专利名称：一种侧柏叶提取液及其制备方法、应用及使用方法
技术领域：
本发明涉及一种植物诱导剂，具体地，涉及一种作为植物诱导剂的侧柏叶提取液及其制备方法、在抗葫芦科作物霜霉病上的应用及使用方法。
背景技术：
目前在蔬菜病虫害防治中，使用化学农药防治的占80%以上，长期以来，大量农药的不合理使用造成了水体、土壤、大气污染和农产品有毒物质残留，严重危及农村生态系统的稳定和人类健康；并使病原生理小种产生抗药性，从而导致本已控制的病害再度猖獗，已成为制约农业可持续发展的重要因素。随着人们生活质量的提高和环保意识的增强，人们正致力于利用诱导制剂替代农药进行农作物保护的研究，向着绿色、安全、无公害方向发展农业生产。植物诱导抗病性是利用植物本身的防卫体系，借助于诱导因子激发植物整体抗性水平，提高抵抗病害的能力，是植物病害防治的一种新思路。这种利用生物的、物理的、或者化学的因子处理植物，将会改变植物病害反应，可使原来表现感病反应的植物产生抗性反应。诱导抗性是发掘植物内在抗性机制的一种新的病害治理对策，在实际应用中，诱抗剂的使用浓度非常底，一般为农药使用量的十分之一到五分之一左右。另外，在使用次数方面， 诱抗剂的使用次数少，在植物整个生长期使用2-3次即可。而使用农药防治病虫害时，一般 15-30天就得喷施一次。可以大大减轻化学防治的压力，提高农业生产系统的稳定性与可持续性，且对环境无不良影响，根据诱抗效果，诱抗剂甚至可以部分的代替农药。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中化学农药在防治病虫害中的缺陷，提出一种新的植物诱导剂——侧柏叶提取液及其制备方法。本发明的另一个目的是提供一种侧柏叶提取液作为植物诱导剂的应用及其使用方法。实现上述目的的技术方案如下—种侧柏叶提取液，其制备方法包括原料称重——洗净——烘干——粉碎——过筛——丙酮浸泡提取——过滤——合并滤液——浓缩——冷藏，其具体步骤如下(1)取多年生侧柏叶片，称重、洗净、烘干、粉碎、过100 120目筛；(2)将步骤(1)得到的过筛物质均分成三份，分别加入重量体积比为2 1 1， 合计体积> 200ml的分析专用丙酮，进行密封浸泡提取，浸泡时间分别为72h、48h、Mh ；(3)将步骤O)中经浸泡后的三份浸泡提取液分别过滤，后合并滤液；(4)将步骤(3)中得到的滤液分别浓缩后于0 4°C冷藏。进一步地，所述的烘干温度为60°C。进一步地，所述的浓缩过程是采用恒温箱在40°C进行浓缩。进一步地，所述的过滤过程是采用4层医用纱布进行过滤。
本发明的侧柏叶提取液还可作为植物诱导剂在葫芦科作物，如西瓜，甜瓜，黄瓜， 西葫芦等中使用，可用于防治霜霉病、白粉病、炭疽病、蔓枯病等。尤其是可以用在在抗甜瓜霜霉病上。本发明的侧柏叶提取液的使用方法为在葫芦科作物的幼苗期、伸蔓期、初花期以及幼果期对植株进行全株喷雾处理，在不同生育期各喷1 2次，使用浓度分别为0. 3mg/ ml,0. 5mg/ml,0. 7mg/ml，1. Omg/ml，优选 0. 5mg/ml0本发明与现有技术相比具有以下优点1、作为植物诱导剂，侧柏叶提取液的效果基本等同于苯并噻重氮(BTH)、水杨酸 (SA)、草酸(OAA)、硅酸钠(Na2SiO;3)等化学药剂，但来源广泛，取材方便，不受时间、空间和地域的限制，随时随地可以摘取，价格低廉。2、侧柏叶提取液的制备过程中所需设备较少，操作简单易行。3、它能部分替代农药，使用浓度非常低，使用次数大大减少，无污染无公害，对植物没有不良影响且对环境无不良影响。
