专利名称：一种豆科牧草的青贮复合菌添加剂的制作方法
技术领域：
本发明是一种生物技术领域的豆科牧草复合菌添加剂。由西北农牧结合区5种主栽豆科牧草的绿汁发酵液和自然发酵的优质青贮饲料分离筛选纯化而来的植物乳杆 lif (Lactobacillus plantarum)lif (Lactobacillus pentosus)禾口ILStIIi求lif (Streptococcus lactis)组成高活性微生物青贮复合菌剂，具有高效稳定、产酸性能强的特点。不仅能迅速降低青贮料的PH值，而且具有抑菌防腐作用。用其制作的青贮料蛋白质和其它营养物的水解很少，较好地保持青贮料的营养品质。该添加剂无腐蚀、无污染和无毒副作用，解决了豆科牧草青贮中不易控制的技术难题，对西北农牧结合区人工栽培豆科牧草均有效，是较为理想的青贮添加剂，对指导豆科牧草青贮的制作意义重大，市场前景广阔。
背景技术：
豆科牧草是家畜重要的蛋白质饲料来源，是发展节粮型畜牧业的物质基础，在我国西北地区三元种植结构中具有重要作用。随着人工饲草料基地建设的蓬勃发展，饲草在种植和产量都有大规模的增长，于是饲草出路成了问题，如何对饲草进行调制加工，实现草产品合理利用、转化成为关键。豆科牧草由于所处的重要位置，其矛盾显得尤为突出。由于青贮饲料具有干草不具备的生产特点和营养优点，又是家畜冬春季不可或缺的饲料类型， 正成为饲草产品市场新宠，因此，研究开发豆科牧草青贮技术就显得很重要。常用的青贮方法有鲜贮，凋萎青贮，添加剂青贮和混合青贮。理想的青贮原料应该具备可溶性糖分多，低的缓冲能，高于20%的干物质含量等条件。然而生产中豆科牧草不具备上述条件，按常规青贮方法难以成功，必须采取诸如田间萎蔫、精细切短或添加入一些必要的添加剂来满足。而且，通过添加有益的青贮微生物菌剂对提高青贮稳定性和品质，改善青贮料菌群结构，提高其风味和消化率以及饲喂效益，效果明显，作用巨大，正成为青贮调制必不可少的手段。在欧美、日本等发达国家，牧草青贮实践中经常使用的商品乳酸菌制剂属于特定的乳酸菌菌种，并不是对所有牧草种都适用，常常出现效果不稳定现象。近年来绿汁发酵液对改善豆科牧草青贮料的品质效果明显而受到重视，但由于缺乏严谨的技术和理论支持， 不便于保存和商品化等缺陷，尚未推广应用。针对目前青贮添加剂种类繁多而效果不一的现象，有必要探索和获得促进本地豆科牧草青贮的低成本高效微生物添加剂，有所针对地开发牧草青贮添加剂，促进豆科饲草青贮技术的提高和农牧民增收致富。青贮能否成功，在很大程度上取决于乳酸菌能否迅速而大量地繁殖。促进青贮发酵的乳酸菌为原料上附着的野生乳酸菌种的繁殖而产生的。由于原料中附着的在青贮发酵过程起重要作用的野生乳酸菌数量和种类很少，严重削弱乳酸菌的青贮发酵效果。针对此种情况，本发明从农牧结合区主栽豆科牧草的绿汁发酵液和自然发酵的优质青贮饲料样品中分离筛选出性状优良的乳酸菌，通过纯培养及添加处理，使附着在牧草表面的乳酸菌群增殖，提高乳酸菌作为优势菌群的数量，实现豆科牧草青贮的高效和稳定。本专利技术就是适应新时期市场对青贮添加剂的需要，因地制宜低开发新型豆科牧草青贮添加剂，指导和促进西北地区农牧结合区的牧草青贮生产技术。
发明内容
针对自然发酵的青贮饲料中乳酸菌的种类和菌数都很少的情况，发明从农牧结合区5种主栽豆科牧草青贮饲料中分离得到多种乳酸菌。对初步入选的菌株进行生理生化特征分析、产酸性能、活菌数及青贮效果比较，从中筛选出性状优良的乳酸菌菌株进行DNA测序鉴定，确定其种名，为制备青贮菌剂奠定基础。1.青贮饲料样品及绿汁发酵液制备取5种主栽豆科牧草，初花期同时刈割、晾晒至萎蔫状态(水分55%左右)，将5 种豆科草切成约Icm长度按重量等比例混合，紧密压实装入IL塑料瓶密封贮存，50d后开瓶取料，用于分离乳酸菌。将5种初花期豆科草新鲜植株绿色汁液按重量等比例混合，加糖后，在发酵罐中常温下密闭厌氧发酵2d，得到绿汁发酵液，备用。2.乳酸菌分离在无菌室中取混合青贮饲料样品及绿汁发酵液，用MRS液体培养基增菌培养，生理盐水稀释，吸取培养液涂布平板，然后挑取典型菌落MRS琼脂平板划线，37°C厌氧培养 48h，进行革兰氏染色、镜检。