一种防治花生根结线虫的生物制剂及其制备方法与应用的制作方法

专利名称：一种防治花生根结线虫的生物制剂及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明属于属生物农药技术领域，特别涉及一种防治花生根结线虫的生物制剂及
其制备方法与应用。
背景技术：
植物根结线虫可以危害多种作物，造成危害十分严重。目前，其防治方法主要是化 学防治为主，但是由于化学方法常常使用高毒、高残留化学农药，对人畜危害巨大，有的杀 线剂已被禁用。因此，开发生物杀线虫剂具有十分重要的意义。 在线虫的微生物天敌中，有真菌和细菌等。其中真菌杀虫剂已有相关专利(发 明名称为一种生物杀线虫剂的生产方法，专利号为ZL03117930. 4)和2个商品化生产的 产品(法国生产的用于防治蘑燕线虫病的Roya1300以及用于防治番茄根结线虫病的 Royal350)。关于细菌制剂防治线虫病也有相关的专利，例如发明名称为"一种地衣芽孢杆 菌菌株(B-0A12)及其制剂"、专利号为ZL200310115535. 5的国家发明专利，其中主要报道 了用于防治大豆胞囊线虫病和镰刀菌引起的根腐病的细菌液体菌剂的生产方法，没有关于 在杀根结线虫方面的技术以及固体粉剂的工艺技术的报道。

发明内容
本发明的首要目的在于提供一种防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法。通过 该制备方法得到的生物制剂能有效防治花生根结线虫。 本发明的另一目的在于提供通过所述制备方法得到的防治花生根结线虫的生物 制剂。 本发明的再一目的在于提供所述防治花生根结线虫的生物制剂的应用。 本发明的目的通过下述技术方案实现一种防治花生根结线虫的生物制剂的
制备方法，包括以下步骤将链霉菌Str印tomyces sp. GDPPRA NH8(保存号CCTCC NO:
M206087)(已在发明名称为海洋微生物来源的杀虫化合物及其制备方法和应用、专利号为
ZL. 200610122276. 2的国家发明专利公开)菌体与固体粉剂混和得到。
所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，更优选包括以下步骤 (1)菌种活化在灭菌的高氏一号培养基中接入链霉菌菌种Str印tomyces sp.于
28 3(TC摇床培养，转速为170 200转/min、培养时间为8 16小时，得到活化的菌种； (2)菌体的大量繁殖发酵培养，培养基为高氏一号培养基，装液量为发酵罐体积
的70%，培养基灭菌后接种步骤(1)得到的活化的菌种，接种量为发酵培养基体积的5
10% ，泡敌量为0. 05 0. 1 % ，初始pH为7 7. 2，发酵温度28 30°C 、发酵培养12 36
小时，期间分别取样镜检菌体数，菌体老化前停止发酵； (3)菌剂加工将发酵液进行离心，获得的菌体与粒径小于1毫米的固体粉剂进行 混和，然后干燥至水分相对湿度小于质量百分比10%、粉碎，得到防治花生根结线虫的生物 制剂。
步骤(1)中所述的菌种活化更优选为通过以下步骤进行将高氏一号培养基配制 后，每500ml三角瓶中装液体100ml，灭菌后，接入菌种Str印tomyces sp. GDPPRA NH8，放入 摇床内发酵培养，温度为28 3(TC，转速为170 200转/min、培养时间为8 16小时， 得到活化的菌种； 步骤(2)中所述的发酵培养优选为应用1000L生物发酵罐发酵进行发酵，装液量 为700L ; 步骤(3)中所述离心的条件优选为5000 6000rpm，温度为25 30°C ;
所述的干燥是流化床干燥； 所述的固体粉剂优选滑石、高岭土、膨润土、硅藻土、陶土或麸皮中的至少一种； —种防治花生根结线虫的生物制剂，通过上述制备方法制备得到； 所述防治花生根结线虫的生物制剂的使用方法可以是拌种，拌土穴施、沟施，也可