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中图1为几种诱导剂处理后接菌对甜瓜幼苗叶片MDA含量的影响2为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片木质素含量的变化3为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片HRGP的变化4为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片POD活性的变化5为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片PAL活性的变化6为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片PPO活性的变化7为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片CHI活性的变化8为几种诱导剂处理+接菌后甜瓜幼苗叶片GLU活性的变化9为苗期几种诱导剂处理和霜霉菌接种后叶绿素总量的变化10为苗期几种诱导剂处理和霜霉菌接种后叶绿素a/b的变化11为几种诱导剂处理和霜霉菌接种后甜瓜幼苗Car的变化12为诱导剂处理和霜霉菌接种后对叶片净光合速率的影响13为几种诱导剂处理和霜霉菌接种后对叶片气孔导度的影响14为几种诱导剂处理和霜霉菌接种后对叶片胞间CO2浓度的影响15为不同时期诱导剂处理对甜瓜果实膨大期净光合速率的影响图
具体实施例方式以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1一种侧柏提取液，括原料称重——洗净——烘干——粉碎——过筛——丙酮浸泡提取——过滤——合并滤液——浓缩——冷藏，其具体步骤如下
(1)取甘肃农业大学校园内多年生侧柏叶片，用感量为0.001的电子天平秤取20g，先用自来水冲洗干净后再用蒸馏水(自制)冲洗，用上海博迅实业公司生产的 GZX-9070MBE烘箱在60°C下烘干，用天津华鑫仪器厂FW100粉碎机粉碎后，过100-120目普通尼龙网筛；(2)将步骤(1)得到的过筛物质均分成三份，分别加入装有100ml、50ml、50ml分析专用丙酮(天津光复化学有限公司生产)的烧杯中，进行(塑料薄膜密封)浸泡提取，浸泡时间分别为72h.48h.24h ；(3)将步骤( 中经浸泡后的三份浸泡提取液分别用4层医用纱布过滤，后合并滤液并密封存放在300ml容量瓶中；(4)将步骤(3)中得到的滤液用恒温箱在40°C下浓缩至0. 3mg/ml，0. 5mg/ml， 0. 7mg/ml，1. Omg/ml，存放在O 4°C普通冰箱内冷藏备用。上述侧柏叶提取液在抗葫芦科作物霜霉病中的使用方法为，在幼苗期、伸蔓期、初花期以及幼果期对植株进行全株喷雾处理，在不同生育期各喷1 2次，使用浓度分别为 0. 3mg/ml,0. 5mg/ml,0. 7mg/ml, 1. Omg/ml,其中 0. 5mg/ml 效果最好。下面以葫芦科作物甜瓜为例，来进一步说明本发明的侧柏叶提取液作为植物诱导剂在抗甜瓜霜霉病方面的应用，并通过多种不同诱导剂的对比试验进一步来说明其有益效果。1. 1 材料供试甜瓜品种为银帝和卡拉克赛，由甘肃农业大学瓜类研究所提供。卡拉克赛又名伽师瓜，是我国著名哈密瓜品种，易感霜霉病；银帝是近年西北地区的主栽品种，高抗霜霉病。供试菌种甜瓜霜霉病菌(Pseudoperonospora cubensis)，由甘肃省农科院提供。供试药剂BTH(澳大利亚悉尼大学提供)；SA、OAA(天津光复化学有限公司生产)；侧柏(采自农大校园)，番茄茎叶(采自甘肃省农科院温室)；洋葱、大蒜、韭菜(购于兰州市安宁区桃海市场)；中草药丁香、连翘、细辛、硫磺、明矾、苦参、蛇床子、花椒、苍耳、 黄柏(购于兰州市安宁黄河医药公司)。1. 2 方法1. 2. 1孢子悬浮液的制备采摘田间新鲜的甜瓜霜霉病叶片，用自来水冲洗掉上面的老孢子，在18 19°C下保湿Mh，促使新鲜孢子囊的产生。用毛笔蘸蒸馏水将新鲜孢子冲洗到烧杯中，再将其稀释成浓度为IOX显微镜下每个视野含有10 15个孢子的悬浮液。1. 2. 2试验处理1. 2. 2. 1诱导剂种类及浓度的筛选以卡拉克赛为试材，待幼苗长至五叶一心期时，采用下列浓度的药剂处理 BTH (0.3mmol/L、0. 5mmol/L、0. 7mmol/L)、SA (0.5mmoL/L、1. OmmoL/L、1. 