专利名称：抗除草剂大麦的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有除草剂抗性或耐性的谷类植物。更具体地，本发明涉及抗除草剂大麦。
背景技术：
由于人口增长和其他压力，例如耕地减少，气候变化和将农作物用于生物燃料生产日益增多，粮食生产，特别是谷物生产在世界范围内日益重要。除草剂通过使谷物产量、牧草产量、质量和利益率最大化而在现代农业中起着重要作用。除草剂可以杀死或抑制不需要的植物从而减少与需要的植物——例如农作物——
竞争营养、水分等。咪唑啉酮amidazolinone)和磺酰脲(sulphonylurea)除草剂通过抑制植物酶乙酰羟酸合酶(AHAS)——也称作乙酰乳酸合酶(acetolactate synthase, ALS)来抑制包括大量杂草在内的敏感植物的生长和发育。AHAS合成支链氨基酸，是植物的一个关键功能。 重要的是，咪唑啉酮和磺酰脲除草剂对动物包括人也有相对较低的毒性。咪唑啉酮包括下列化合物咪草烟(imazethapyr)、灭草喹(imazaquin)、灭草烟 (imazapyr)、甲咪唑烟酸(imazapic)和咪草啶酸(imazamox)等。市售的咪唑啉酮除草剂包括0N DUTY (甲咪唑烟酸+灭草烟)、 INTERVIX (咪草啶酸 + 灭草烟)、SPINNAKER (咪草烟)、；RAPTOR (咪草啶酸)和FLAME (甲咪唑烟酸)。尽管一些农作物被指出有自然存在的除草剂抗性，但是很多重要的粮食作物对除草剂(包括咪唑啉酮)敏感。大麦(Hordeum-vulRare)是一种世界范围内的重要谷类农作物，因为它用于麦芽生产、酿造以及人和动物的食物。大麦的优势在于它比小麦更耐盐并且可成功种植于较贫瘠的土地和/或较干燥的环境中。杂草防治在大麦生产中是一个主要的问题。需要良好的化学杂草防治来使农作物的产量最大化并限制机械耕作的需要以及给土壤结构带来的损害和侵蚀。特别需要使用更大范围的低毒性除草剂来防治大麦种植系统中全谱的各种杂草。例如，由于大部分大麦对磺酰脲有抗性，这种除草剂可在出苗长出大麦作物后施用，然而，咪唑啉酮则不能在出苗后施用，因为大麦对这类除草剂敏感。此外，大麦作物甚至不能被播种在含有咪唑啉酮的土壤中，因为大麦对咪唑啉酮敏感。上面对现有提议或产品的参考和描述不意欲、也不应被解释为是对本技术领域公知的陈述或承认。
发明内容
本发明提供一种与野生型大麦相比对除草剂的抗性增强的非自然存在的大麦植物。
本发明还提供所述非自然存在大麦植物的种子。此外，本发明还提供一种抑制大麦植物周围的杂草生长的方法，包括种植一种与野生型大麦植物相比对除草剂的抗性增强的非自然存在的大麦植物，并在合适条件下对所述抗性增强的大麦植物及其周围施用足以抑制杂草生长的咪唑啉酮。本发明还涉及一种种植大麦作物的方法，包括播种本发明的种子，并在合适的条件下培育所述种子和得到的植物来生产作物。
图 1 示出了抗咪唑啉酮突变系(VBHT 0805、VBHT 0806、VBHT0802 和 VBHT 0810) 和野生型对照系(AF059600，Buloke和Hindmarsh)的位于1742碱基位点附近的AHAS基因 (以方框示出)的序列对比。图 2 示出了在 EMS05 * 06HI005 系和 EMS05 * 06HI006 系(H. vulgarc_ AHAS-mutant)中鉴定的位于突变DNA核苷酸碱基1742位点周围的6个植物种AHAS基因的氨基酸序列对比，显示结果为丝氨酸( 变为天冬酰胺(N)。图3示出了与野生型参考序列(AHAS_H. vulgare_AF059600)对比的重测序的VBHT 0802、VBHT 0805、VBHT 0806 和 VBHT 0810 的 AHAS 基因序列对比。
