专利名称：一种利用液体培养基附以通透性基质诱导越桔试管生根的方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养快速繁殖技术领域，具体涉及一种借助液体培养基附以
通透性基质诱导越桔试管生根的方法。
背景技术：
越桔又名蓝莓、蓝浆果，为杜鹃花科(Ericaceae)越桔属(Vaccinium)灌木类小浆 果果树。越桔果实果肉细腻，种子极小，甜酸适口，香气清爽宜人。果实内特有的越桔花青 素、熊果苷、SOD等物质具有提高视力、抗衰老、消除疲劳和防癌等功效，日本和美国都将越 桔列于抗癌食品的前列，被誉为"21世纪功能性保健桨果"和"水果中的皇后"。越桔不仅 是鲜食佳品，还可深加工成果汁、果酱、果酒和儿童及老年人保健食品等高附加值产品，并 被国际粮农组织列为人类五大健康食品之一，被美国最有影响的健康杂志《Prevention》誉 为"神奇果"(於虹等，2003)，近年来风靡欧美及日本。 越桔在美国、加拿大已有近百年改良、栽培、种植历史，我国于上世纪90年代开始 从美国、加拿大引进优良越桔品种，并开展了育苗快繁研究，但常规繁育方法扩繁推广慢， 组织培养离体快繁的研究，多数作者报道越桔试管生根困难、生根率低、发根周期长、移栽 成活率低(Rowland et al. ，1992 ;Dweikatet al. ，1998 ;王侠礼等，2003 ;刘树英等，2004 ; 陶建敏等，2006)，制约了优良品种的产业化育苗进程，因此，选择一种高效、快捷的诱导生 根方法对越桔的快速繁殖及推广种植显得十分重要。 本发明经研究发现，采用液体培养基附以滤纸团、脱脂棉球、蛭石粒通透性基质，
既解决了上述问题，又可以有效节约生产成本，加快产业化育苗，本案油然而生。
参考文献 [1]於虹，王传永，吴文龙.2003，蓝浆果栽培与采后处理技术.北京金盾出版社， 1-2 [2]王侠礼，钟士传，郑亚芹，等.美国高灌蓝莓的引进及微体快繁技术研究[J]. 中国种业，2003(12) :40-41 [3]刘树英，安伟，孔令学，等.兔眼越橘芽的诱导及再生[J].吉林农业大学学报， 2004,26(6) :632-635 [4]陶建敏，耿其芳，庄智敏，等.蓝浆果叶片高效再生体系的建立[J].西北植物 学报 2006,26(3) :610-614 [5]Dweikat M， Lyrene P M. Adventitious shoot production from leaves of blueberry cultured in vitro. HortScience，1998，23 :629 [6]Rowland L J， Ogden E L Use of a cytokinin conjugate for efficient shoot regeneration from leaf ection ofhigh blueberry. Hort Science,1992，27 (10): 1127-1129
发明内容
本发明的目的是解决上述现有技术缺陷，为工业化规模快速繁殖提供越桔的试管
生根及移栽方法。 本发明的技术方案是 —种利用液体培养基附以通透性基质诱导越桔试管生根方法，其工艺步骤包括生 根培养基的配制、生根培养与瓶苗移栽
(1)生根培养基配方及制备 ①培养基基质制备O. 8cmxl. 2cm的滤纸团或脱脂棉球，选O. 2cmx0. 6cm大小的粒 状蛭石，经洗洁净和自来水洗净，置流水下冲洗20 30min后，于烘箱中烘干或自然晾干；
②诱导生根培养液1/2WPM+IBA1. 0 5. Omg. 1^+食用白糖2% +pH5. 0 5. 2营 养液； ③分装和灭菌每瓶加入已浸透生根培养液的滤纸团或脱脂棉球6 IO个或蛭石 20 30粒，再注入诱导生根培养液3 5ml，加盖后，在1. 2Kg/cm2、 12rC饱和蒸汽压力下 灭菌20min。 (2)生根培养及培养条件 选继代培养40d、高3 4cm的健壮无根苗转入生根培养基中，首先在黑暗条件下 培养7 10d，随后转到12h/d间歇光照下10d左右可诱导产生不定根，再培养10d可左右 形成3 7条、根长0. 5 2cm的根系。
