专利名称：猪精液常温保存稀释液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种人工配制的猪精液常温保存复合稀释液，主要应用于养猪业的生 产繁殖当中。
背景技术：
我国自50年代开始就对猪的精液常温保存及人工授精技术进行了深入探索和研 究，经过半个多世纪不断的提高和发展，此项技术已趋于成熟。目前，猪的精液保存有常温 保存和低温保存两种方式。低温保存时由于猪精子质膜磷脂酰胆碱含量较低，而磷脂酰乙 醇胺和鞘磷脂含量较高，胆固醇分布不对称，在质膜外侧较多，而且胆固醇/磷脂比率显著 低与其它哺乳动物精子。这些特殊生理结构使猪的精子对低温特别敏感，冷冻保存技术难 度大，成本高、受胎率较低，至今仍处于试验阶段。因此，在猪的生产繁殖中普遍应用精液常 温保存技术。该技术的关键是采用良好的稀释液配方，为精子提供丰富营养物质、维持恒定 的渗透压、PH值等为精细胞的创造一个良好的生存环境。现今，一些发达国家如美国、意大 利、新西兰、日本等在猪的精液保存及人工授精技术方面的研究开发较为成熟，已经研制出 短、中、长效精液稀释液产品。短的可以使精液保存3 5天，中效可以使精液保存5 7 天，长效可以使精液保存7 10天而活力不发生大的改变，并能保持良好的授精率和产仔 数。在这些国家猪的人工授精技术已经得到全面普及。近几年来，我国的许多科研工作者也 对猪精液的常温保存稀释液配方和授精效果等方面进行了大量研究，并且取得了较大的进 展。但是，到目前为止，国内研制的猪精液稀释液配方中维持精细胞营养的物质均以糖和牛 血清白蛋白为主，成本偏高，且常温保存3 5天仍能保持良好授精效果的稀释液配方尚未 取得令人满意的成果(林永利薛永柱公猪精液保存的研究进展福建畜牧兽医2007年第二 期9-11 ；鲜红、郑红培猪精液常温保存研究进展黑龙江动物繁殖2004年第一期16-19 ；高 飞岳奎忠等猪精液液态保存的研究进展中国畜牧杂志2004年第六期46-49;张宝殉戈新军 等猪常温精液保存的研究进展猪业科学2009年第08期)。在我国市场上猪的精液稀释液 和人工授精产品多为国外进口。进口稀释液的价格昂贵，一般猪场难以承受。而自己配制 的稀释液质量又无法保证，各大猪场依然采用进口的稀释液。这将大大增加了我国养猪业 人工授精的生产成本，影响了猪的人工授精技术的推广，显然，猪的精液保存对猪人工授精 技术的普及极为重要。目前，随着养猪业的快速发展，可以预见，未来几年内我国猪的人工 授精技术将会全面应用和普及。开发研制拥有我国自主知识产权质优价廉的精液稀释液替 代进口产品，降低猪的人工授精生产成本，对促进我国养猪业健康持续发展具有重要意义。
发明内容
本发明起到供给猪精细胞营养，维持其渗透压、pH值等保护作用，从而扩大猪精液 容量、延长猪精液保存时间，使猪精液常温保存5 7天仍能维持较好活力和顶体完整率， 并保持良好的授精率和产仔数。本发明的技术方案为一种猪精液常温保存稀释液，该稀释液的溶质中主要供给猪精细胞营养物质的组份是单糖组合和氨基酸组合，单糖组合的重量为总溶质重量的 45% 55%，氨基酸组合的重量为总溶质重量的15% 25% ；其余25% 35%的溶质为 电解质、缓冲物以及抗氧化剂、稳定剂、抗菌素；所述单糖组合、氨基酸组合、电解质、缓冲物 以及抗氧化剂、稳定剂、抗菌素溶解于双蒸水中并定容至1000毫升，最终使所述稀释液的 渗透压保持在330 360mosmo/L、pH维持在6. 3 6. 5。所述单糖组合是葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、海藻糖；所述氨基酸组合是甘氨酸、 谷氨酸、精氨酸、颉氨酸；所述电解质、缓冲物包括柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠、磷酸二氢 钠、三羟甲基胺基甲烷、氯化钾、氯化镁；所述抗氧化剂包括维生素E、半胱氨酸；所述稳定 剂和抗菌素包括乙二胺四乙酸钠、青霉素、链霉素。