具体实施例方式本发明提供一种与野生型大麦相比对除草剂的抗性——尤其是对咪唑啉酮除草剂的抗性——增强的非自然存在的大麦植物。本发明还包括所述大麦植物的具有对除草剂抗性增强的特性或特征的子代和后代。本发明还包括本发明的大麦植物的杂种。术语“非自然存在”是指在自然界不存在而是人类干预的结果的植物。优选所述植物通过诱变产生，更优选通过化学诱变产生。术语“大麦植物”是指大麦种的全部遗传变异类型及其众多变种例如Buloke和 Hindmarsh,以及大麦属内的相关种。术语“对除草剂的抗性增强”和“抗除草剂大麦”的含义是所述植物不像其自然存在的相应植物或野生型一样受除草剂的不利影响。此术语包含对除草剂的耐受性。本发明还提供所述非自然存在的对除草剂——特别是咪唑啉酮除草剂——的抗性增强的大麦植物的种子。不意欲囿于理论，本发明人研发的增强的除草剂抗性看来是植物的生理学和/或生物化学变化的结果并且因此干扰除草剂的正常作用。这可能涉及对除草剂的吸收或转移的改变或代谢酶结合除草剂的能力的改变。因此本发明涉及所述植物中使其具有除草剂抗性的改变了的元素，包括改变了的基因和/或蛋白质(包括酶)，所述基因和蛋白质与其除草剂敏感大麦植物的相应基因和蛋白质相比发生了改变。优选所述改变了的基因和/或蛋白质是分离的形式或基本纯化的方式。本发明的植物和种子包括突变、重组变种和基因工程衍生物或通过其他方法例如常规育种衍生的衍生物的植物和种子，它们均保持上述改变了的元素。本发明还涉及所述抗除草剂大麦的除种子外的植物部分，包括不管是通过植物组织培养还是通过其他方式产生的植物细胞、植物组织和植物器官。
在一个优选实施方案中，本发明的种子是本文描述的VBHT 0802,VBHT 0803,VBHT 0805、VBHT 0806、VBHT 0807、VBHT 0809或VBHT 0810或者是由这些种子得到的植物。本发明还提供作为与野生型大麦植物相比其具有增强的咪唑啉酮抗性的突变体、衍生物及变种的种子或植物。下面种子的样本依据布达佩斯条约于2008年4月18日保藏于NCIMB.Ltd of Ferguson Building, Craibstone Estate, Buckburn, Aberdeen, Scotland 并且相应的编号如下表1 保藏物
名称编号VBHT 0802NCIMB 41547VBHT 0803NCIMB 41548VBHT 0805NCIMB 41549VBHT 0806NCIMB 41550VBHT 0809NCIMB 41551本发明还提供一种抑制大麦植物周围的杂草生长的方法，包括种植一种与野生型大麦相比对除草剂的抗性增强的大麦植物，并在合适条件下对所述大麦植物及其周围施用足以抑制杂草生长的咪唑啉酮。本发明还涉及一种抑制大麦作物中的杂草生长的方法，所述方法包括种植抗除草剂大麦作物并在合适条件下对所述作物施用咪唑啉酮除草剂来抑制杂草生长。所述咪唑啉酮可以咪草啶酸和灭草烟的组合的形式使用，比例分别为12. 375g每公顷和5. 625g每公顷；分别为24. 75和11. 25g每公顷；分别为41. 25和18. 75g每公顷或 49. 5和22. 5g每公顷。可选地，所述咪唑啉酮可以甲咪唑烟酸和灭草烟的组合的形式使用， 比例分别为26. 25和8. 75g每公顷或42和14g每公顷。本发明还涉及一种种植大麦作物的方法，包括播种本发明的种子，并在合适的条件下培育所述种子和得到的植物来生产作物。优选用作所述作物的抗除草剂大麦通过诱变产生，更优选通过化学诱变产生。所述抗除草剂作物还更优选为NCIMB 41547, NCIMB 41548, NCIMB 41549, NCIMB 41550、NCIMB 41551或其具有抗除草剂特征的植物，或从上述株系衍生而来的植物。下面的非限制性实施例说明本发明。实施例1 突变体的产生将33. 3kg大麦变种Buloke (大约812195粒种子)浸泡在0. 25%甲基磺酸乙酯 (EMS)中并用鼓风机干燥。亲代Buloke是高产变种，能生产麦芽制造品质的谷物。意外的是，Buloke适于种植于雀麦草为患的区域。选择此品系，本发明人希望开发可种植于雀麦草和其他杂草可被咪唑啉酮除草剂防治的条件下可生长的抗咪唑啉酮大麦变种。