(3)瓶苗移栽及管理 试管苗在生根培养基上培养约30d，苗高3 6cm、根长0. 5 2cm时开瓶直接移 栽到草炭土和苔藓混合基质的苗床上培育，草炭土和苔藓的体积比为l : 1。
上述生根培养时的培养室温度为24±2°C，12h/d间歇光照时的光照强度为 1500 20001x。 上述试管苗移栽到混合基质上要用1/2WPM营养液浇透，遮光度为70%，湿度控制 在80 90%，温度控制在18 30°C。
本发明的优点是 (1)建立的附加脱脂棉球、滤纸团、蛭石粒基质的越桔生根液体培养基，通透性强、 透气性好、利于养分运输、促进根原基生长发育，使发根时间縮短为20 30d，生根率达到 100%。 (2)液体培养基中营养交流充分，试管苗生长健壮，移栽成活率高，超过95%。
(3)该方法诱导越桔试管生根，每瓶营养液用量仅为固体培养基用量的20 30 % ，滤纸团、脱脂棉、蛭石粒可重复利用，降低了生产成本。 (4)该方法由于选用了滤纸团、脱脂棉球、蛭石粒基质，开瓶后勿需对琼脂等进行 清洗，直接移栽到苗床上，节省了人力物力，并有利于移栽成活。 本发明解决了越桔试管生根率低、发根周期长、移栽成活率低、生产成本高等问 题，可实现优质越桔品种的工业化规模快速繁殖。
具体实施例方式
本发明采用下述非限性实施例作进一步的详述说明。
实施例1 :制备0. 8cmxl. 2cm大小的滤纸团，配1/2WPM+IBA1. Omg. L—1十食用白糖 2% +pH5. 0诱导生根营养液，将滤纸团浸透诱导生根培养液后分装入瓶，每瓶加入6 10 个滤纸团，再注入诱导生根培养液3 5ml，加盖后，于1. 2Kg/cm2、12rC饱和蒸汽压力下灭 菌20min。在超净工作台上，将继代培养40d、高3 4cm的健壮越桔无根苗分别转入生根 培养基中进行培养，培养室温度24士2t:，并给于黑暗培养7 10d后间歇光照条件，光照 强度1500 20001x，每日光照12h，30d可形成具有3 7条、根长0. 5 2cm的根系。将 已生根的试管苗从培养瓶中取出，直接移栽到草炭土和苔藓体积比=1 : l的苗床上，浇 透1/2WPM+pH 5. 0 5. 2营养液，并覆盖薄膜，使湿度控制在80 90%，温度控制在18 3(TC，遮光度为70%。试管苗移栽1周后开始生长，移植60d后，苗高10cm以上，成活率 95%以上。 实施例2 :制备0. 8cmxl. 2cm大小的脱脂棉球，配1/2WPM+IBA5. Omg. L—1十食用白
糖2 % +pH 5. 2诱导生根营养液，将脱脂棉球浸透诱导生根培养液后分装入瓶，每瓶6 10 个，再注入诱导生根培养液3 5ml，聚丙烯薄膜封口后，于1. 2Kg/cm2、12rC饱和蒸汽压力 下灭菌20min。在超净工作台上，将继代培养40d、高3 4cm的健壮无根苗分割，分别转 入生根培养基中，于培养室温度24士2t:条件下，首先黑暗培养10d，随后转到12h/d间歇光 照、光照强度1500 20001x条件下10d左右可诱导产生不定根，再培养10d可左右形成 3 7条、根长0. 5 2cm的根系。将已生根的试管苗从培养瓶中取出，直接移栽到草炭土 和苔藓体积比=1 : l的苗床上，浇透l/2WPM+pH 5.0营养液，并覆盖薄膜，使湿度控制在 80 90%，温度控制在18 3(TC，遮光度为70%。试管苗移栽1周后开始生长，移植60d 后，苗高10cm以上，成活率95%以上。 实施例3 :选0. 2cmx0. 6cm大小的粒状蛭石，经洗洁净和自来水洗净，置流水下冲 洗20 30min后，于烘箱中烘干或自然晾干；配制1/2WPM+IBA1. Omg. L—^食用白糖2% +pH 5. 