，省工省时，成本低，比现有方法节省30％～50％费用，且生根率和移苗成活率均可达100％。
文档编号A01H4/00GK101502237SQ20091007134
公开日2009年8月12日 申请日期2009年1月24日 优先权日2009年1月24日
发明者玲 杨, 梁立东, 沈海龙 申请人:东北林业大学;沈海龙;杨 玲