5
实施例2 =Ml代2006年在澳大利亚维多利亚霍舍姆(Horsham，Victoria，Australia)将来自实施例1中的诱变大麦种子播种于0. 5公顷的样地中。管理与推荐的用于本地区大麦管理方式一致。大麦成熟时用试验田收割机收割所述样地。从每个装满种子的容器中拿出300g样本，并堆积在一起形成代表性的较小混合群(150kg)而剩余的种子堆在一起作为混合样品 (600kg)。实施例3 :M2代2007年在澳大利亚维多利亚霍舍姆将来自实施例2的200kg突变大麦种子(大约488万粒种子)播种于2公顷土地中。用ONDUTY⑧以80g/ha(活性成分，甲咪唑烟酸42g+灭草烟14g)的比例喷洒出苗的植株，手工分别收获20株存活植株并保存。实施例4 初步评估M2选择植株对咪唑啉酮除草剂的抗性鉴定出实施例3中具有最大干物质和种子产量的十株植株并命名为 BUL0KE-EMS05 * 06HI001、BUL0KE-EMS05 * 06HI002、BUL0KE-EMS05 * 06HI003、 BUL0KE-EMS05 * 06HI004、BUL0KE-EMS05 * 06HI005、BUL0KE-EMS05 * 06H1006、 BUL0KRE-EMS05 * 06HI007、BUL0KE-EMS05 * 06HI008、BUL0KE-EMS05 * 06HI009 和 BUL0KE-EMS05 ★ 06HI010。将每种选择植株的30粒种子播种于温室中的10个盆中(每盆3粒种子)。用 0NDUTY 以50g/ha(活性成分，甲咪唑烟酸26. 25g+灭草烟8. 75g)的比例喷洒每种选择的半数盆，并根据后代的反应以对ON DUTY 的抗性对每种选择植株分类。若植株表现出未受ON DUTY 的影响(没有可见症状)则认定其有抗性，若被ON DUTY 杀死则认定其易感。·鉴定出以下纯合易感选择植株(在大田筛选中未选出)并停止对其进一步的评估BUL0KE-EMS05 ★ 06HI001、BUL0KE-EMS05 ★ 06HI004 和 BUL0KE-EMS05 ★ 06HI008。·鉴定出以下纯合抗性选择植株并将抗性植株聚积在一起进行评估 BUL0KE-EMS05 * 06HI002、BUL0KE-EMS05 * 06HI005、BUL0KE-EMS05 * 06HI006、 BUL0KE-EMS05 ★ 06HI009 和 BUL0KE-EMS05 ★ 06HI010。·尽管是对ON DUTY有抗性的纯合植株，但还是就影响植株类型的基因将 BUL0KE-EMS05 * 06HI009分离，并收获单植株，分别用于进一步评估。·鉴定出杂合易感/抗性选择植株，并收获各个抗性植株，用于进一步评估 BUL0KE-EMS05 ★ 06HI003 和 BUL0KE-EMS05 ★ 06HI007。选择代表每个原始M2抗性选择植株的纯合抗除草剂株系用于提交至NCIMB和进一步评估。给这些株系新的较短的名称——表2所示——以利于交流表 2名称VBHT0802VBHT0803
VBHT0805VBHT0806VBHT0807
6
初始名称
BUL0KE-EMS05*06HI002
BUL0KE-EMS05*06HI003-06GI003
BUL0KE-EMS05*06HI005
BUL0KE-EMS05*06HI006
BUL0KE-EMS05*06HI007-06GI001
