专利名称：大花萱草圣诞红的组织培养方法
技术领域：
本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及一种大花萱草圣诞红的组织培养方法。
背景技术：
大花萱草‘圣诞红’为百合科萱草属植物，多年生草本，叶嫩绿色且，绿叶成丛极为美观；初夏开花，花大，漏斗形，直径IOcm左右，红色，花中心黄色，花色鲜艳，栽培容易，病虫害少，对环境的适应性强。萱草因观赏性强，适应环境，所以在园林中广泛应用，可大面积片植做地被，也可丛植或配置于花境中，也是小庭院美化的优良材料。目前国内常见的萱草品种为黄色的金娃娃和红色的‘红运’，色彩较为单一，而大花萱草‘圣诞红’为红黄复色，大红色花瓣中部亮黄色，非常美丽漂亮，且耐半荫，又可做疏林地被植物，是良好的花镜与庭院材料。因作为国外引进的品种引种数量较少，其分株慢，市场需求量大，种苗供应受限制。 目前国内关于大花萱草‘圣诞红’的组培报道尚未见。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状的大花萱草圣诞红的组织培养方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt%的乙醇浸泡20-40s，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min， 经无菌水冲洗5-6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成Icm长接种于花苞诱导培养基上或取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-3cm ；(4)生根培养取高度为2_3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20-30天，根系长至l_2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。所述的花苞诱导培养基的成分为MS+KTO. lmg/L+NAAl. Omg/L、MS+KTO. 3mg/ L+NAA3. Omg/L 或 MS+KTO. 5mg/L+NAA5. Omg/L。所述花苞诱导培养基的成分优选MS+KTO. 3mg/L+NAA3. Omg/L。所述的小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L、MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L。所述的不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L,MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L 或 MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. 3mg/L。所述不定芽增殖培养基的成分优选MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L。所述的壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. Omg/ L+NAAO. lmg/L 或 MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L。所述壮苗培养基的成分优选MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培养基的成分为MS+NAAO. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAAO. 2mg/L, 优选 MS+NAAO. lmg/L。所述的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为 24-26°C，光照为 70-90ymol/ms，pH 值为 5. 5-6. O。与现有技术相比，本发明通过组培技术，可大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为 75wt%的乙醇浸泡20s，lwt%。的升汞溶液浸泡lOmin，经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成Icm长，接种于花苞诱导培养基上，该花苞诱导培养基的成分为 MS+KTO. lmg/L+NAAl. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1. Omg/L+NAAO. lmg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L,不定芽迅速伸长，20天后可以长到2cm；(4)生根培养取高度为2cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的成分为MS+NAAO. 05mg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可， 移栽成活率可达到95%。以上的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为M°C， 光照为 70ymol/ms, pH 值为 5. 5。实施例2大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为 75wt%的乙醇浸泡40s，lwt%。的升汞溶液浸泡20min，经无菌水冲洗6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成Icm长，接种于花苞诱导培养基上，该花苞诱导培养基的成分为 MS+KTO. 5mg/L+NAA5. Omg/L ；(2)芽的分化和增殖花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA3. Omg/L+NAAO. :3mg/L，基部愈伤组织比较多， 但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA2. Omg/L+NAAO. 2mg/L,不定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm;(4)生根培养取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的成分为 MS+NAAO. 2mg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3cm ；(5)炼苗与移栽 继续生根培养20天，根系长至Icm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。以上的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为^TC, 光照为 90ymol/ms, pH 值为 6. 0。实施例3大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为 75wt%的乙醇浸泡30s，lwt%。的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗5次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成Icm长，接种于花苞诱导培养基上，该花苞诱导培养基的成分为 MS+KTO. 3mg/L+NAA3. 0mg/L ；
(2)芽的分化和增殖花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L,不定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm;(4)生根培养取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的成分为 MS+NAAO. lmg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25°C，光照为 80ymol/ms, pH 值为 5. 8。实施例4大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在初春取萱草‘圣诞红’植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上， 采用浓度为75wt%的乙醇浸泡30s，再利用lwt%。的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗5 次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长，将其接种于小芽诱导培养基上，该小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L,不定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm;(4)生根培养取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的成分为 MS+NAAO. lmg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25°C，光照为 80ymol/ms, pH 值为 5. 8。