5mmoL/L)、 0AA(15mmol/L、30mmol/L、45mmol/L)、侧柏(0. 5mg/ml、lmg/ml)、番茄茎叶(0. 5mg/ml、lmg/ ml)、葱蒜类(0.5mg/ml、lmg/ml)、中草药I (硫磺、明矾、苦参、蛇床子、花椒0. 5mg/ml、 lmg/ml)、中草药II (丁香、连翘、细辛:0. 5mg/ml、lmg/ml)、中草药III (苦参、苍耳、黄柏 0.5mg/ml、lmg/ml)。处理方法为用不同浓度的诱导剂分别涂抹处理幼苗第三片真叶，以Tween 80为助吸剂，叶面湿润为准，对照用TweenSO涂抹。3d后全株喷雾接种霜霉菌，接菌后5d、7d、9d统计病情指数。每处理种植15株，重复3次。1.2. 2.2盆栽试验处理以甜瓜银帝和卡拉克赛为试材，选取籽粒饱满、大小一致的甜瓜种子浸种催芽，露白后播种于盛有蛭石和珍珠岩(3 1)混合基质的塑料花盆(21CmX16CmX13Cm)中，幼苗至两叶一心时，每盆间留1株。定期浇灌l/2H0agland营养液，培养基质湿度维持在最大持水量的75%左右。待幼苗长到五叶一心时用BTH(0. 5mmol/L)、侧柏叶片提取液(0. 5mg/ ml)、中草药II制剂(lmg/ml)喷雾处理第3片真叶(叶面喷湿为止)，3d后全株接种霜霉菌，接种时用喷壶将霜霉菌孢子悬浮液均勻喷在甜瓜幼苗上。实验设5个处理=Tween 80 (CKl)、Tween 80+ 霜霉菌(CK2)、Tween 80+BTH+ 霜霉菌(BTH)、Tween 80+ 侧柏 + 霜霉菌 (侧柏)、Tween 80+中草药II +霜霉菌(中草药II )。分别在处理后(接菌后)3(0)、5 (2)、 8(5),11 (8)、14 (11) d对各指标进行测定，每测定三次重复。1. 2. 2. 3田间试验处理本试验于2008年5月至8月中旬在甘肃民勤县进行，以厚皮甜瓜银帝(抗病品种)和卡拉克赛(感病品种)为试材。选择土壤质地、肥力基本一致的土地铺膜种植，行距 1. 2米，株距0. 5米。在伸蔓期、初花期以及幼果期对甜瓜植株进行全株喷施药剂处理，试验设 6 个处理Tween 80 (CK)、Tween 80+ 伸蔓期 BTH、Tween 80+ 初花期 BTH、Tween 80+ 初花期侧柏、Tween80+初花期中草药II、Tween 80+伸蔓期+幼果期BTH、Tween 80+幼果期 BTH0在生育后期开始发病时对各种病害的发生进行统计，在果实发育期进行光合测定，果实成熟期进行果实品质测定。1.3指标测定方法1. 3. 1甜瓜抗霜霉病处理效果测定1. 3. 1. 1盆栽试验病害统计在接种后7d统计病情指数。每个处理每个重复随机调查5株，三次重复。按叶片感病面积根据GB/T农药田间药效试验准则(一)分9级记载，计算病情指数。分级标准如下0级叶片无病斑；1级病斑面积占叶面积5 %以下3级病斑面积占叶面积6 % 10 %5级病斑面积占叶面积11 % 25 %7级病斑面积占叶面积沈％ 50 %9级病斑面积占叶面积50 %以上结果统计方法病情指数=Σ (病级数X该级病株数)/(最高级数X各病级总株数)XlOO相对防效=(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数X 100%1. 3. 1. 2田间病害调查按照方中达等的方法，待田间开始发病时每7d调查一次病株率=发病株树/调查总株树X 100%病情指数=Σ (病级株数X代表数值)/(株数总和X发病最重级的代表值)X 100%