VBHT0809BUL0KE-EMS05*06HI009-06G082VBHT0810BUL0KE-EMS05*06HI010实施例5 田间评估对Intervix @的耐受性a)筛诜对咪唑啉酮除草剂有抗件的纯合株系2007年在澳大利亚维多利亚霍舍姆将在温室(实施例4)中选择的单植株的种子以5m双行播种并在出苗后以0. 75L/ha喷洒Intervix (活性成分，咪草啶酸33g/kg+灭草烟15g/kg)，将可见的未受除草剂影响的行收获并且进一步评估(未出示数据)。鉴定得到纯合抗咪唑啉酮株系VBHT0803、VBHT0807和VBHT0809并提交至NCIMB。b)评估对咪唑啉酮除草剂的抗件在2007年和2008年在澳大利亚维多利亚霍舍姆和2008年在澳大利亚新南威尔士马里纳(Marinna，NSW, Australia)的实验中将突变株系 VBHT0802、VBHT0805、VBHT0806 和VBHT0810与野生型Buloke和Hindmarsh的咪唑啉酮抗性相比较。在霍舍姆，以裂区设计(split plot design)在2007年用2个重复，2008年用3个重复播种实验样品；并在 Marirma，以因子设计使用3个重复播种实验样品。在霍舍姆，将基因型(选择植株)分配作为副区(subplot)，而除草剂处理分配作为主区。除草剂处理为 霍舍姆2007-未施用Intervix 和出苗后以0. 75L/ha (活性成分，24. 75g咪草啶酸+11. 25g灭草烟)施用Intervix 霍舍姆2008-未施用Intervix 和出苗后以0. 375L/ha (活性成分，12. 375g咪草啶酸+5. 625g灭草烟)、0. 75L/ha (活性成分，24. 75g咪草啶酸+11. 25g灭草烟)、1. 5L/ ha(活性成分，49. 5g咪草啶酸+22. 5g灭草烟)施用Intervix 。 马里纳2008年-未施用Intervix 和出苗后以0. 375L/ha (活性成分，12. 375g 咪草啶酸+5. 625g灭草烟)、0. 75L/ha (活性成分，2475g咪草啶酸+11. 25g灭草烟)、 1. 25L/ha(活性成分，41. 25g咪草啶酸+18. 75g灭草烟)施用Intervix 。所有实验的管理除Intervix 除草剂的施用外都与商业惯例一致。用小的样地收割机收割样地，对种子称重，转换为以t/ha为单位的产量并用REML分析。用已有方法对来自重复1的未施用 Intervix 的500克样品评估其麦芽制造品质(参见实施例10)。与对照处理(未施用Intervix)相比，所有三个实验(表3、4和5)中以所有比例施用的Intervix 都显著地减少了变种Buloke和Hindmarsh的谷物产量。两种情况下所有Intervix 处理的样地中的植物都变黄，生长停止并死亡。相反，与对照处理(未施用 Intervix)相比，当用Intervix 以任意比例处理时 VBHT0802、VBHT0805、VBHT0806 或 VBHT0810在谷物产量方面未见明显不同。此外，用Intervix 处理的VBHT0802、VBHT0805、 VBHT0806 或 VBHT0810 的样地未见可见的伤害症状。VBHT0802、VBHT0805、VBHT0806 或 VBHT0810都是衍生于用EMS处理的Buloke，并且与野生型亲代Buloke和栽培种Hindmarsh 相比，均对以0. 375L/ha(活性成分，12. 375g咪草啶酸+5. 625g灭草烟)至1. 5L/ha(活性成分，49. 5g咪草啶酸+22. 5g灭草烟)的比例施用的Intervix 明显地表现出增强的抗性。实施例6 田间评估比较咪唑啉酮抗性突变大麦株系与Buloke的产量。在澳大利亚9个地区比较了咪唑啉酮抗性突变株系VBHT0802、VBHT0805、 VBHT0806或VBHT0810与Buloke的产量(t/ha)。