专利名称：人非小细胞肺癌cDNA文库结构的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种人非小细胞肺癌cDNA文库结构。属于医学医疗技术领域。
背景技术：
肺癌又称支气管肺癌，是起源于支气管和肺泡上皮细胞的恶性肿瘤。肺癌已成为 目前发病率和死亡率增长最快、对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤，WHO估计到2025 年我国将成为肺癌第一大国。肺癌5年生存率仅有10% 15%，晚期肺癌的治疗更是难 点。肺癌中80%是非小细胞肺癌，并且以鳞癌、腺癌和大细胞癌为主，多数发现时已经是中 晚期，手术，放化疗等综合治疗效果不理想。另外20%的肺癌是小细胞肺癌，其总体预后更 差。因此，对于肺癌的研究十分迫切。随着分子生物学技术的迅速发展，目前对肺癌的研究 已经深入到基因、蛋白等分子水平，其发病机制也被逐渐认识并推向运用，例如，靶向治疗 药物表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)已被美国FDA批准用于治疗晚期非小细 胞肺癌，并取得了令人鼓舞的效果。由于肺癌的发生机制极其复杂，仍需要广大医学工作者 努力去探索发现，其意义重大。众所周之，展开对临床组织标本研究是医学研究的一个重要环节，而临床组织标 本的获取则来之不易。人类肺癌组织标本对许多研究者，特别是对非临床研究人员来说更 显珍贵，因为它更能反应疾病本身，并能为非临床研究人员提供最直接的病人信息资料。然 而，由于多种原因的限制(如晚期患者样本来源局限、临床与基础实验室的分离、费用等) 使得肺癌组织样本取之不易。通常情况下，研究人员(尤其是非临床研究者)获取肺癌组 织标本的一种基本方式是与大型医院或者专科医院的临床外科医师合作，因此限制了肺癌 资源广泛而有效的运用于科研。目前，生物医学研究已经步入后基因组时代，肺癌作为人类高发肿瘤，对其基因的 表达和功能研究是目前肺癌研究领域中不可缺少的重要组成部分。真核生物的遗传信息主 要贮存于DNA的碱基序列中，而信使RNA (mRNA)起着遗传信息的载体作用，它将DNA上控制 蛋白质合成的遗传信息传递给核糖体，由后者翻译译成蛋白质，在细胞的生命活动中发挥 功能。因此，肺癌组织中的mRNA的种类和量成为重要研究对象。由于真核细胞RNA提取物 不稳定，容易被环境中的RNA酶降解，不易长期保存，因此不能高效的应用医学研究。目前，肺癌基因工程研究中，将信使核糖核酸(mRNA)逆转录为稳定cDNA是一个重 要的环节，它也是各项研究的基础。但是整个过程需要经过临床标本收集、组织细胞裂解、 总核糖核酸(RNA)的提取、纯化、浓度测定；RNA甲醛变性胶电泳及成像以及逆转录PCR等 操作流程。整个过程繁琐，耗时较长，RNA容易降解，而且组织样本来源也受到极大限制等。 由于临床样本资源和基础、临床研究不能很好的整合在一起，因此将肺癌基因研究进行大 规模的推广应用研究就受到了制约。
实用新型内容本实用新型的目的，为了提供一种人非小细胞肺癌cDNA文库结构，直接保存人非小细胞肺癌cDNA，使用者可以很方便地得到满足研究要求的样品，为科学研究节约时间、提 高效率，可以避免了由于真核细胞RNA提取物不稳定、容易被环境中的RNA酶降解的情况发 生。本实用新型的目的可以通过如下措施达到人非小细胞肺癌cDNA文库结构，其结构特点是它包括保温箱和位于保温箱的人 非小细胞肺癌cDNA标本组合；所述人非小细胞肺癌cDNA标本组合由冻存器组合和人非小 细胞肺癌cDNA标本体构成，各人非小细胞肺癌cDNA标本体分别储存在冻存器组合的冻存 器中。本实用新型的目的还可以通过如下措施达到本实用新型的一种实施方式是所述冻存器组合可以由多个冻存器以排列组合结 构形式构成，在保温箱中构成单层或二层以上排列组合式结构，形成纵向排列式组合结构、 横向排列式组合结构或纵向排列和横向排列式组合结构。