以是喷雾； 所述防治花生根结线虫的生物制剂的使用时期可以是花生种子期，苗期和成株 期。 本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果 本发明通过对链霉菌Str印tomyces sp. GDPPRA NH8进行深层液体发酵，获得大量 的菌体；收集菌体与相应的填充剂制备成粉剂。本发明的制备方法有效地促进了链霉菌的 增殖。本发明具有原料成本低，生产工艺先进等特点，所制成的防治花生根结线虫的生物制 剂对花生寄生根结线虫防治效果达到80 85%。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1 (1)菌种培养将高氏一号培养基配制后，每500ml三角瓶中装液体100ml，灭菌
后，接入菌种Str印tomyces sp. GDPPRA NH8(保存号CCTCC NO :M206087)，放入摇床内发酵
培养，温度28t:，转速为200转/min、培养时间为16小时，得到活化的菌种； (2)菌体的大量繁殖应用IOOOL生物发酵罐发酵进行发酵，发酵液为高氏一号
培养基，装液量为700L，接种步骤(1)得到的活化的菌种70L，泡敌量为0. 05X，初始pH为
7. 2，发酵温度3(TC、发酵培养36小时，期间分别取样镜检菌体数，菌体尚未老化； (3)菌剂加工将发酵液于室温、6000rpm进行离心，获得的菌体与粒径小于1毫米
的固体粉剂(由滑石、高岭土和膨润土按质量比i : i : i混合而得)进行混和，菌体含量
占质量百分比1%，然后流化床干燥，流化床干燥的条件是温度不高于8(TC，干燥至水分相 对湿度小于质量百分比10%、粉碎，得到防治花生根结线虫的生物制剂。
实施例2 (1)菌种培养将高氏一号培养基配制后，每500ml三角瓶中装液体100ml，灭菌 后，接入菌种Str印tomyces sp. GDPPRA NH8，放入摇床内发酵培养，温度30°C ，转速为190 转/min、培养时间为18小时； (2)菌体的大量繁殖应用IOOOL生物发酵罐发酵进行发酵，发酵液为高氏一号培 养基，装液量为700L，接种步骤(1)得到的活化的菌种63L，泡敌量为0. 05X，初始pH为7，发酵温度2『C、发酵培养30小时，期间分别取样镜检菌体数，菌体尚未老化； (3)菌剂加工将发酵液于室温、6000rpm进行离心，获得的菌体与粒径小于1毫米
的固体粉剂(由硅藻土、陶土和麸皮按质量比i : i : i混合而得)进行混和，菌体含量占
质量百分比1%，然后流化床干燥，流化床干燥的条件是温度不高于8(TC，至水分相对湿度 小于质量百分比9%、粉碎，得到防治花生根结线虫的生物制剂。
实施例3 实施例2获得的菌体防治花生根结线虫的生物制剂的效果实验测定
(1)试验菌剂实施例2获得的菌体，菌体含量为3X108CFU/克。
(2)试验方法 ①室内实验将防治花生根结线虫的生物制剂与沙土 (50%细沙，10%煤渣和 40%的泥土)按质量比例混合，设置的比例为A组1 : IOO;B组I : 50;C组1 : 125; D组将生物制剂于8(TC灭菌3小时，再与沙土按质量比1 : 100混合；E组不加生物制剂
的沙土。取100ml的每种土样放到500ml有螺旋盖的的容器内，轻轻压实，接种花生根结线 虫的卵约20000粒，将湿度调到8%，盖上盖子后将整个容器置于一密闭的大容器内，大容 器内的温度为25t:，湿度为100%，放置4周后，用漏斗分离法分离、记数土壤中的线虫。
②温室实验将防治花生根结线虫的生物制剂与沙土 (50%细沙，10%煤渣和 40%的泥土 )按质量比1 : 100混合；接着在直径为30cm的塑料钵中填加2000ml前述混 合物，设5个重复，接种花生根结线虫的卵约20000粒/钵，4周后记数根系上的瘤结数。
3.结果 ①室内试验结果显示(表1)，在1 : 25处理中，菌剂对花生根结线虫卵的致死率 高达92%。 表1 :菌剂对花生根结线虫卵的致死率
处理幼虫数量死亡率(％)
A16092
B19890
C62069
D18845.8
E2000— ②温室试验的结果为对照的瘤结数为400个/株，菌剂处理的瘤结数为58个/株， 瘤结减少率为85.5%。 此实验结果说明本发明制备的防治花生根结线虫的生物制剂能有效抑制花生根 结线虫的生长。另外，本发明制备的生物制剂还能促进花生的生长，提高产量和品质。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化， 均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