位于南澳大利亚州的帕斯基维尔(Paskeville)和卡林顿(Callington)，位于新南威尔士的福布斯(Forbes)、特莫拉 (Temora)和朱尼里夫斯(Junee Reefs)，位于维多利亚的丁布拉(Dimboola)、埃尔莫尔 (Elmore)和芒特默瑟(Mt Mercer)，和西澳大利亚的Northam early和late。VBHT0805和VBHT0802在所有地区都具有最高产量，比Buloke平均高出4%，表明诱变过程没有产生显著影响澳大利亚的谷物产量的不利突变。另外，VBHT0806比Buloke产量低4%。这些结果在表6中显示。实施例7 咪唑啉酮抗性突变大麦株系和Buloke的形态学和DNA比较将咪唑啉酮抗性突变大麦株系VBHT0802、VBHT0803、VBHT0805、VBHT0806、 VBHT0807.VBHT0809和VBHT0810与野生型Buloke的的形态学特征和DNA比较。表7描述了鉴定到的明显不同的形态学和DNA特征，VBHT0803与Buloke不同在于其具有紫芒(purple awn)并且比Buloke矮小但不是矮化植株。VBHT0809有紫芒并且是矮化植株并有匍匐生长的习性。VBHT0805、VBHT0807和VBHT0810具有同样的单体型，显示它们是单一突变事件的衍生株系。VBHT0802、VBHT0803、VBHT0806和VBHT0809都具有可能是用于诱变的初始 Buloke样本内异质性所致的独特单体型，并显示每种都代表一种独特的抗咪唑啉酮除草剂变异事件。VBHT0807和VBHT0810的单体型与Buloke参照样本(VBO105 * 12)在1似4个单核苷酸多态性(SNP)位点有41个位点不同。实施例8 咪唑啉酮抗性突变大麦株系的AHAS基因的DNA测序。a.概述检测按照在先的实施例就抗除草剂咪唑啉酮筛选并鉴定为含有抗性决定因素的大麦(Hordeum vulgare L)突变株系，以确认并表征突变株系，乙酰羟酸合酶(AHAS)基因的疑似突变等位基因，并重测序来鉴定DNA碱基改变。核对所述DNA序列，并将其与野生型序列和已知突变体作比较。b.实验方法和结果植物材料由野生型基因型、Buloke和Buloke衍生的编号为VBHT0802 (NCIMB 41547)、VBHT0805 (NCIMB 41549)、VBHT0806 (NCIMB 41550)和 VBHTO8IO (未保藏)的 4 个突变株系组成。从Genbank集合AHAS基因的公开参考序列。所述序列是从一系列单子叶植物种(包括大麦)中获得的，用于在所述基因保守区域设计PCR引物来确保引物起到最佳作用。总共设计了 20个正向和反向引物以使能最大覆盖可获得的基因序列，提供多种引物配对选择以降低弓I物不良表现的可能性。对提供的全部DNA模板进行使用标准条件的PCR扩增检测。用所有可能的引物组合进行的扩增结果不佳，并且导致产生多种产物，这通过在琼脂糖凝胶上解析得知。使用嵌套PCR来降低扩增产物的复杂性并增加反应的特异性。使用嵌套PCR策略特异地扩增得到 AHAS基因的一个区域，并使用在Abi 3730x1上解析的BigDye 3. 1对其进行直接测序。然后用kquencher v3. 7对所述序列进行比对并评估多态性。鉴定得到一些碱基突变的变种。在碱基坐标1431处，株系VBUT0810的G转变为 A。但是，这个改变可能不是观察到的除草剂抗性表型的原因，因为这个具体的核苷酸是三联体密码的第三个碱基并且编码同一氨基酸因此是同义的。株系VBHT0805 (NCIMB 41549)和 VBHT0806 (NCIMB 41550)在碱基坐标 1742 处的G突变为A，也是一个转换。这引起所得氨基酸由丝氨酸转换为天冬酰胺(图1)。使用跨种对比分析，发现已在株系VBHT0805(NCIMB 41549)和VBHT0806 (NCIMB 41550)中被突变的丝氨酸在其他种中高度保守(图2)。