本实用新型的一种实施方式是所述保温箱可以由超低温冰箱构成；所述冻存器 组合)的冻存器呈管状或盒状，即冻存器由冻存管或冰存盒构成。本实用新型的一种实施方式是所述超低温冰箱的温度可以为-80°C。本实用新型的一种实施方式是所述非小细胞肺癌cDNA标本可以包括肺腺癌 cDNA、肺鳞癌cDNA、I/II/III期非小细胞肺癌cDNA ；所述冻存器组合的冻存器由冰存管构 成，其中，至少一组冻存管中放置有所述肺腺癌cDNA、至少一组冻存管中放置有所述肺鳞癌 cDNA、至少一组冻存管中放置有所述I期非小细胞肺癌cDNA、至少一组冻存管中放置有所 述II期非小细胞肺癌cDNA、至少一组冻存管中放置有所述III期非小细胞肺癌cDNA。本实用新型的一种实施方式是所述非小细胞肺癌cDNA可以是通过以下步骤构 建而成的非小细胞肺癌组织细胞的裂解，核糖核酸的抽提、纯化、电泳、成像，信使核糖核 酸mRNA逆转录为cDNA。本实用新型的有益效果是1、本实用新型采用由多个冻存器以排列组合结构形式，在保温箱中构成单层或二 层以上排列组合式结构，形成纵向排列式组合结构、横向排列式组合结构或纵向排列和横 向排列式组合结构，使用者可以很方便地得到满足研究要求的样品，为科学研究节约时间、 提高效率。2、本实用新型采用标准化核糖核酸提取技术，整合广州呼吸疾病研究所肺癌标本 资源库资源，及时将大批量非小细胞肺癌组织样品进行核酸提取，构建非小细胞肺癌cDNA， 并最终储存在本实用新型所述的保存装置中，从而避免了由于核细胞RNA提取物不稳定， 容易被环境中的RNA酶降解，不易长期保存情况出现。同时，使用者仅需登录网站便可查询 得到满足研究要求的样品，为科学研究节约了时间，也提高了效率。非小细胞肺癌cDNA文 库产品保存与运输都十分方便、快捷，数据资料完善，从而实现了肺癌标本库资源与医学研 究的高效整合与利用。
图1是本实用新型一个具体实施例的结构示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施例、应用实施例及附图对本实用新型作进一步详细的描述具体实施例1 参照图1，本实施例包括保温箱1和位于保温箱1的人非小细胞肺癌cDNA标本组 合；所述人非小细胞肺癌cDNA标本组合由冻存器组合2和人非小细胞肺癌cDNA标本体构 成，各人非小细胞肺癌cDNA标本体分别储存在冻存器组合2的冻存器中。所述保温箱1可 以由超低温冰箱构成；所述冻存器组合2的冻存器由冻存管构成。超低温冰箱1的温度可 以为-800C ο本实施例中，所述非小细胞肺癌cDNA包括肺腺癌cDNA、肺鳞癌cDNA、I/II/III期非小细胞肺 癌cDNA ；其中，至少一组冻存管2中放置有所述肺腺癌cDNA、至少一组冻存管2中放置有所 述肺鳞癌cDNA、至少一组冻存管2中放置有所述I期非小细胞肺癌cDNA、至少一组冻存管 2中放置有所述II期非小细胞肺癌cDNA、至少一组冻存管2中放置有所述III期非小细胞 肺癌cDNA。所述非小细胞肺癌cDNA是通过以下步骤构建而成的非小细胞肺癌组织细胞 的裂解，核糖核酸的抽提、纯化、电泳、成像，信使核糖核酸(mRNA)逆转录为cDNA。其他具体实施例本实用新型其他实施例的特点是所述冻存器组合2的冻存器呈管状或盒状，即 冻存器可以由冻存管或冰存盒构成。其余同具体实施例1。以下详细描述人非小细胞肺癌cDNA的构建方法样品来源广州呼吸疾病研究所肺癌标本库(_80°C大型液态氮存储系统)。本实施例所述的一种人非小细胞肺癌cDNA文库的构建方法，它依次按以下步骤 进行1、非小细胞肺癌组织裂解将aiil圆底离心管做好编号，预先加入Iml Trizol (RNA提取试剂dnvetrogen公司)试剂后置于冰上备用；切取大小约IOOmg肺癌组 织后置于盛有Iml Trizol试剂离心管中。勻浆器勻浆均勻后，将勻浆液以12000rpm，4°C， 离心lOmin。远癌正常组织操作同肿瘤。