一种防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤将链霉菌(Streptomyces sp.)GDPPRA NH8菌体与固体粉剂混和，干燥至水分相对湿度小于质量百分比10％，粉碎，得到防治花生根结线虫的生物制剂。
2. 根据权利要求1所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于所述 链霉菌(Str印tomyces sp. )GDPPRA NH8菌体通过如下步骤获得(1) 菌种活化在灭菌的高氏一号培养基中接入链霉菌(Str印tomyces sp.) GDPPRANH8，于28 30。C摇床培养，转速为170 200转/min、培养时间为8 16小时，得 到活化的菌种；(2) 菌体的大量繁殖发酵培养，培养基为高氏一号培养基，装液量为发酵罐体积的 70%，培养基灭菌后接种步骤(1)得到的活化的菌种，接种量为发酵培养基体积的5 10%，泡敌量为0. 05 0. 1 %，初始pH为7 7. 2，发酵温度28 3(TC、发酵培养12 36小时，期间分别取样镜检菌体数，菌体老化前停止发酵；将发酵液进行离心，得到链霉菌 (Str印tomyces sp. )GDPPRA NH8 ;所述固体粉剂的粒径小于1毫米。
3. 根据权利要求2所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于步骤(1) 中所述的菌种活化通过以下步骤进行将高氏一号培养基配制后，每500ml三角瓶中装 液体100ml，灭菌后，接入链霉菌(Str印tomyces sp. )GDPPRA NH8，放入摇床内发酵培养，温 度为28 3(TC，转速为170 200转/min、培养时间为8 16小时，得到活化的菌种。
4. 根据权利要求2所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于步骤(2) 中所述的发酵培养为应用IOOOL生物发酵罐发酵进行发酵，装液量为700L。
5. 根据权利要求2所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于步骤 (2)中所述离心的条件为5000 6000rpm，温度为25 30°C 。
6. 根据权利要求1所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于所述 的固体粉剂为滑石、高岭土、膨润土、硅藻土、陶土或麸皮中的至少一种。
7. 根据权利要求1所述防治花生根结线虫的生物制剂的制备方法，其特征在于所述 的干燥是流化床干燥。
8. —种防治花生根结线虫的生物制剂，通过权利要求1 7任一项所述的制备方法制 备得到。
9. 权利要求8所述防治花生根结线虫的生物制剂的应用，其特征在于所述防治花生 根结线虫的生物制剂的使用方式包括拌种，拌土穴施、沟施，以及喷雾。
10. 权利要求9所述防治花生根结线虫的生物制剂的应用，其特征在于所述防治花生根结线虫的生物制剂的使用时期包括花生的种子期、苗期和成株期。
全文摘要
本发明公开了一种防治花生根结线虫的生物制剂及其制备方法与应用。本发明通过在高氏一号培养基中接种链霉菌GDPPRA NH8，摇床培养，得到活化的菌种；接着于高氏一号培养基中发酵培养，装液量为发酵罐体积的70％，接种量为发酵培养基体积的5～10％，泡敌量为0.05～0.1％，初始pH为7～7.2，发酵温度28～30℃、发酵时间12～36小时；然后将发酵液进行离心，得到的菌体与粒径小于1毫米的固体粉剂进行混和，干燥至水分相对湿度小于10％、粉碎，得到防治花生根结线虫的生物制剂。该制备方法有效地促进了链霉菌的增殖，所制成的防治花生根结线虫的生物制剂对花生寄生根结线虫防治效果达到85％，且成本低。
文档编号A01N63/00GK101790995SQ201010111159
公开日2010年8月4日 申请日期2010年2月8日 优先权日2010年2月8日
发明者林壁润, 沈会芳, 潘群英, 蒲小明 申请人:广东省农业科学院植物保护研究所