专利名称：：一种西伯利亚鲟卵子短期保存液及其制备和应用的制作方法
技术领域：
：本发明属水生生物卵子保存液及其制备和应用领域，特别是涉及一种一种西伯利亚鲟卵子短期保存液及其制备和应用。
背景技术：
：西伯利亚鲟是我国主要的经济水产养殖品种，具有生长速度快、适应性强、肉质好、鱼籽酱品质高等优点，自1996年首次引入国内以来，现已发展成为养殖产量仅次于施氏鲟的第二大鲟鱼养殖品种。鱼类的卵子一经排出，其生存能力就会随时间的延长而迅速下降，卵子排出之后，选择和利用最佳保存时间对提高卵子的生存能力至关重要，排出的卵子必须在确定的时间内受精才能保证胚胎正常发育，如何提高鱼类卵子的生存能力在水产业的管理上显得越来越重要。西伯利亚鲟在人工催产的过程中常出现雄鱼排精和雌鱼排卵不同步的问题，如何实现卵子的短期保存，并保持较高的受精率和孵化率，是鲟鱼繁殖中所需解决的一个实际问题。光照、温度、氧气、保存液、PH等多种因素均会影响鱼类卵子短期保存的效果。有关鱼类卵子短期保存的研究，主要集中在鲑鳟鱼类、鲤形目鱼类，而关于利用保存液进行西伯利亚鲟卵子短期保存的技术，国内外尚未见报道。
发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种西伯利亚鲟卵子短期保存液及其制备和应用，该保存液实现了西伯利亚鲟卵子的短期保存，经保存后的卵子同样具有高达86.36%的受精率和94.74%孵化率及0%的畸形率，解决西伯利亚鲟雌雄催产效应时间不同步所带来的技术难题。本发明的一种西伯利亚鲟卵子短期保存液，其组分包括NaCl:120mmol/L葡萄糖4·24mmol/LKCl5.67mmol/L牛血清白蛋白BSA:lg/LMgSO4:0.78mmol/LHEPES缓冲盐20mmol/LCaCl2:0.65mmol/L青霉素20万IU/LNaHCO3:20mmol/L链霉素0.2g/LpH值8.0。本发明的一种西伯利亚鲟卵子短期保存液的制备，包括常温下，根据上述组分配制保存液，用lmmol/L的NaOH调节pH至8.0，即可。本发明的一种西伯利亚鲟卵子短期保存液应用于西伯利亚鲟卵子的短期保存，具体保存方法如下将西伯利亚鲟鱼的新鲜卵子完全浸泡于上述保存液中，于16°C下保存4h后，即可进行受精。有益效果本发明的西伯利亚鲟卵子短期保存液在适合的保存温度下，实现了西伯利亚鲟卵子的短期保存，经保存后的卵子同样具有高达86.36%的受精率和94.74%孵化率及0%的畸形率，解决西伯利亚鲟雌雄催产效应时间不同步所带来的技术难题。具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1保存液的配制本发明所配制的保存液主要是模拟西伯利亚鲟自身体腔液的环境，体腔液是鱼类排卵过程中随卵子一起排出体外的液体，它主要由体腔上皮细胞和卵巢的分泌作用形成的，其生化成分与血液较为接近。通过测定10尾西伯利亚鲟体腔液的生化成分，确定本发明保存液的配方为氯化钠120毫摩尔/升，氯化钾5.67毫摩尔/升，硫酸镁0.78毫摩尔/升，氯化钙0.65毫摩尔/升，葡萄糖4.24毫摩尔/升，碳酸氢钠20毫摩尔/升，牛血清白蛋白1克/升，HEPES缓冲盐20毫摩尔/升，青霉素20万国际单位/升，链霉素0.2克/升，用1毫摩尔/升的氢氧化钠调节pH至8.0。实施例2最佳保存方法的确定设定了2个保存温度4°C、16°C及4个保存时间4小时，8小时，16小时，24小时，共确定了8个不同保存条件的实验组。挑选质量最好的一尾雌鱼的卵子作为保存的试验材料。