通过对菌体形态、菌落、部分生理生化特征及生物学活性的分析，凡是革兰氏阳性的菌株，继续分离纯化培养，纯化后的菌株进行斜面保存，备用。初步分离得到5株乳酸菌，进行编号并鉴定。3.筛选根据不同菌株的产酸能力、产酸速率以及活菌计数来进行比较，筛选适宜用作青贮饲料的菌株。将分离的5株乳酸菌分别按3%的接种量转入MRS液体培养基中，37°C恒温培养。 每隔池测定不同菌株发酵液PH值和乳酸菌活菌数，对pH值和乳酸菌活菌数进行比较，选出PH值降低快和活菌数多的性状优良的菌株3株。这些菌株发酵4 以上，能迅速降低pH 值，乳酸菌活菌数达到109CFU/ml。用3种乳酸菌按的接种量转入各青贮原料，通过感官评定，营养分析及青贮效果进行综合评定。与不添加组作对照，青贮料的颜色、气味和状态表现俱佳；乳酸含量高， PH值以下，丁酸及氨态氮含量极低，粗蛋白质损失小，较好保持青贮料的营养品质，有效提高了饲草的青贮品质并提高了青贮的稳定性。4.鉴定对3株菌进行DNA测序，基因库检索，确定其为植物乳杆菌(LactcAaciIlus plantarum)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)禾口乳酸链球菌(Streptococcus lactis)。三株菌产酸能力强，产生的细菌素等代谢产物具有抑菌防腐、促进营养物质吸收及提高机体免疫力作用。细菌素可被蛋白酶降解，不会在机体残留，安全而稳定，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然饲料防腐剂。5.使用植物乳杆菌、戊糖乳杆菌和乳酸链球菌按60% 20% 20%的重量百分比混合组成复合菌剂后，产酸能力和青贮效果最好。纯培养菌剂用生理盐水稀释3-5倍后，按青贮原料重的0. 2%添加，可以促进青贮发酵效果，提高青贮稳定性。
本发明的有益效果本发明可以促进豆科牧草青贮发酵效果，提高青贮稳定性，改善青贮饲料风味。本添加剂改善了青贮料内部菌群结构，提高了乳酸菌作为优势菌群的数量，提供了青贮所需的酸性环境，抑制了丁酸发酵及其他腐败菌的作用，防止蛋白质和其它营养物的水解，较好保持青贮料的营养品质，有效提高了饲草的青贮品质，是一种高效、无毒、安全、无副作用的理想的青贮添加剂，对豆科牧草青贮加工调制具有重要指导作用。
权利要求
1.一种青贮复合菌添加剂。其特征是由3株乳酸菌混合组成复合菌剂，能促进乳酸发酵，抑制其它腐败菌的作用，防止蛋白质和其它营养物的水解，青贮料风味好，保证青贮发酵品质优质稳定。
2.根据权利要求1的复合菌添加剂，其特征是复合菌剂由西北农牧结合区5种主栽豆科牧草的青贮发酵物分离筛选驯化出，由植物乳杆菌(LactcAacillus plantarum)、戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)禾口乳酸链球菌(Streptococcus lactis)，其在添力口剂中分别按60% 20% 20%的重量百分比混合组成。产酸及青贮效果优良产酸、抑菌防腐能力强，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然生物添加剂。
3.根据权利要求1的复合菌添加剂，其特征是复合菌剂纯培养后稀释3-5倍，按青贮原料重量的0. 2%添加。能有效提高豆科牧草青贮的稳定性，改善青贮料的品质。
全文摘要
本发明是一种生物技术领域的豆科牧草复合菌添加剂。该复合菌剂由产酸及青贮效果优良的植物乳杆菌、戊糖乳杆菌和乳酸链球菌组成。用其制作青贮，提高了乳酸菌作为优势菌群的数量，抑制了丁酸发酵及其他腐败菌的作用，提高青贮稳定性，青贮料风味好，营养损失少，能较好地保持青贮料的营养品质。该添加剂高效、无毒、安全、无副作用，对指导农牧区豆科牧草青贮的制作意义重大，市场前景广阔。
文档编号A23K3/03GK102450525SQ20101052905
公开日2012年5月16日 申请日期2010年10月25日 优先权日2010年10月25日
发明者张学洲, 李学森, 董志国, 郝兴明, 雷志刚 申请人:董志国