防效(<% )=(对照组平均病情指数-处理组平均病情指数)/对照组平均病情指数 XlOO1. 3. 2MDA 的测定硫代巴比妥酸法测定。取叶片0. 5g加5%^^(三氯乙酸)51111研磨成浆，1000\8 离心lOmin，取上清液2ml，加0. 67 % TBA (硫代巴比妥酸)2ml，沸水浴中加热30min，冷却后再离心一次，上清液在450nm、532nm、6(K)nm波长下比色，根据下式计算MDA含量MDA 的浓度(μ mol/L) = 6. 45* (0D532-0D600) -0. 56*0D450MDA的含量(μ mol/g FW) = MDA的浓度*反应体系体积(mL) *10_、提取液体积 (mL) /反应液体积(mL) /样品重量1. 3. 3抗病相关物质的测定1. 3. 3. 1木质素的测定参照X.H.波钦诺克的方法，取细胞壁干样50mg，用10%醋酸、丙酮等分离出可溶性和脂溶性化合物，用72%硫酸水解除去纤维素和半纤维素，沉淀用蒸馏水洗涤后，再向冲洗过的木质素沉淀中加IOml质量分数为10%的硫酸和0. lmol/L重铬酸钾溶液，将试管放入沸水浴中15min，并不时的搅拌，冷却后将所有物质转入烧杯中作滴定用，并用15-20ml 蒸馏水洗涤残余部分。然后向烧杯中加入5ml质量分数为20% KI溶液和Iml质量分数 0. 5%淀粉液，用硫代硫酸钠滴定，绿色时为终点，单独滴定加入了 IOml质量分数10%硫酸的0. ImoL/L的重铬酸钾溶液IOml作为空白对照。木质素的含量按下式计算X = K (a-b) / (n*48)式中48为ImolC11H12O4相当于硫代硫酸钠的当量数；K为硫代硫酸钠的浓度(moL/ L)，a为空白滴定所耗硫代硫酸钠体积(ml)，b为滴定溶液所耗硫代硫酸钠体积(ml)，η为甜瓜叶片细胞壁物质质量(g)。1. 3. 3. 2HRGP 的测定细胞壁的制备按李建华等所述的方法，取待测愈伤组织8. 0g，W lmol/L NaCl于研钵中充分研磨勻浆(镜检无完整细胞)，加lmol/L NaCl至30ml，4°C下静置过夜，用耐酸漏斗抽滤，残渣用lmol/L NaCl反复抽滤洗涤细胞残渣，直至滤液无蛋白为止(用考马斯亮蓝G-250法检测)。最后用蒸馏水反复抽滤洗涤，除去NaCl，所得残渣经60°C烘干即为细胞壁制品。细胞壁中HRGP(Hydroxyproline-rich glycoprotein)含量与羟脯氨酸(Hyp)含量成正相关，因此本研究以Hyp含量代表HRGP的相对含量，Hyp测定参照Kivirikko的方法，取细胞壁制品20mg，悬浮于5ml 6mol/LHCl中，110°C酸解18h。取酸解液2ml，用KOH 调PH值至7.0，加Iml pH8. 7硼酸缓冲液(0. 8mol/L)和2ml 0. 2mol/L氯胺T (用乙二醇甲醚配制)，室温下反应25min, 2ml 3. 6mo VLNa2S2O3终止反应，加2g KCl饱和后用3ml甲苯萃取，静置后吸去甲苯层，于沸水浴中加热30min，冷却后加細1甲苯充分混勻萃取，取甲苯层萃取液2ml与Iml对二甲氨基苯甲醛(DMAB)试剂(12g DMAB溶于20ml无水乙醇，再加 20ml无水乙醇与浓硫酸混合液(V/V = 100 13. 7)微热溶解)室温显色20min，A56(1nm测定OD值，根据标准曲线计算Hyp含量，即代表样品中HRGP的相对含量(mg/g)。标准曲线绘制分别取蒸馏水(对照)和不同浓度的羟脯氨酸标准液0.5ml，使每个测定体系中含HpyO 20g，加入Iml NaBrO4稀释液，室温下反应5min后，加入6mol/LHCl 0. 5ml，摇勻，再加入对二甲氨基苯甲醛正丙醇溶液1ml，混勻，于70°C恒温水浴中保温 15min，取出冷却至室温，在560nm测光密度值。以光密度值(OD)为纵坐标，羟脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线。1. 3. 4抗病相关酶活性的测定1. 3. 4. 1过氧化物酶(POD)活性的测定愈创木酚法测定。每品种每处理各取鲜叶lg，冰浴研磨，分3次加入IOmL重蒸馏水，以lOOOOr/min离心20min，取上清液测定活性。试管中加入5mL磷酸缓冲液，0. 028mL H2O2，0. 019mL愈创木酚，配成反应液，每3mL反应液中加入10 μ L酶提取液，在752分光光度计上测0，l,2min的OD42tl值，以每克鲜重每分钟增加0. 01 0D·为一个酶活性单位计算酶活性。1. 3. 4. 2苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的测定参照李合生方法略有所改动。