专利名称：一种樱桃萝卜种质抗黑腐病的快速鉴定方法
技术领域：
本发明为园艺作物抗病育种领域，具体涉及一种樱桃萝卜中质抗黑腐病的快速鉴定方法。
背景技术：
发展特菜生产是有效促进都市经济和农业增收的重要途径。萝卜是人们倍受喜欢的一种根类蔬菜之一，其肥壮的肉质根长圆锥形，富含糖类、蛋白质和多种维生素，其营养价值极高，故又有“小人参”之称。樱桃萝卜学名Raphanus sativus L. var. radculus pers， 十字花科萝卜属，一二年生草本。樱桃萝卜具有品质细嫩，生长迅速，外形、色泽美观等特点，适于生吃。萝卜起源于欧洲、亚洲温暖海岸，是世界上古老的栽培作物之一；以其外观小巧玲珑、口感甜脆、货架期长的袖珍樱桃萝卜非常受消费者的欢迎。黑腐病是樱桃萝卜的容易发生的一种主要病害，也是多种十字花科蔬菜的常见病害，分布广泛，发生普遍，以露地种植发病严重。病情严重时对袖珍樱桃萝卜生产影响较大。 黑腐病主要发生在叶片、叶柄及茎上。叶片受害，多形成暗褐色不规则形坏死斑，相互连接成坏死大斑，最后造成叶片枯死。叶柄和茎上病斑为梭形至长条形，边缘初期不明显，后期呈暗褐色，空气潮湿病斑表面产生黑色霉层，既病菌的分生孢子梗和分生孢子。贮藏期往往引起块根黑褐色腐烂。病斑初期为近圆形凹陷斑，后期变成不规则形坏死大斑并深入内部使块根变黑腐烂，潮湿时病斑表面易产生黑霉。从抗病育种工作的角度出发，如果能够从樱桃萝卜主产区分离出病原菌，建立鉴别寄主并鉴别优势生理小种，筛选抗病品种是有效而又迫切的防控蔬菜病害的主要方法之一，将大大提高我国樱桃萝卜产区种植的经济效益。在抗病育种过程中，苗期在室内进行则环境条件较易控制，鉴定周期短、速度快，建立樱桃萝卜苗期室内抗黑腐病抗病性鉴定方法有利于抗病育种工作的开展，填补国内樱桃萝卜黑腐病抗病育种研究空白。
发明内容
本发明提供一种樱桃萝卜种质抗黑腐病的快速鉴定方法，与大田成株期接种相比，避免了气候条件不适宜、环境中病虫害等因素的影响，苗期在室内进行抗病性筛选则条件较易控制，鉴定周期短、速度快，能节省大量人力物力；确定了适宜的黑腐病悬浮液浓度、 樱桃萝卜抗病性筛选苗龄。本发明采用的技术方案是—种樱桃萝卜种质抗黑腐病的快速鉴定方法，其特征在于按以下步骤依次组成(1)供试材料准备供试的黑腐病菌种为根生链格孢(Alternaria radicina)，活体接种；供试的樱桃萝卜(为市售产品，购买于湖北省农业科学院)，染色体数2n = h = 18 ；将供试的种子播种在装有灭菌基质的花盆(8cm*8cm)内，出苗后每盆留1_3株。(2)接种
直接采用孢子悬浮液喷雾接种，接种后将供试植株放入塑料盒内，用保鲜膜保湿 48h。每供试材料设置3次重复，每次重复30株苗，以清水为对照，设置液孢子浓度5. 0 X IO4 个/mL、5. OX IO5个/mL、5. OX IO6个/mL、5. OX IO7个/mL四种接种浓度的孢子悬浮液和 2-4、5-7、8-9叶期三种苗龄，在20-25°C、相对湿度(RH) 95%以上诱导发病，置于光照培养室中，接种后第7d、第14d与第20d调查病情指数；(3)病情指数分级病情指数分级标准以叶片为单位，按0-4级标准进行发病程度调查。a.剪叶法分级标准0级无症；0. 1级病斑从接种伤口处向内扩展深度小于Imm ；0. 5级2-5mm以下； 1级5-10mm以下；2级10-15_以下；3级15-20_以下；4级20_以上。b.喷雾法分级标准0级无病；0. 1级叶上有一个小斑；0. 5级叶上有几个病斑，或一个较大的病斑； 1级叶上发病区占叶面积的1/4 ；2级叶上发病区占叶面积的1/2 ；3级叶上发病区占叶面积的3/4 ；4级病区占叶面积3/4以上至全叶。所述的光照培养室内温度优化为15-20°C ；所述的黑腐病孢子悬浮液浓度优选为 5. 0 X IO6个/mL ；所述的黑腐病孢子悬浮液喷雾接种植株为2 4叶期幼苗，保湿Mh，14天
后调查病情。本发明取得的有益效果1、按步骤进行鉴定的方法与大田成株期接种相比，避免了气候条件不适宜、环境中病虫害等因素的影响，苗期在室内进行抗病性筛选则条件较易控制，鉴定周期短、速度快，能节省大量人力物力。2、确定了适宜的黑腐病悬浮液浓度，该方法确定5. OX 106个/mL的黑腐病孢子悬浮液最为适宜。3、确定了适宜的樱桃萝卜抗病性筛选苗龄，该方法确定2 4叶期进行抗病性筛选最为适宜。4、樱桃萝卜抗黑腐病室内抗病性鉴定方法病级划分没有可以参考的标准，首次制定了樱桃萝卜抗黑腐烂病苗期室内喷雾法接种病情指数分级标准。
具体实施例方式下面对本发明作一详细说明实施例(1)供试材料准备供试的黑腐病菌种为根生链格孢(Alternaria radicina)，为活体接种；供试的萝卜品种为樱桃萝卜(为市售产品，购买于湖北省农业科学院)，染色体数2n = 2x = 18 ；将