所述稀释液的优选溶质配方及其重量份是葡萄糖3 8g、蔗糖1 5g、果糖1 4g、乳糖10 15g、海藻糖1 3g、甘氨酸1 4g、谷氨酸3 5g、精氨酸1 3g、颉氨酸 0. 5 1. 5g、柠檬酸1 3g、柠檬酸钠3 5g、碳酸氢钠2 4g、磷酸二氢钠1 3g、三羟 甲基胺基甲烷1 5g、氯化钾0. 2 0. 5g、氯化镁0. 3 0. 5g、维生素E0. 3 0. 5g、半胱 氨酸0. 2 0. 5g、乙二胺四乙酸钠1 2g、青霉素0. 07 0. 10g、链霉素0. 05 0. 07g ；最 后用双蒸水定容至1000mL。本发明主要应用于养猪业的生产繁殖当中，通过起到供给精细胞营养，维持其渗 透压、PH值等保护作用，达到扩大猪精液容量、延长猪精液保存时间，增加母猪与配头数、提 高母猪的受胎率和窝产仔数；使猪精液常温保存5 7天仍能维持较好活力和顶体完整率， 并保持良好的授精率和产仔数。本发明能够最大限度的提高优良种公猪的利用率、降低生产成本、发挥养猪业最 大的经济效益。特别是在加快和促进猪的人工授精技术的应用和推广方面具有重要意义。本发明最大的优势是以单糖组合和氨基酸组合替代了进口稀释液中的牛血清白 蛋白，其造价只有进口稀释液的1/3，降低了猪的人工授精生产成本，对促进我国养猪业健 康持续发展具有重要意义。本发明在2009 2010年的试验数据如下猪的精液在本发明的稀释液环境中常 温保存5 7天活力仍能保持在0. 6以上、顶体的完整率能达到85%，见表1 ；采用本发明 与配母猪260头，受胎率及产仔数分别达到90. 2%和10. 7只，见表2。受胎率及产仔数达 到或超过进口稀释液水平。表1本发明稀释液精子活力、顶体完整率 表2本发明2009-2010年人工授精试验结果
具体实施例方式实施例中所用的化学试剂均为优质分析纯。实施例1，一种猪精液常温保存稀释液，其溶质配方及其重量份是葡萄糖5. 5g、 蔗糖1. 5g、果糖1. 6g、乳糖15. 0g、海藻糖1. 5g、甘氨酸3. 2g、谷氨酸3. 8g、精氨酸1. 5g、颉 氨酸1. 0g、柠檬酸1. 8g、柠檬酸钠3. 3g、碳酸氢钠2. 2g、磷酸二氢钠1. 2g、三羟甲基胺基甲 烷4. lg、氯化钾0. 25g、氯化镁0. 32g、维生素E0. 5g、半胱氨酸0. 5g、乙二胺四乙酸钠1. 5g、 青霉素0. 07g、链霉素0. 05g ；将上述药品进行精确称量，加入双蒸水并定容至1000mL，36°C 水浴溶解1小时。实施例2，一种猪精液常温保存稀释液，其溶质配方及其重量份是葡萄糖3. 8g、 蔗糖5. 0g、果糖3. 2g、乳糖10. 0g、海藻糖2. 5g、甘氨酸3. 0g、谷氨酸4. 2g、精氨酸2. 2g、颉 氨酸1. 2g、柠檬酸1. 2g、柠檬酸钠3. 6g、碳酸氢钠3. 7g、磷酸二氢钠2. 6g、三羟甲基胺基 甲烷1. 7g、氯化钾0. 35g、氯化镁0. 45g、维生素E0. 35g、半胱氨酸0. 45g、乙二胺四乙酸钠 1. 0g、青霉素0. lg、链霉素0. 07g ；将上述药品进行精确称量，加入双蒸水并定容至lOOOmL， 36 °C水浴溶解1小时。实施例3，一种猪精液常温保存稀释液，其溶质配方及其重量份是葡萄糖7. 3g、 蔗糖2. 6g、果糖1. 2g、乳糖12. 0g、海藻糖1. 5g、甘氨酸3. 5g、谷氨酸3. 8g、精氨酸2. 2g、颉 氨酸0. 5g、柠檬酸2. 2g、柠檬酸钠4. lg、碳酸氢钠2. 5g、磷酸二氢钠1. 5g、三羟甲基胺基甲 烷2. 6g、氯化钾0. 43g、氯化镁0. 5g、维生素E 0. 3g、半胱氨酸0. 2g、乙二胺四乙酸钠1. 2g、 青霉素0. 08g、链霉素0. 06g ；将上述药品进行精确称量，加入双蒸水并定容至lOOOmL，36°C 水浴溶解1小时。用本发明保存猪精液的过程1.精液的采集与检测采用假猪台人工手握采精法采集精液，精液采集后立即送 实验室进行活力、活率、密度、色泽气味等项目检测。