将此丝氨酸向天冬酰胺的特异性变化与已知的使植物具有除草剂抗性的因果突变(causal mutation)相比较，发现该变化符合先前鉴定和表征的变化(Li et al 2008 ； Jander et al. 2004 ；Sathasivan et al. 1990)。c.结论突变体株系VBHT0805(NCIMB 41549)和 VBHT0806 (NCIMB41550)可能由于坐标 1742处由G转换为A而表现出除草剂抗性，此改变使氨基酸从丝氨酸改变为天冬酰胺。此突变被称作SER653。本发明的大麦表现的咪唑啉酮除草剂抗性与其他种中发现的水平相比不同寻常地高。这是出乎意料的，不囿于任何理论，其可能是由于大麦中AHAS基因的高拷贝数造成的。造成株系VBHT0802、VBHT0803、VBHT0807、VBHT0809 和 VBHT0810 具有除草剂抗性的突变目前未知。突变可能是在AHAS基因的未测序部分并且可能具有其他抗性机制。 VBHT0802与VBHT0805和VBHT0806相比对抗性有不同的遗传调节并且没有突变SER653。实施例9 对 VBHT0802、VBHT0803、VBHT0805、VBHT0806、VBHT0807、VBHT0809 和 VBHT0810的进一步测序。使用与实施例8相似的标准测序技术进行进一步的工作，以表征参与赋 f VBHT0802 (NCIMB 41547)、VBHT0803 (NCIMB 41548)、VBMT0805 (NCIMB 41549)、 VBHT0806 (NCIMB 41550)、VBHT0807 (未保藏)、VBTIT0809 (NCIMB 41551)和 VBHT0810 (未保藏)咪唑啉酮抗性的AHAS基因和其他可能的相关基因。即使在 VBHT0805 (NCIMB 41549)和 VBHT0806 (NCIMB 41550)中鉴定到 SER653 突变，也要对其进行进一步的测序，因为相信在所述基因的未测序部分还有其他突变。实施例10 麦芽生产的适宜性Buloke目前在澳大利亚被视为麦芽制造栽培种。根据欧洲酿造协会(European Brewing Congress)的标准方法对麦芽生产的适宜性进行测试。表8中显示的结果证明 VBHT0805 (NCIMB 41549)在麦芽制造适宜性方面与Buloke相同。参考文献Li D. , Barclaya I. , Jose K. , Stefanova K. , Appels R. 2008. A mutation at the Alal22position of acctohydroxyacid synthase (AHAS) located on chromosome 6D of wheat ；improved resistance to imidazolinone and a faster assay for marker selection. MolBreeding. Published Online early.Jander G. , Baerson S. , Hudak J. , Gonzalez K. , Gruys K. , Last R. 2003Ethylmethanesulfonate Saturation Mutagenesis in Arabidopsis to Determine Frequency of Herbicide Resistance. Plant Physiology 131 pl39_16.Sathasivan K. , Haughn G. , Murai N.1990 Nucleotide sequence of a mutant acetolactate synthase gone from an imidazolinone-resistant Arabidopsis thaliana var. Columbia. Nucleic Acids Research 182188.