取甜瓜叶片0. 2克，加5mL (含5mol/Li3-巯基乙醇、 0. IgPVP)的硼酸缓冲液，将勻浆全部转入离心管中。于6000r/min下离心20min，上清液即为粗酶提取液。取上清液1. OmL,加入1. OmLO. 02mol/L苯丙氨酸，2. OmL蒸馏水，总体积为 4mL，对照以LOmL蒸馏水代替底物，在^K)nm下测定一次后，反应液置恒温(30°C )水浴保温，30min后再测一次，以每小时在^Onm处吸光度变化0. 01所需酶量为一个活性单位。1. 3. 4. 3多酚氧化酶(PPO)活性的测定参照李合生方法测定。粗酶液的提取同POD酶液提取活性测定取上清液0. ImL加入1. 5mL0. 02mol/L邻苯二酚，1. 4mL磷酸缓冲液(PH =6. 8)，以磷酸缓冲液代替酶液作为对照，30°C反应2min，在398nm下测定吸光值，连续记录5min，以每克鲜重每分钟增加0. 01 OD470为一个酶活性单位计算酶活性。1. 3. 4. 4几丁质酶(CHI)活性测定参照史益敏方法，略有改动。胶状几丁质的制备称取Ig几丁质，加入丙酮研磨成糊状，在4°C下加入40mlHCL，用玻璃棉过滤，将过滤液加入到200ml50%乙醇中，使胶状几丁质沉淀析出并收集，用蒸馏水冲洗后，置透析袋中在4°C下透析过夜后保存于冰箱中酶液的提取取甜瓜叶片0. 2g，加入3ml 0. ImoL/L乙酸缓冲液(PH = 5. 0)，研磨后于4°C下1000 Xg离心lOmin，取上清液在4°C下透析过夜后置于冰箱中备用。酶活性的测定吸取胶状几丁质溶液1.5ml，加入0. ImoL/L的乙酸缓冲液 0. 5ml (PH = 4. 5)，酶液0. 4ml，75umol/L的叠氮钠溶液0. Iml，于37°C下保温2h后加入0. 8N 的硼酸缓冲液(PH = 9. 1)0. 5ml，在1000 Xg条件下离心5min，取上清液1. 5ml加入2ml高铁氰化钾溶液，100°C水浴15min，以蒸馏水为空白对照，于420nm下测定吸光值。根据标准曲线求出N-乙酰氨基葡萄糖量，以每小时分解胶状几丁质产生IugN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个单位(U)。标准曲线的制作将N-乙酰氨基葡萄糖配成0、6. 25、12. 5、25、50、100ug/ml标准溶液，取不同浓度的标准溶液各1. 5ml，分别加入2ml高铁氰化钾，置于100°C水浴15min，冷却后于420nm下比色(蒸馏水作为空白对照)，以吸光值为纵坐标，N-乙酰氨基葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。1.3.4. 5 β-1，3-葡聚糖酶(GLU)活性的测定
参照李合生方法有所改进。取Ig叶片组织，加入0. lmol/L的柠檬酸_0. 2mol/L 磷酸氢二钠缓冲液(PH5. 0) 5ml，在冰浴中研磨成勻浆，4°C下6000r/min离心30min，上清液为粗酶提取液。取粗酶提取液1ml，加0. lmol/L的柠檬酸-0. 2mol/L磷酸氢二钠缓冲液 (PH4. 8)2. 5ml，的昆布多糖0. 5ml，30°C水浴中保温lhr，蒽酮法测糖生成量，以每小时形成Img葡萄糖为1个酶活单位。标准方程:y= 0. 0075x(R2 = 0. 9995) ；χ 蔗糖浓度(μ g) ；y 吸光度可溶性糖含量(mg/g) = [CX (V/a) Xn]/(WX 103) :C_标准方程求得糖量(μ g)； a_吸取样品液体积(ml) ；V-提取液量(ml) ；n-稀释倍数；W-组织重量。1.3. 5光合作用的测定1.3. 5. 1叶绿素含量的测定参照张宪政的方法，称取剪碎混合的新鲜叶片0.5克，放入试管中并加入 10ml80%丙酮，封口后移入暗处保存浸提，待叶肉组织呈白色时则表明浸提完全。以80%丙酮为空白对照，分别在波长665、649、470下测定吸光度，按下列公式计算叶绿素 a 浓度(Ca) = 13. 