专利名称：大规模生产辣椒核雄性不育植株的方法
技术领域：
本发明主要涉及一种利用植物组织培养技术大规模生产辣椒核雄性不育两用系
不育株的方法，特别涉及一种提高再生植株数量的方法。
背景技术：
辣椒是一种十分重要的茄果类蔬菜，它不仅被大量用作调味品，还被开发用于健 康食品和药物。辣椒杂交优势十分明显，用核雄性不育两用系做母本生产杂交一代种子是 辣椒杂交优势利用的主要手段，用辣椒核雄性不育两用系做母本进行杂交辣椒的生产，播 种的辣椒核雄性不育两用系中有50%的可育株，需要在花期拔除所有的可育株，有时因为 拔除可育株不完全，容易造成杂交种子的纯度低。 到目前为止，用于制种的辣椒核雄性不育两用系的不育株主要还是通过在花期将 核雄性不育两用系中的50%的可育株拔除而获得，需要花费大量的人力；另外获得用于制 种的辣椒核雄性不育两用系的不育株也有通过叶片等进行组织培养获得再生植株，但辣椒 通过叶片等进行组织培养获得再生植株难度十分大，且变异比较严重，不具备实用性；还有 一种获得用于制种的辣椒核雄性不育两用系不育株的方法是通过扦插繁殖的方式，但扦插 繁殖的繁殖系数小，多代繁殖还有退化的现象。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，利用植物组织培养技术，提供一种大规 模生产辣椒核雄性不育植株的方法。 本发明通过下列技术方案完成一种大规模生产辣椒核雄性不育植株的方法，它 包括下述步骤 A、由辣椒核雄性不育两用系不育株带腋芽的茎段，接种在腋芽诱导培养基上，在 人工控制的环境条件下，诱导腋芽的萌发伸长，形成丛生苗； B、由丛生苗分割成带腋芽的茎段，接种在腋芽诱导培养基上，在人工控制的环境
条件下，诱导腋芽的萌发伸长，形成次级丛生苗； C、在相同的条件下，通过重复的继代培养扩增丛生苗； D、分割丛生苗，接种到不定根诱导培养基上，在人工控制的环境条件下，诱导不定 根的形成； E、选取生根多且健壮的植株去掉封口膜炼苗7 10d，然后洗净根系上的培养基，移 入含有珍珠岩和草炭土混合基质的营养钵并置于温室中，用塑料薄膜覆盖，5d后逐步揭去 薄膜通风，增加光照，及时补足营养钵水分，15 20d后将营养钵移至露地，10 15d后将幼苗 移到大田中。 本发明所说的丛生苗是在一个苗扩增培养基上通过重复继代培养大规模扩增生 产的。 所说A、 B、 C步骤中的腋芽萌发生长至具有4个以上节的丛生苗，丛生苗切割成具有单个节的茎段，将各个茎段移入腋芽诱导培养基，并在该培养基上进行腋芽诱导培养，通 过重复的茎段切割诱导培养来扩增丛生苗，将形成的丛生苗切割成单株，将各个单株移入 不定根诱导培养基，并在此培养基上进行不定根的诱导，形成完整的再生植株。
所述的E步骤的混合基质中珍珠岩与草炭土体积比为i : i 2 : i。 所说的腋芽诱导培养基为MS基础培养基，并在该培养基中添加质量比为3%的 蔗糖、0. 6 %的琼脂，0. 5 2. 0 %的苄基腺嘌呤，和0. 01 0. 1 %的a-萘乙酸，控制培养基pH 5. 8，在12TC下灭菌20min。所说的丛生芽不定根诱导培养基为1/2MS基础培养基，其中亚铁盐的含量与MS 培养基相同，在1/2MS基础培养基中还含有质量比为3%的蔗糖，0.6%的琼脂，0. 02 0. 1% 的a-萘乙酸，和0.02 0. 1X的吲哚丁酸，控制培养基pH 5.8，于12rC下灭菌20min。