供试的种子播种在装有灭菌基质的花盆(8cm*8cm)内，出苗后每盆留1_3株。(2)接种直接采用孢子悬浮液喷雾接种，接种后将供试植株放入塑料盒内，用保鲜膜保湿 48h。每供试材料设置3次重复，每次重复30株苗，以清水为对照，设置液孢子浓度5. 0 X IO4 个/mL、5. OX IO5个/mL、5. OX IO6个/mL、5. OX IO7个/mL四种接种浓度的孢子悬浮液和 2-4、5-7、8-9叶期三种苗龄，在20-25°C、相对湿度(RH) 95%以上诱导发病，置于光照培养室中，接种后第7d、第14d与第20d调查病情指数；
(3)病情指数分级病情指数分级标准以叶片为单位，按0-4级标准进行发病程度调查。a.剪叶法分级标准0级无症；0. 1级病斑从接种伤口处向内扩展深度小于Imm ；0. 5级2-5mm以下； 1级5-10mm以下；2级10-15_以下；3级15-20_以下；4级20_以上。b.喷雾法分级标准0级无病；0. 1级叶上有一个小斑；0. 5级叶上有几个病斑，或一个较大的病斑； 1级叶上发病区占叶面积的1/4 ；2级叶上发病区占叶面积的1/2 ；3级叶上发病区占叶面积的3/4 ；4级病区占叶面积3/4以上至全叶。1. 4数据处理所有数据均采用SPSSl 1. 5 (LSD，ρ < 0. 05)进行统计分析处理，采用Microsoft Office Excel 2003 进行制图。2结果与分析2. 1不同接种浓度对抗病性的影响黑腐病的发病程度与接种物浓度呈正相关。从第10天表现典型症状的病情指数调查结果来看，以5. OX IO4个/mL、5. OX IO5个/mL接种发病慢，发病程度也较低，四种材料间发病差异不显著；以、5. 0 X IO6个/mL、5. 0 X IO7个/mL两个浓度接种时，四种材料间发病差异一致，浓度大、发病快。2. 2不同接种苗龄对抗病性的影响2 4叶期苗龄时，四种材料发病程度都比较重，病情指数值高，随着苗龄的增加， 发病程度呈现减轻趋势，说明随着苗龄的增加其抗病力也增强。5 6叶期、7 8叶期苗龄四种材料间发病差异一致，但从发病情况来看，苗龄大接种后发病较慢。3、结论研究结果表明，所述的光照培养室内温度优化为15-20°C ；所述的黑腐病孢子悬浮液浓度优选为5. 0 X IO6个/mL ；所述的黑腐病孢子悬浮液喷雾接种植株为2 4叶期幼苗， 14天后调查病情，该结论为樱桃萝卜抗黑腐病抗病育种工作打下了基础。
权利要求
1.一种樱桃萝卜种质抗黑腐病的快速鉴定方法，其特征在于按以下步骤依次组成(1)供试材料准备供试的黑腐病菌种为根生链格孢(Alternaria radicina)，菌种接种采用活体接种方法；供试的萝卜品种为樱桃萝卜；将供试的种子播种在装有灭菌基质的花盆(8cm*8cm)内， 出苗后每盆留1-3株。(2)接种直接采用孢子悬浮液喷雾接种，接种后将供试植株放入塑料盒内，用保鲜膜保湿48h。 每供试材料设置3次重复，每次重复30株苗，以清水为对照，设置液孢子浓度5. 0 X IO4个/ mL、5. OX IO5个/mL、5. OX IO6个/mL、5. OX IO7个/mL四种接种浓度的孢子悬浮液和2-4、 5-7,8-9叶期三种苗龄，在20-25°C、相对湿度(RH) 95%以上诱导发病，置于光照培养室中， 接种后第7d、第14d与第20d调查病情指数；(3)病情指数分级病情指数分级标准以叶片为单位，按0-4级标准进行发病程度调查。a.剪叶法分级标准0级无症；0. 1级病斑从接种伤口处向内扩展深度小于Imm ;0. 5级2-5mm以下；1级 5-10_以下；2级10_15_以下；3级15-20mm以下；4级20mm以上。b.喷雾法分级标准 0级无病；0. 1级叶上有一个小斑；0. 5级叶上有几个病斑，或一个较大的病斑；1级叶上发病区占叶面积的1/4 ；2级叶上发病区占叶面积的1/2 ；3级叶上发病区占叶面积的 3/4 ；4级病区占叶面积3/4以上至全叶。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的光照培养室内温度优化为15-20°C； 所述的黑腐病孢子悬浮液浓度优选为5. OX IO6个/mL ；
3.如权利要求1或2的方法，所述的黑腐病孢子悬浮液喷雾接种植株为2 4叶期幼苗，保湿Mh，14天后调查病情。
全文摘要
本发明提供一种樱桃萝卜种质抗黑腐病的快速鉴定方法，其特征在于按以下步骤依次组成(1)供试材料准备、(2)接种和(3)病情指数分级，确定了适宜的黑腐病悬浮液浓度、樱桃萝卜抗病性筛选苗龄，与大田成株期接种相比，避免了气候条件不适宜、环境中病虫害等因素的影响，苗期在室内进行抗病性筛选则条件较易控制，鉴定周期短、速度快，能节省大量人力物力。
文档编号A01G1/00GK102217501SQ20111006548
公开日2011年10月19日 申请日期2011年3月18日 优先权日2011年3月18日
发明者丁自立, 何云启, 崔磊, 张兴中, 梅时勇, 梅雪飞, 王晴芳, 甘彩霞, 高翔, 黄来春 申请人:湖北省农业科学院经济作物研究所