95A665-6. 88A649叶绿素 b 浓度=(Cb) 24. 96A649-7. 32A665类胡萝卜素浓度(Ccar)= (1000A470-2· 05Ca_114. 8Cb)/245叶绿素含量(mg/g)=(色素浓度X提取液体积X稀释倍数)/样品鲜重1. 3. 5. 2气体交换参数的测定用便携式光合测定系统(CID-310，美国)进行，于处理(接菌)后11 (8) d测定第 3片真叶的瞬时净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)和胞间CO2 (Ci)浓度。每个处理3个重复， 每次重复测定3株，每叶记录3-5组稳定读数。1. 3. 6甜瓜果实大小及品质的测定果实成熟时测定单果重、果实肉厚、果肉硬度、可溶性固形物含量，重复三次，每次重复测定5个瓜。1.4数据分析用SPSS (16. 0)和 Excel (Office 2003)进行数据分析。2. 1不同诱导剂及其浓度的筛选结果表1不同浓度的各诱导剂对霜霉菌孢子萌发及预防效果
权利要求
1.一种侧柏叶提取液，其特征在于，由如下方法制备(1)取多年生侧柏叶片，称重、洗净、烘干、粉碎、过100 120目筛；(2)将步骤(1)得到的过筛物质均分成三份，分别加入体积比为2 1 1，合计体积 ^ 200ml的分析专用丙酮，进行密封浸泡提取，浸泡时间分别为72h、48h、Mh ；(3)将步骤O)中经浸泡后的三份浸泡提取液分别过滤，后合并滤液；(4)将步骤(3)中得到的滤液分别浓缩后于0 4°C冷藏。
2.一种侧柏叶提取液的制备方法，其特征在于，包括原料称重——洗净——烘干—— 粉碎——过筛——丙酮浸泡提取——过滤——合并滤液——浓缩——冷藏，其具体步骤如下(1)取多年生侧柏叶片，称重、洗净、烘干、粉碎、过100 120目筛；(2)将步骤(1)得到的过筛物质均分成三份，分别加入重量体积比为2 1 1，合计体积> 200ml的分析专用丙酮，进行密封浸泡提取，浸泡时间分别为72h、48h、Mh ；(3)将步骤O)中经浸泡后的三份浸泡提取液分别过滤，后合并滤液；(4)将步骤(3)中得到的滤液分别浓缩后于0 4°C冷藏。
3.根据权利要求2所述的一种侧柏叶提取液的制备方法，其特征在于，所述的烘干温度为60°C。
4.根据权利要求2所述的一种侧柏叶提取液的制备方法，其特征在于，所述的浓缩过程是采用恒温箱在40°C进行浓缩。
5.根据权利要求2所述的一种侧柏叶提取液的制备方法，其特征在于，所述的过滤过程是采用4层医用纱布进行过滤。
6.一种侧柏叶提取液作为植物诱导剂在葫芦科作物中的应用。
7.根据权利要求6所述的一种侧柏叶提取液作为植物诱导剂在葫芦科作物中的应用， 其特征在于，主要用于抗葫芦科作物霜霉病。
8.一种侧柏叶提取液在抗葫芦科作物霜霉病中的使用方法，其特征在于，在幼苗期、伸蔓期、初花期以及幼果期对植株进行全株喷雾处理，在不同生育期各喷1 2次，使用浓度分另 1J 为 0. 3mg/ml，0· 5mg/ml，0· 7mg/ml，1. 0mg/mlo
9.根据权利要求8所述的一种侧柏叶提取液在抗葫芦科作物霜霉病中的使用方法，其特征在于，使用浓度为0. 5mg/ml。
全文摘要
本发明公开了一种侧柏叶提取液及其制备方法、应用及使用方法，其中侧柏叶提取液的制备方法包括原料称重—洗净—烘干—粉碎—过筛—丙酮浸泡提取—过滤—合并滤液—浓缩—冷藏；该侧柏叶提取液可作为植物诱导剂在葫芦科作物中应用，尤其是在抗葫芦科作物霜霉病中的应用；使用时，可在不同生育期进行1～2次的全株喷施处理。本发明的侧柏叶提取液制备方法简便易行，作为植物诱导剂可部分代替化学农药，具有药效好、取材方便、无污染等特点。
文档编号A01N65/06GK102258060SQ201010181979
公开日2011年11月30日 申请日期2010年5月25日 优先权日2010年5月25日
发明者乔昌萍, 唐瑞永, 康恩祥, 张建农, 张玉鑫, 王春林, 陈年来, 陈菁菁, 韩国君 申请人:甘肃农业大学