所说的人工控制的环境条件为每天连续光照12 14h，温度24 26t:，光照强度 40 50翻l.m—2. s—、 和现有技术相比，本发明有如下优点或积极效果。 1、利用腋芽再生植株，接种材料不需要经过脱分化和再分化的过程，产生的再生 植株性状稳定、一致。 2、所接种的材料已经有带有腋芽，在培养时只需腋芽的萌发，技术难度较小。
3、通过将再生植株分割成带腋芽的茎段进行扩繁，繁殖系数大，每年能够产生大 量的再生植株。 4、所获得的植株都为雄性不育株，栽入大田后不需筛选可育株的过程，可以直接 用于杂交制种。
具体实施例方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明。
实施例1 辣椒核雄性不育两用系2003A大田植株的大规模组织培养，其步骤是 1.将市购的辣椒核雄性不育两用系2003A种植于露地农田中； 2.在花期，选其中的不育株，切取生长旺盛、无病虫害的枝条，去掉叶片，留下来的
枝条切成带单个茎节的茎段，用75%的酒精灭菌20秒，再用漂白粉处理25分钟，再用无菌
水漂洗4次； 3.将经过上述2步骤处理获得的无菌茎段接种到人工控制环境条件下的腋芽诱 导培养基上，培养30d，诱导腋芽的萌发生长；其中，腋芽诱导培养基为MS，并在其中添加 质量比为3%的蔗糖、0.6%的琼脂，0.5%苄基腺嘌呤(BA)，和0.01X的a-萘乙酸(NAA)， 控制培养基PH5. 8，在12rC下灭菌20min ;人工控制的环境条件为每天连续光照12h，温 度24°C ，光照强度40umol. m—2. s-1 ; 4.将萌发的腋芽继续培养30d，使其长成具有4个以上茎节的丛生苗，培养基配方 与环境条件与步骤3相同； 5.将具有4个以上茎节的丛生苗切割成带有一个茎节的茎段，将带有一个茎节的 茎段接种在腋芽诱导培养基上，培养30d，诱导次级腋芽的萌发，培养基配方与环境条件与 步骤3相同；的丛生苗，培养基配方 与环境条件与步骤3相同； 7.重复上述培养环节(每次继代的扩繁系数为10倍，每60天继代一次，单个茎段 每年可提供辣椒核雄性不育植株100万株)； 8.将具有4个以上茎节的辣椒核雄性不育植株的丛生苗分割成单个苗，并将各 个单苗接种到人工控制环境条件的不定根诱导培养基上，培养25d，诱导不定根的产生；其 中，不定根诱导培养基为1/2MS，而其中的亚铁盐的含量与MS培养基相同，并且该1/2MS培 养基中，还含有质量比为3%的蔗糖、0. 6%的琼脂、0. 02%的a-萘乙酸和0. 02%的吲哚丁 酸，控制培养基pH 5.8，在12rC下灭菌20min;环境条件与步骤3相同；
9.选取生根多且健壮的植株去掉封口膜炼苗7d，然后洗净根系上的培养基，移入 含有珍珠岩和草炭土 (珍珠岩和草炭土的体积比为1 : 1)混合基质的营养钵并置于温室 中，用塑料薄膜覆盖，5d后逐步揭去薄膜通风，增加光照，及时补足营养钵水分，15d后将营 养钵移至露地，10d后将幼苗移到大田中，即可得辣椒核雄性不育两用系不育株。
实施例2 辣椒核雄性不育两用系0908A大田植株的大规模组织培养，其步骤是
本例与实施例1基本相同，不同的仅仅是所用材料为市购的辣椒核雄性不育两 用系0908A;腋芽诱导培养基为，MS，并在其中添加质量比为2.0%的苄基腺嘌呤，和0. 1% 的a-萘乙酸；丛生芽不定根诱导培养基为1/2MS，而其中的亚铁盐的含量与MS培养基相 同，并且该1/2MS培养基中，还含有质量比为0. 1%的3-萘乙酸和0. 1%的吲哚丁酸；人工