将2400粒卵子平均放入2个直径20cm深8cm的塑料盆中并加入保存液，保存液加入量以将卵子完全浸泡为宜，将塑料盆覆上保鲜膜后分别放入4°C冰箱冷藏室和16°C水浴锅中保存。每个实验组保存到预设保存时间后，分别取出300粒卵子，加入0.4毫升精子，加水激活精子并均勻搅拌，2分钟后用清水冲洗23次，将受精卵进行脱粘处理，将脱粘后的受精卵均勻分成3份，每份100粒，放置于小塑料筐中，于直径2.5米的孵化桶中进行孵化，孵化期间水温控制在16°C左右，水体交换量为300升/分钟。同时，另在产卵后立即取300粒卵子进行授精，与实验组于同等条件下脱粘孵化，作为对照组。统计各处理组的受精率、孵化率、仔鱼畸形率，结果见表1。表1不同保存温度和保存时间对西伯利亚鲟卵子受精率、孵化率和畸形率的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>从表中可以看出①受精率对照组平均受精率为94%，显著高于其它各处理组；随着保存时间的延长，受精率呈下降趋势。从保存温度对受精率的影响来看，16°C下保存48小时的受精率高于4°C，但16°C下卵子保存时间较短，受精率随保存时间的延长迅速下降，保存1624小时后卵子受精率为零。这表明16°C下短期保存48小时的效果要优于4°C，但4°C下保存时间较16°C长；②孵化率孵化率随保存时间的延长呈下降趋势，温度对孵化率有显著影响，160C下保存卵子的孵化率显著高于4°C；③畸形率随保存时间的延长，初孵仔鱼的畸形率呈上升趋势，16°C下畸形率显著高于4°C。因此，西伯利亚鲟卵子最佳保存条件为于16°C下保存4小时，能取得与新鲜卵子相似的效果，此时受精率、孵化率和畸形率分别为86.36%,94.74%和0。权利要求一种西伯利亚鲟卵子短期保存液，其组分包括NaCl120mmol/L葡萄糖4.24mmol/LKCl5.67mmol/L牛血清白蛋白BSA1g/LMgSO40.78mmol/LHEPES缓冲盐20mmol/LCaCl20.65mmol/L青霉素20万IU/LNaHCO320mmol/L链霉素0.2g/LpH值8.0。2.—种西伯利亚鲟卵子短期保存液的制备，包括常温下，根据上述组分配制保存液，用lmmol/L的NaOH调节pH至8.0，即可。3.根据权利要求1所述的保存液应用于西伯利亚鲟卵子的短期保存，其特征在于将西伯利亚鲟鱼的新鲜卵子完全浸泡于上述保存液中，于16°C下保存4h后，即可进行受精。全文摘要本发明涉及一种西伯利亚鲟卵子短期保存液，其组分包括氯化钠120mmol/L，氯化钾5.67mmol/L，硫酸镁0.78mmol/L，氯化钙0.65mmol/L，葡萄糖4.24mmol/L，碳酸氢钠20mmol/L，牛血清白蛋白1g/L，HEPES缓冲盐20mmol/L，青霉素20万IU/L，链霉素0.2g/L，pH值8.0；其制备包括常温下，根据上述组分配制保存液，用1mmol/L的NaOH调节pH至8.0。本发明的西伯利亚鲟卵子短期保存液实现了西伯利亚鲟卵子的短期保存，于16℃下保存4h后的卵子，受精率达86.36％，孵化率达94.74％，畸形率为0，解决西伯利亚鲟雌雄催产效应时间不同步所带来的技术难题。文档编号A01N1/02GK101810162SQ201010132530公开日2010年8月25日申请日期2010年3月25日优先权日2010年3月25日发明者侯俊利,冯广朋,刘鉴毅,庄平,张涛,田美平,章龙珍,赵峰,闫文罡,陈宁宁,颜世伟,马境,黄晓荣申请人:中国水产科学研究院东海水产研究所