专利名称：星星草愈伤组织的诱导方法
技术领域：
本发明提供了一种愈伤组织的培养方法，尤其是一种星星草愈伤组织的诱导方 法。
背景技术：
随着人口的不断增加，生态环境的不断恶化及人类对草地的过度利用，导致土壤 盐渍化面积逐年扩大，土壤盐渍化已经称为一个世界性问题。专家一致认为，在世界范围 内过去已有大面积次生盐渍化的发展，而且随着新灌溉区的建立，盐渍化仍在不断产生、恶 化。与工程措施修复土壤相比较，生物学措施具有投资少、见效快的特点，尤其是利用盐生 植物修复土壤不仅能利用盐碱地获得良好的经济效益，而且盐碱土壤在利用的同时也得到 改良，一举两得。MM^ (Puccinellia tenuifIora(Turcz.) scribn. et Merr.), ^7^^:^4 ^-M 多年生盐生草本植物。地理分布以哈萨克斯坦、阿尔泰到亚库梯地区为多，我国东北、内蒙 古、华北、西北及青海等省均有分布。星星草的最大特点在于有很强的抗盐碱能力，能在PH 9-11的盐碱地上生长发育，经常在光碱斑周围构成星星草群落、羊草+星星草群落等。另 外，星星草蛋白质含量高，适口性好，是马、牛、羊喜食的优良牧草。利用星星草，黑龙江、吉 林及内蒙古河套灌区的盐碱地的治理取得了显著的效果。近年来，生物技术育种在重要农作物育种工作中已经广泛使用，很多研究成果已 应用于生产实践。牧草生物技术育种研究工作起步比较晚，但也已取得了较明显的进展，在 美国、加拿大及欧洲的一些国家，生物技术已经应用于牧草育种的不同方面。在牧草的组织 培养特别是愈伤组织培养中经常可出现一些变异植株。在羊茅、黑麦草的组织培养过程中 曾观察到细胞学和形态学变异以及染色体变异的植株。目前，在利用体细胞克隆变异进行 牧草育种工作中，经常采用在培养基中加入化学诱变剂或结合物理诱变等技术，进一步增 加变异频率，以期提高育种效率，并已成功培育出苜蓿、狗芽草、结缕草和野大麦等多种优 良的抗性牧草。但星星草的自然发芽率低且新品种较少。目前常用的实生种苗繁殖、分蘖 繁殖均受季节的影响，且繁殖系数较低，不适用于星星草的繁殖；自然或人工杂交的方法繁 育新品种不仅难度较大，且时间持续过长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种星星草愈伤组织的诱导方法，以有利于 星星草的繁殖和新品种培育。本发明是这样实现的，星星草愈伤组织的诱导方法，所述的方法是，先配置出愈伤 组织诱导培养基，配置时，采用基本培养基MS或N6，在基本培养基内分别加入基本培养基 重量的2 4%的蔗糖和基本培养基重量的0. 2 0. 4%的植物凝胶并进行混合，将上述混 合后的物料的PH值调整为5. 7 5. 9，然后添加激素，激素的用量为每升上述混合后的物料 添加0. 01 0. 5mg，制成愈伤组织诱导培养基；将星星草成熟种子剥去颖壳，用自来水浸泡0. 7 0. 9小时，用无菌水冲洗后，再用质量百分比浓度为70%的酒精浸泡30 60秒，用 质量百分比浓度为0. 09 0. 11%的氯化汞或质量百分比浓度为1. 8 2. 的次氯酸钠 对星星草成熟种子进行消毒处理后，用无菌水冲洗，再将星星草成熟种子接种于愈伤组织 诱导培养基，在24 温度下，暗培养27 四天。这种星星草愈伤组织诱导方法，可有效克服星星草数量少、种类不足的问题。与自 然育种相比，该方法可更好地应用于星星草组织培养快繁技术和利用体细胞克隆变异进行 牧草育种工作。克服了实生种苗繁殖、分蘖繁殖受季节的影响、繁殖系数较低的问题；易于 繁育新品种，繁育时间短。该方法还可为星星草无性系植物种群的生态学研究提供较纯的 植株。
具体实施例方式下面进一步说明本发明。所述的激素为2，4_ 二氯苯氧乙酸、6-苄氨基嘌呤和植物激素KT中的一种。2， 4-二氯苯氧乙酸一般简称为2，4-D、6-苄氨基嘌呤一般简称为6-BA。植物激素KT可简称 为KT。所述的植物激素KT也称为激动素KT或外源激素KT。试验表明星星草成熟种子接种于愈伤组织诱导培养基后，5 10天萌发出芽，14 天左右芽基部膨大开始形成愈伤；愈伤组织形成初期，生长十分缓慢，外观呈现半透明的乳 白色，水渍状，外表粘稠且柔软。在不同的诱导培养基条件下，均能诱导出愈伤组织，2，4_二 氯苯氧乙酸对愈伤组织的诱导效果显著，2，4_ 二氯苯氧乙酸的增加明显促进愈伤组织的形 成。基本培养基N6相对于基本培养基MS为基础的诱导培养基诱导的愈伤组织质地较为致 密，可能是基本培养基N6的氮源能够促进愈伤组织紧密生长。