实施例5大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在初春取萱草‘圣诞红’植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上， 采用浓度为75wt%的乙醇浸泡30s，再利用lwt%。的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗5 次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长，将其接种于小芽诱导培养基上，该小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L,不定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm;(4)生根培养取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的成分为 MS+NAAO. lmg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25°C，光照为 80ymol/ms, pH 值为 5. 8。实施例6大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在初春取萱草‘圣诞红’植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上， 采用浓度为75wt%的乙醇浸泡30s，再利用lwt%。的升汞溶液浸泡15min，经无菌水冲洗5 次后用无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成Icm长，将其接种于小芽诱导培养基上，该小芽诱导培养基的成分为MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L ；(2)芽的分化和增殖小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养，该不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L ；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，该壮苗培养基的成分为MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L,不定芽迅速伸长，20天后可以长到3cm;(4)生根培养
取高度为3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，该生根培养基的成分为 MS+NAAO. lmg/L, 10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20天，根系长至2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。上述培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为25°C，光照为 80ymol/ms, pH 值为 5. 8。
权利要求
1.大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽，用自来水冲洗池后于超净工作台上，用浓度为75wt%的乙醇浸泡20-40S，lwt%。的升汞溶液浸泡10-20min，经无菌水冲洗5-6次后用无菌滤纸吸干表面水份，取花苞基部切成Icm长接种于花苞诱导培养基上或取小芽基部切成Icm长接种于小芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖花苞接种于花苞诱导培养基上6周后，花苞开始膨大，出现黄绿色突起，3周后可见明显的愈伤组织，小芽接种于小芽诱导培养基4周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月， 然后切下带芽愈伤组织放入不定芽增殖培养基进行培养；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基中诱导出的丛生芽，将大丛芽分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20天后可以长到2-;3cm ；(4)生根培养取高度为2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，10天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm ；(5)炼苗与移栽继续生根培养20-30天，根系长至l_2cm时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。
2.根据权利要求1所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述的花苞诱导培养基的成分为 MS+KTO. lmg/L+NAAl. Omg/L、MS+KTO. 3mg/L+NAA3. Omg/L 或 MS+KTO. 5mg/L+NAA5. Omg/L。
3.根据权利要求2所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述花苞诱导培养基的成分优选MS+KTO. 3mg/L+NAA3. 0mg/L。
4.根据权利要求1所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的成分为 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
5.根据权利要求1所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述的不定芽增殖培养基的成分为 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L 或 MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 3mg/L。
6.根据权利要求5所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述不定芽增殖培养基的成分优选MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
7.根据权利要求1所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的成分为 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L、MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L 或 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
8.根据权利要求1所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述壮苗培养基的成分优选 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L。
9.根据权利要求1所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的成分为 MS+NAAO. 05mg/L、MS+NAA0. lmg/L 或 MS+NAAO. 2mg/L，优选 MS+NAAO. lmg/'L。
10.根据权利要求2或4或5或7或9所述的大花萱草圣诞红的组织培养方法，其特征在于，所述的培养基的成分还包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，该培养基的培养温度为M-26°C， 光照为 70-90 μ mol/ms, pH 值为 5. 5-6. 0。
全文摘要
本发明涉及大花萱草圣诞红的组织培养方法，该方法包括以下步骤，在萱草‘圣诞红’开花时摘取花苞或在初春取植株刚萌发的小芽，经过无菌材料的获得、芽的分化和增殖、不定芽壮苗培养、生根培养及炼苗与移栽获得萱草‘圣诞红’植株。与现有技术相比，本发明通过组培技术，可大大提高繁殖速度和苗木的整齐度，更好地保持原有的母本性状，并且能够提高成活率，从而提高产量，移栽成活率可达95％。
文档编号A01H4/00GK102265785SQ201010190810
公开日2011年12月7日 申请日期2010年6月2日 优先权日2010年6月2日
发明者沈勤, 陈建华, 黄建荣 申请人:上海上房园艺有限公司