控制的环境条件为每天连续光照14h，温度26t:，光照强度50umol.m—2. s—、去掉封口膜炼
苗时间为10d，营养钵中的混合基质为珍珠岩和草炭土的体积比2 : 1，20d后将营养钵移
至露地，15d后将幼苗移到大田中，即可得辣椒核雄性不育两用系不育株。 发明人使用该办法对露天农田的植株进行了培养，生产出大量的无菌苗用于杂交
种子的生产，效果良好。
权利要求
一种大规模生产辣椒核雄性不育植株的方法，其特征在于，它包括下述步骤A、由辣椒核雄性不育两用系不育株带腋芽的茎段，接种在腋芽诱导培养基上，在人工控制的环境条件下，诱导腋芽的萌发生长，形成丛生苗；B、由丛生苗分割成带腋芽的茎段，接种在腋芽诱导培养基上，在人工控制的环境条件下，诱导腋芽的萌发生长，形成次级丛生苗；C、在相同的条件下，通过重复的继代培养扩增丛生苗；D、分割丛生苗，接种到不定根诱导培养基上，在人工控制的环境条件下，诱导不定根的形成；E、选取生根多且健壮的植株去掉封口膜炼苗7~10d，然后洗净根系上的培养基，移入含有珍珠岩和草炭土混合基质的营养钵并置于温室中，用塑料薄膜覆盖，5d后逐步揭去薄膜通风，增加光照，及时补足营养钵水分，15~20d后将营养钵移至露地，10~15d后将幼苗移到大田中。
2. 根据权利1所述的方法，其特征在于，所说A、 B、 C步骤中的腋芽萌发生长至具有4 个以上节的丛生苗，将具有4个以上节的丛生苗切割成具有单个节的4段茎段，将各个茎段 再移入腋芽诱导培养基，并在该培养基上进行腋芽诱导培养，通过重复的茎段切割诱导培 养来扩增丛生苗，将形成的丛生苗切割成单株，移入不定根诱导培养基中，并在此培养基上 进行不定根的诱导，形成完整的再生植株。
3. 根据权利要求1至3所述的方法，其特征在于，所说的腋芽诱导培养基为MS基础培 养基，并在该培养基中添加质量比为3%的蔗糖、0. 6%的琼脂，0. 5 2. 0%的苄基腺嘌呤，和 0. 01 0. 1%的a-萘乙酸，控制培养基pH5. 8，在121。C下灭菌20min。
4. 根据权利要求1至2所述的方法，其特征在于，所说的丛生芽不定根诱导培养基为 1/2MS基础培养基，其中亚铁盐的含量与MS培养基相同，在1/2MS基础培养基中还含有质量 比为3%的蔗糖，0. 6%的琼脂，0. 02 0. 1 %的a-萘乙酸，和0. 02 0. 1 %的吲哚丁酸，控制培 养基pH 5. 8，于12TC下灭菌20min。
5. 根据权利1所述的方法，其特征在于所述的E步骤的混合基质中珍珠岩与草炭土的 体积比为1 : 1 2 : 1。
6. 根据权利要求1至2所述的方法，其特征在于，所说的人工控制的环境条件为每天 连续光照12 14h，温度24 26。C，光照强度4(T50umo1. m—2. s—全文摘要
本发明提供一种大规模生产辣椒核雄性不育植株的方法，它包括由辣椒核雄性不育两用系不育株的带腋芽的茎段诱导不定芽萌发，由不定芽形成丛生苗；再由丛生苗带腋芽的茎段诱导不定芽萌发，由不定芽形成次级丛生苗；通过反复继代培养诱导腋芽形成丛生苗；通过组织培养形成大量的丛生苗；将丛生苗分割进行诱导不定根的形成；最后通过将再生植株种植于露天农田来形成大量的辣椒核雄性不育两用系不育株。
文档编号A01G31/00GK101731146SQ20091016321
公开日2010年6月16日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者文锦芬 申请人:昆明理工大学