实施例1星星草愈伤组织的诱导方法，所述的方法是，先配置出愈伤组织诱导培养基，配置 时，采用基本培养基N6，在基本培养基内分别加入基本培养基重量的4%的蔗糖和基本培 养基重量的0. 2%的植物凝胶并进行混合，将上述混合后的物料的pH值调整为5. 9，然后添 加激素，激素的用量为每升上述混合后的物料添加0. Olmg，制成愈伤组织诱导培养基；将 星星草成熟种子剥去颖壳，用自来水浸泡0. 9小时，用无菌水冲洗后，再用质量百分比浓度 为70%的酒精浸泡30秒，用质量百分比浓度为2. 的次氯酸钠对星星草成熟种子进行 消毒处理后，用无菌水冲洗，再将星星草成熟种子接种于愈伤组织诱导培养基，在温度 下，暗培养四天。所添加的激素为2，4-二氯苯氧乙酸。实施例2星星草愈伤组织的诱导方法，所述的方法是，先配置出愈伤组织诱导培养基，配置 时，采用基本培养基MS，在基本培养基内分别加入基本培养基重量的2%的蔗糖和基本培 养基重量的0. 4%的植物凝胶并进行混合，将上述混合后的物料的pH值调整为5. 7，然后添 加激素，激素的用量为每升上述混合后的物料添加0. 5mg，制成愈伤组织诱导培养基；将星 星草成熟种子剥去颖壳，用自来水浸泡0. 7小时，用无菌水冲洗后，再用质量百分比浓度为 70%的酒精浸泡60秒，用质量百分比浓度为0. 09%的氯化汞对星星草成熟种子进行消毒 处理后，用无菌水冲洗，再将星星草成熟种子接种于愈伤组织诱导培养基，在^TC温度下，暗培养27天。所添加的激素为6-苄氨基嘌呤。实施例3星星草愈伤组织的诱导方法，所述的方法是，先配置出愈伤组织诱导培养基，配置 时，采用基本培养基N6，在基本培养基内分别加入基本培养基重量的3%的蔗糖和基本培 养基重量的0. 3%的植物凝胶并进行混合，将上述混合后的物料的pH值调整为5. 8，然后 添加激素，激素的用量为每升上述混合后的物料添加0. 25mg，制成愈伤组织诱导培养基； 将星星草成熟种子剥去颖壳，用自来水浸泡0. 8小时，用无菌水冲洗后，再用质量百分比浓 度为70%的酒精浸泡45秒，用质量百分比浓度为0. 10%的氯化汞对星星草成熟种子进行 消毒处理后，用无菌水冲洗，再将星星草成熟种子接种于愈伤组织诱导培养基，在25°C温度 下，暗培养观天。所添加的激素为植物激素KT。
权利要求
1.星星草愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述的方法是，先配置出愈伤组织诱导 培养基，配置时，采用基本培养基MS或N6，在基本培养基内分别加入基本培养基重量的 2 4%的蔗糖和基本培养基重量的0. 2 0. 4%的植物凝胶并进行混合，将上述混合后 的物料的PH值调整为5. 7 5. 9，然后添加激素，激素的用量为每升上述混合后的物料添 加0. 01 0. 5mg，制成愈伤组织诱导培养基；将星星草成熟种子剥去颖壳，用自来水浸泡 0. 7 0. 9小时，用无菌水冲洗后，再用质量百分比浓度为70%的酒精浸泡30 60秒，用 质量百分比浓度为0. 09 0. 11%的氯化汞或质量百分比浓度为1. 8 2. 的次氯酸钠 对星星草成熟种子进行消毒处理后，用无菌水冲洗，再将星星草成熟种子接种于愈伤组织 诱导培养基，在24 温度下，暗培养27 四天。
2.如权利要求1所述的星星草愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述的激素为2， 4- 二氯苯氧乙酸、6-苄氨基嘌呤和植物激素KT中的一种。
全文摘要
本发明提供了一种星星草愈伤组织的诱导方法，所述的方法是，先配置出愈伤组织诱导培养基，采用基本培养基MS或N6，在基本培养基内分别加入蔗糖和植物凝胶并进行混合，然后添加激素，制成愈伤组织诱导培养基；将星星草成熟种子剥去颖壳，浸泡、冲洗后，再用酒精浸泡，用氯化汞或次氯酸钠消毒处理，用无菌水冲洗，再将种子接种于愈伤组织诱导培养基，在24～26℃温度下暗培养。这种星星草愈伤组织诱导方法，可有效克服星星草数量少、种类不足的问题。可更好地应用于星星草组织培养快繁技术和利用体细胞克隆变异进行牧草育种工作。克服了实生种苗繁殖、分蘖繁殖受季节的影响、繁殖系数较低的问题；易于繁育新品种，繁育时间短。
文档编号A01H4/00GK102138520SQ20101010694
公开日2011年8月3日 申请日期2010年2月3日 优先权日2010年2月3日
发明者冯会, 孙国荣, 张晓博, 王台, 石文山, 陈刚 申请人:滨州职业学院