2诱导生根营养液；将蛭石粒浸透诱导生根培养液后分装入瓶，每瓶20 30粒，再 注入诱导生根培养液3 5ml，聚丙烯薄膜封口后，于1. 2Kg/cm2、12rC饱和蒸汽压力下灭 菌20min。在超净工作台上，将继代培养40d、高3 4cm的健壮无根苗分割，分别转入生 根培养基中，首先在黑暗条件下培养7 10d，随后转到12h/d间歇光照下10d左右可诱导 产生不定根，培养室温度24±2°C。试管苗在生根培养基上培养约30d，苗高3 6cm、根长 0. 5 2cm时开瓶直接移栽到草炭土和苔藓体积比=1 : 1的苗床上，浇透1/2WPM+pH5. 0 营养液，并覆盖薄膜，使湿度控制在80 90%，温度控制在18 3(TC，遮光度为70%。试 管苗移栽1周后开始生长，移植60d后，苗高10cm以上，成活率95%以上。
权利要求
一种利用液体培养基附以通透性基质诱导越桔试管生根的方法，其特征在于该方法的工艺步骤如下(1)生根培养基的配制培养基基质制备0.8cm×1.2cm的滤纸团或脱脂棉球，选0.2cm×0.6cm大小的粒状蛭石，经洗洁净和自来水洗净，置流水下冲洗20～30min后，于烘箱中烘干或自然晾干；诱导生根培养液1/2 WPM+IBA1.0～5.0 mg.L-1+食用白糖2％+pH 5.0～5.2营养液；分装和灭菌将培养基基质和诱导生根培养液分装入瓶后，进行高压灭菌。(2)生根培养在无菌条件下，将继代培养40d、高3～4cm的健壮越桔无根苗分割后，分别转入生根培养基中进行培养，培养室温度24±2℃。(3)生根苗移栽及管理试管苗在生根培养基上培养约30d，苗高3～6cm、根长0.5～2cm时开瓶直接移栽到草炭土和苔藓混合基质的苗床上培育，草炭土和苔藓的体积比为1∶1。
2. 根据权利要求l所述的生根培养基的配制，其特征在于培养基分装、用量及方法 是每瓶加入已浸透生根培养液的滤纸团或脱脂棉球6 10个或蛭石20 30粒，再注入 诱导生根培养液3 5ml，加盖后，于1. 2 Kg/ci^、12rC饱和蒸汽压力下灭菌20min。
3. 根据权利要求l所述的生根培养，其特征在于将高3 4cm的健壮无根苗转入生根 培养基中，首先在黑暗条件下培养7 10d，随后转到12h/d间歇光照下(光照强度1500 20001x) 10d左右可诱导产生不定根，再培养10d左右可形成3 7条、根长0. 5 2cm的根 系。
4. 根据权利要求1所述的生根苗移栽及管理，其特征在于所述的试管苗移栽到混合 基质上要用1/2WPM+pH 5. 0 5. 2营养液浇透，遮光度为70%，湿度控制在80 90%，温 度控制在18 30°C。
全文摘要
本发明公开一种利用液体培养基附以通透性基质诱导越桔试管生根的方法，其工艺步骤如下(1)生根培养基配制①培养基基质0.8cm x 1.2cm滤纸团或脱脂棉球，0.2cm x 0.6cm蛭石粒；②生根培养液1/2WPM+IBA1.0～5.0mg.L-1+食用白糖2％+pH5.0～5.2营养液；③分装和灭菌每瓶加入已浸透生根培养液的滤纸团或脱脂棉球6～10个或蛭石20～30粒，再注入生根培养液3～5ml，加盖后按常规灭菌；(2)生根培养将继代培养40d、高3～4cm的健壮无根苗转入生根培养基中，先黑暗培养7～10d，后转到12h/d间歇光照下20d左右可形成3～7条、根长0.5～2cm的根系；(3)瓶苗移栽及管理将生根培养30d，苗高3～6cm、根长0.5～2cm的瓶苗移栽到草炭土∶苔藓＝1∶1的基质中。本发明发根周期短，生根率达100％，移栽成活率95％以上，生产成本低，可实现工业化规模快速繁殖。
文档编号A01H4/00GK101699991SQ20091020826
公开日2010年5月5日 申请日期2009年10月23日 优先权日2009年10月23日
发明者张萍, 柏新富, 蒋小满, 赵建萍 申请人:鲁东大学