权利要求
1.一种与野生型大麦植物相比对除草剂的抗性增强的非自然存在的大麦植物。
2.权利要求1的非自然存在的植物，其中所述对除草剂的抗性增强是指对咪唑啉酮除草剂。
3.权利要求1或2的植物的种子。
4.权利要求3的种子，其中所述非自然存在的大麦植物具有NCIMB保藏编号为 NCIMB41547,NCIMB 41548,NCIMB 41549,NCIMB 41550 或 NCIMB 41551 的除草剂抗性特征， 或者是所述NCIMB保藏编号的衍生物。
5.一种由权利要求4的种子长成的或以其他方式衍生的大麦植物或大麦植物的后代。
6.NCIMB 保藏编号为 NCIMB 41547、NCIMB 41548、NCIMB41549、NCIMB 41550 或 NCIMB 41551的种子，或其具有除草剂抗性的衍生物。
7.—种衍生自权利要求6的种子或衍生物的大麦植物，或所述种子或衍生物的植物后代。
8.一种大麦植物或大麦种子，含有赋予NCIMB保藏编号NCIMB 41547, NCIMB 41548, NCIMB 41549, NCIMB 41550或NCIMB 41551或其衍生物咪唑啉酮抗性的核酸序列。
9.权利要求8的植物或种子，其中所述核酸序列来自保藏物NCIMB41547或其衍生物。
10.一种分离的核酸，含有赋予NCIMB保藏编号NCIMB 41547, NCIMB 41548, NCIMB 41549,NCIMB 41550或NCIMB 41551或其具有除草剂抗性的衍生物咪唑啉酮抗性的核酸序列。
11.一种抑制大麦植物周围的杂草生长的方法，包括种植一种与野生型大麦植物相比对除草剂的抗性增强的非自然存在的大麦植物，并在合适条件下对所述抗性增强的大麦植物及其周围施用足以抑制杂草生长的咪唑啉酮。
12.—种抑制大麦植物周围的杂草生长的方法，包括种植权利要求1、2、7至9任一项的大麦植物或种植由权利要求3、4、8或9的种子长成的大麦植物，并且在合适的条件下向所述大麦植物及其周围施用足以抑制杂草生长的咪唑啉酮。
13.权利要求11或12的方法，其中咪唑啉酮以在出苗后施用的咪草啶酸和灭草烟的组合的形式使用，施用比例分别为12. 375g每公顷和5. 625g每公顷；分别为24. 75和11. 25g 每公顷；分别为41. 25和18. 75g每公顷；或分别为49. 5和22. 5g每公顷。
14.权利要求11或12的方法，其中咪唑啉酮以甲咪唑烟酸和灭草烟的组合的形式使用，施用比例分别为26. 25和8. 75g每公顷；或分别为42和14g每公顷。
15.一种种植大麦作物的方法，包括播种权利要求3、4、6、8和9任一项的种子，并在合适条件下培育所述种子和得到的植物来生产作物。
16.权利要求14的方法，其中将咪唑啉酮除草剂以合适的比例和合适的时间施用以抑制作物中杂草的生长。
17.权利要求1的植物，权利要求3的种子或权利要求11、12或15任一项的方法基本上如上文实施例中的描述。
全文摘要
本申请公开对除草剂，特别是对咪唑啉酮除草剂的抗性增强的非自然存在的大麦植物。还公开大麦植物种子自身、包含赋予咪唑啉酮抗性的核酸序列的分离的核酸、抑制大麦植物周围的杂草生长的方法和种植大麦作物的方法。种子保藏于NCIMB。
文档编号A01H1/06GK102202494SQ200980126400
公开日2011年9月28日 申请日期2009年5月6日 优先权日2008年5月6日
发明者C·皮塔克, D·穆迪, M·梅特尼 申请人:维多利亚农业服务控股公司