2、总核糖核酸(RNA)的提取、纯化、浓度测定①收集上层悬液850ul置于1.5ml EP管内，室温15_30°C孵育5min后加入200ul 氯仿，用手上下振荡1 或30次，使之充分混勻成乳液状，室温孵育:3min ； 12000rpm，4°C离 心15min，置于冰上，避免摇晃；②吸取上层液体300ul，避免吸到中间白色蛋白层，置于一新的1. 5ml离心管中。③向管内加入0. 5ml异丙醇，混勻，室温孵育lOmin。低温离心12000rpm，4°C，离 心lOmin，可见半透明状的RNA。④弃上清，各加入事先配好的75%乙醇Iml (用0.1% DEPC水250u 1和100%乙 醇750ul配制)，振荡混勻，7500rpm，4°C离心5min。⑤弃上清，离心管倒置干燥约20min，直至无任何残留液体。⑥每管RNA样品加入0. 1 % DEPC水50ul，在液面下吹打3次混勻后室温放置5min， 以溶解RNA。⑦每管样品吸取2ul，加入盛有78ulddH20的1. 5ul的EP管中，吹打混勻。[0038]⑧超纯水清洗石英杯，调零，分别各标本Al (0D260nm)，A2 (0D280nm)值，并计算 出a、原样本RNA浓度=A260*40ug/ml*稀释倍数(10D的吸光值分别相当于40 μ g/ml的 RNA) ；b、Al/A2 值。参照表 1 表1非小细胞肺癌组织RNA样品质量控制表
权利要求1.人非小细胞肺癌CDNA文库结构，其特征是它包括保温箱(1)和位于保温箱(1)的 人非小细胞肺癌cDNA标本组合；所述人非小细胞肺癌cDNA标本组合由冻存器组合(2)和 人非小细胞肺癌cDNA标本体构成，各人非小细胞肺癌cDNA标本体分别储存在冻存器组合 (2)的冻存器中。
2.根据权利要求1所述的人非小细胞肺癌cDNA文库结构，其特征是冻存器组合(2) 由多个冻存器以排列组合结构形式构成，在保温箱(1)中构成单层或二层以上排列组合式 结构，形成纵向排列式组合结构、横向排列式组合结构或纵向排列和横向排列式组合结构。
3.根据权利要求1或2所述的人非小细胞肺癌cDNA文库结构，其特征是所述保温箱 (1)由超低温冰箱构成；所述冻存器组合( 的冻存器呈管状或盒状，即冻存器由冻存管或 冰存盒构成。
4.根据权利要求3所述的人非小细胞肺癌cDNA文库结构，其特征是所述超低温冰箱 (1)的温度为-800C 0
5.根据权利要求3所述的人非小细胞肺癌cDNA文库结构，其特征是所述非小细胞肺 癌cDNA标本包括肺腺癌cDNA、肺鳞癌CDNA、I/II/III期非小细胞肺癌cDNA ；所述冻存器组 合O)的冻存器由冰存管构成，其中，至少一组冻存管中放置有所述肺腺癌cDNA、至少一组 冻存管中放置有所述肺鳞癌cDNA、至少一组冻存管中放置有所述I期非小细胞肺癌cDNA、 至少一组冻存管中放置有所述II期非小细胞肺癌cDNA、至少一组冻存管中放置有所述III 期非小细胞肺癌cDNA。
专利摘要本实用新型涉及人非小细胞肺癌cDNA文库结构，其特征是它包括保温箱(1)和位于保温箱(1)的人非小细胞肺癌cDNA标本组合；所述人非小细胞肺癌cDNA标本组合由冻存器组合(2)和人非小细胞肺癌cDNA标本体构成，各人非小细胞肺癌cDNA标本体分别储存在冻存器组合(2)的冻存器中；冻存器组合(2)由多个冻存器以排列组合结构形式构成。本实用新型采用由多个冻存器以排列组合结构形式，在保温箱中构成单层或二层以上排列组合式结构，形成纵向排列式组合结构、横向排列式组合结构或纵向排列和横向排列式组合结构，使用者可以很方便地得到满足研究要求的样品，为科学研究节约时间、提高效率。
文档编号A01N1/02GK201857441SQ201020150818
公开日2011年6月8日 申请日期2010年3月30日 优先权日2010年3月30日
发明者何建行, 卢文菊, 张奇, 张雅洁, 徐小明, 杨海红, 殷伟强 申请人:广州医学院, 广州呼吸疾病研究所