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2.精液的稀释检测合格的精液立即进行稀释。根据精子活力和密度与以上配置 的稀释液进行1 10倍稀释，每毫升含活精子106。稀释方法将稀释液沿着玻璃棒缓慢分 次加入到精液中。第一次与精液等量的稀释，间隔1分钟后进行第二次稀释，第二次加入两 倍的稀释液，第三次全部加入。分次加入使精子能够更好的适应稀释液的生存环境。精液 与稀释液混合必须在同一温度下进行，并注意尽量减少精液与空气接触的时间。3.精液保存稀释后使用剩余的精液用3-4层毛巾被包裹放入15_18°C冰箱缓慢 降温保存。保存期间每12小时轻轻摇动一次，以减少精子长时间的休眠而死亡。再次输精 时从冰箱取出后轻轻摇动使精子悬起，分装输精。
权利要求
一种猪精液常温保存稀释液，其特征在于所述稀释液的溶质中主要供给猪精细胞营养物质的组份是单糖组合和氨基酸组合，单糖组合的重量为总溶质重量的45％～55％，氨基酸组合的重量为总溶质重量的15％～25％；其余25％～35％的溶质为电解质、缓冲物以及抗氧化剂、稳定剂、抗菌素；所述单糖组合、氨基酸组合、电解质、缓冲物以及抗氧化剂、稳定剂、抗菌素溶解于双蒸水中并定容至1000毫升，最终使所述稀释液的渗透压保持在330～360mosmo/L、pH维持在6.3～6.5。
2.根据权利要求1所述的猪精液常温保存稀释液，其特征在于所述单糖组合是葡萄 糖、蔗糖、果糖、乳糖、海藻糖；所述氨基酸组合是甘氨酸、谷氨酸、精氨酸、颉氨酸；所述电 解质、缓冲物包括柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、三羟甲基胺基甲烷、氯化钾、氯 化镁；所述抗氧化剂包括维生素E、半胱氨酸；所述稳定剂和抗菌素包括乙二胺四乙酸钠、 青毒素、链毒素o
3.根据权利要求2所述的猪精液常温保存稀释液，其特征在于所述稀释液的优选溶 质配方及其重量份是葡萄糖3 8g、蔗糖1 5g、果糖1 4g、乳糖10 15g、海藻糖1 3g、甘氨酸1 4g、谷氨酸3 5g、精氨酸1 3g、颉氨酸0. 5 1. 5g、柠檬酸1 3g、柠 檬酸钠3 5g、碳酸氢钠2 4g、磷酸二氢钠1 3g、三羟甲基胺基甲烷1 5g、氯化钾 0. 2 0. 5g、氯化镁0. 3 0. 5g、维生素E0. 3 0. 5g、半胱氨酸0. 2 0. 5g、乙二胺四乙酸 钠1 2g、青霉素0. 07 0. 10g、链霉素0. 05 0. 07g ；最后用双蒸水定容至1000mL。
4.根据权利要求3所述的猪精液常温保存稀释液，其特征在于所述稀释液的最优溶 质配方及其重量份是葡萄糖5. 5g、蔗糖1. 5g、果糖1. 6g、乳糖15. 0g、海藻糖1. 5g、甘氨酸 3. 2g、谷氨酸3. 8g、精氨酸1. 5g、颉氨酸1. 0g、柠檬酸1. 8g、柠檬酸钠3. 3g、碳酸氢钠2. 2g、 磷酸二氢钠1. 2g、三羟甲基胺基甲烷4. lg、氯化钾0. 25g、氯化镁0. 32g、维生素E0. 5g、 半胱氨酸0. 5g、乙二胺四乙酸钠1. 5g、青霉素0. 07g、链霉素0. 05g ；最后用双蒸水定容至 1000mL。
全文摘要
一种猪精液常温保存稀释液，该稀释液的单糖组合、氨基酸组合的重量分别为总溶质重量的45％～55％、15％～25％；其余25％～35％的溶质为电解质、缓冲物以及抗氧化剂、稳定剂、抗菌素；所述各种物质溶解于双蒸水中并定容至1000毫升，最终使所述稀释液的渗透压保持在330～360mosmo/L、pH维持在6.3～6.5。猪的精液在本发明的稀释液环境中常温保存5～7天活力仍能保持在0.6以上、顶体的完整率能达到85％；采用本发明与配母猪260头，受胎率及产仔数分别达到90.2％和10.7只，受胎率及产仔数达到或超过进口稀释液水平。本发明以单糖组合和氨基酸组合替代了进口的牛血清白蛋白，而其造价只有进口稀释液的1/3，大大降低了猪的人工授精生产成本。
文档编号A01N1/02GK101856016SQ20101020837
公开日2010年10月13日 申请日期2010年6月19日 优先权日2010年6月19日
发明者张尤嘉, 张振韬, 曲亚玲, 胡俊杰 申请人:张尤嘉