专利名称：一种杀菌组合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种农用杀菌药剂及其应用，具体地说涉及一种杀菌组合物及其应用。
背景技术：
随着国民经济的快速发展和人民生活水平的不断提高，社会对农产品的质量及其安全性提出了更高的要求。很多农作物由于采用规模化大批量的生产管理模式，容易引发病虫害。比如近年来，草莓的灰霉病出现频率越来越高，病害也逐渐严重，成为草莓生产的制约因素；黄瓜、番茄大面积种植也会出现枯萎病；又如水稻纹枯病，在近十年来，由于大面积种植晚熟型的优质、高产水稻品种，以及气候变暖和轻型栽培技术的推广使用，水稻纹枯病发生为害总体呈大幅度上升态势。据统计，每年光是用于防治水稻纹枯病的药剂多达上万吨，这不仅造成了严重的水田生态环挠和水质污染，而且直接增加了稻米中有毒化学物质的残留，对人类健康造成严重威胁。因此，提供优质高产的安全农产品已经成为当今农业发展的重要方向。枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是芽孢杆菌属的一种。是一种嗜温、好氧、产芽孢的杆状细菌，其生理特征多样，分布广泛，极易分离培养。该菌在自然界中广泛存在， 对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力。枯草芽孢杆菌可在土壤、植物根系、体表等外界环境中广泛存在，已经在水稻、棉花、辣椒、番茄、花卉等农作物上显示出很好的病害防治效果。由于枯草芽抱杆菌具有生长快、营养简单以及产生耐热、抗逆芽孢等突出特征，使其有利于生防菌剂在生产、剂型加工及在环境中的存活、定殖与繁殖，并且批量生产工艺简单，成本较低，施用方便，储存期长，现已成为一种理想的生防细菌。多抗霉素，又称多氧霉素，分子式=C17H25N5O13,1965年由日本最早发现，是具有肽嘧啶核苷酸类结构的抗生素。其作用机理主要是干扰病原细胞壁几丁质的生物合成，芽孢和菌丝体接触药剂后局部膨大破裂，溢出细胞内含物，导致死亡。多抗霉素具有抑制病菌产孢和病斑扩大的作用。对子囊菌、担子菌、半知菌类中许多病原真菌具有较高的活性，稳定性和安全性好，市场价格较低。
发明内容
发明目的本发明的目的是提供一种杀菌组合物，得到一种对草莓灰霉病、黄瓜枯萎病、水稻纹枯病防治效果更好的杀菌组合药剂；本发明的另一个目的是技术方案为实现上述目的，本发明的一种杀菌组合物，活性成分包括枯草芽孢杆菌和多抗霉素，所述活性成分占总重量的10 85%，所述枯草芽孢杆菌占活性成分重量的 10 70%。所述杀菌组合物为可湿性粉剂。除了包括活性成分外，还包括助剂和填充辅料，其中，助剂包括湿润剂、分散剂，填充辅料包括轻质碳酸钙。所述助剂和填充辅料为制备可湿性粉剂所采用的常见助剂和填充辅料。有益效果本发明提供的杀菌组合物，在草莓灰霉病、黄瓜枯萎病、水稻纹枯病上的防治效果和活性都要优于单一采用多抗霉素或枯草芽孢杆菌作为活性成分配制成的杀菌药剂。由于活性成分中的两种药剂的作用机制不同，缓解了多抗霉素的抗性问题，延长药剂的使用寿命。
具体实施例方式实施例1将下列组分按一定重量百分比配制多抗霉素原药7.85g;枯草芽孢杆菌5g;湿润剂K12 (十二烷基硫酸钠) 4g ；分散剂NNO (亚甲基二萘磺酸钠) 8g ；轻质碳酸钙补足至100g。其中，32%多抗霉素原药由武汉天惠生物工程有限公司提供；200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂由武汉科诺生物科技股份有限公司提供。将多抗霉素原药、枯草芽孢杆菌按上述比例置于混合器，加入一定比例的湿润剂K12和分散剂ΝΝ0，用轻质碳酸钙填充至100%，所有物料做混合器中混合均勻后，经气流粉碎2次，即成2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂。实施例2将下列组分按一定重量百分比配制多抗霉素原药50g;枯草芽孢杆菌35g ；
湿润剂K12 (十二烷基硫酸钠) 4g ；分散剂NNO (亚甲基二萘磺酸钠) 8g ；轻质碳酸钙补足至100g。其中，32%多抗霉素原药由武汉天惠生物工程有限公司提供；200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂由武汉科诺生物科技股份有限公司提供。将多抗霉素原药、枯草芽孢杆菌按上述比例置于混合器，加入一定比例的湿润剂K12和分散剂ΝΝ0，用轻质碳酸钙填充至100%，所有物料做混合器中混合均勻后，经气流粉碎2次，即成2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂。实施例3将下列组分按一定重量百分比配制多抗霉素原药50g ；枯草芽孢杆菌5g ；湿润剂K12 (十二烷基硫酸钠)4g ；分散剂NNO (亚甲基二萘磺酸钠) 8g ；轻质碳酸钙补足至100g。 其中，32%多抗霉素原药由武汉天惠生物工程有限公司提供；200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂由武汉科诺生物科技股份有限公司提供。将多抗霉素原药、枯草芽孢杆菌按上述比例置于混合器，加入一定比例的湿润剂K12和分散剂ΝΝ0，用轻质碳酸钙填充至100%，所有物料做混合器中混合均勻后，经气流粉碎2次，即成2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂。实施例4将下列组分按一定重量百分比配制多抗霉素原药8g ；枯草芽孢杆菌2g ；湿润剂K12 (十二烷基硫酸钠)4g ；分散剂NNO (亚甲基二萘磺酸钠) 8g ；轻质碳酸钙补足至100g。其中，32%多抗霉素原药由武汉天惠生物工程有限公司提供；200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂由武汉科诺生物科技股份有限公司提供。将多抗霉素原药、枯草芽孢杆菌按上述比例置于混合器，加入一定比例的湿润剂K12和分散剂ΝΝ0，用轻质碳酸钙填充至100%，所有物料做混合器中混合均勻后，经气流粉碎2次，即成2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂。实施例5在田间刮取灰霉病菌，用无菌水配成分生孢子悬浮液，悬浮液浓度在10 X 10倍显微镜下每个视野要有10 20个分生孢子。取实施例1的2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂作为试验药剂(组A)，对比药剂分别为武汉天惠生物工程有限公司提供的3%多抗霉素可湿性粉剂(组B)，以及武汉科诺生物科技股份有限公司提供的200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂(组C)。在新鲜草莓植株叶片上均勻喷雾不同处理浓度的3组药液，24h后在每张叶片上点滴3点，每点5ul孢子液。4d后记载发病级数，计算病指和防效。病指调查分级标准如下0级无病斑；1级病斑面积占整个叶面积的5%以下；3级病斑面积占整个叶面积的6% 10% ；5级病斑面积占整个叶面积的11 % 25% ；7级病斑面积占整个叶面积的沈％ 50% ；9级病斑面积占整个叶面积的50%以上。根据公式计算防效，利用百分比与机率值对照表将防效转换成机率值，同时将剂量浓度换算成对数值，以剂量对数值(X)和机率值(y)得到独立公式Y = a+bx，计算出相关系数r及抑制中浓度EC5Q。根据Wadley的方法计算混配剂的增效作用，SR为增效系数，如SR < 0. 5，则两种药剂混配有拮抗作用；0.5 SSR <1.5，则两种药剂混配有相加作用；SR >1.5，则两种药剂混配有增效作用。从表1中可以看出，多抗霉素对草莓灰霉病菌的活性比枯草芽孢杆菌要高；其复配后增效系数大于1. 5，具有较好的增效作用。另外，这两种药剂作用机制不同，不存在交互
5抗药性问题，故这两类药剂混配可用于缓解多抗霉素的抗性问题，延长药剂的使用寿命。表1多抗霉素和枯草芽孢杆菌及其复配杀菌组合防治草莓灰霉病的效果
药剂组别独立回归方程相关系数r 抑制中浓度中浓EC5Jug/ml)SR
Ay=16.436+17.8X0.965
By=18.67+32.2X0.972
Cy=31.26+11.33X0.964
105.61 108.6 211.36
1.87实施例6取实施例1的2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂作为试验药剂(组 A)，对比药剂分别为武汉天惠生物工程有限公司提供的3%多抗霉素可湿性粉剂(组B)，以及武汉科诺生物科技股份有限公司提供的200亿孢子/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂(组 C)。试验方法分别采用离体抑菌活性筛选、活体盆栽药剂筛选。离体抑菌活性筛选将试验药剂和药剂稀释1200倍，在培养5d的黄瓜枯萎病菌落边缘，用直径5mm的无菌打孔器打取菌饼，置于含有稀释药剂的PDA平板上，每皿1块，每处理3次重复，以加入无菌水的培养基为空对照。放入25°C恒温箱中，培养4d，用尺子交叉法
测量菌落直径。计算病菌生长抑制率。
抑菌率=―菌落直径—处理菌落直径χ100ο/ο 对照菌落直径从表2中可以看出，多抗霉素和枯草芽孢杆菌及其复配杀菌组合对黄瓜枯萎病的离体抑菌都有较好效果，特别是2. 5%多抗霉素·100亿枯草芽孢杆菌对西瓜枯萎病的活性比其各单剂要高出10 20% ；另外，这两种药剂作用机制不同，不存在交互抗药性问题，故这两类药剂混配可用于缓解各单剂的抗性问题，延长药剂的使用寿命。表2多抗霉素和枯草芽孢杆菌及其复配杀菌组合对黄瓜枯萎病的离体抑菌效果
药剂组别稀释倍数/倍菌落直径/cm抑菌率/%A12000.3293.87B12001.3673.95C12000.8583.72空白对照-5.22- 活体盆栽药剂筛选(拌土法)于2008年9月 2009年10月在句容市华阳镇农户试验大棚内进行。在PDA培养基中活化黄瓜枯萎病菌，25°C下培养3d，再转入PD液体培养基培养4 5d，菌液过滤，除去菌丝，将滤液经5000r ^irT1离心lOmin，取沉淀加适当蒸馏水稀释成孢子浓度为1.0 χ ο5个^r1的悬浮液，备用。采用药剂拌土的方法，将供试药剂与营养土按照质量浓度配置成不同浓度的药土，以不拌药剂为空白对照土。每种药剂每一浓度为一个处理，每个处理设3个重复，每个重复装10个营养钵。挑选饱满的黄瓜种子， 经0. 升汞水浸种5min，用蒸馏水冲洗3次播种于灭菌、铺有双层纱布的保险专用培养盒中，在25°C黑暗恒温箱内培养，催芽。待黄瓜种子胚根长至0. 5cm时，加入1.0X IO5个^r1 的菌悬液中浸泡30min，取出播于药土中。待空白对照充分发病后进行病情分级调查，并计算病情指数和防治效果。
黄瓜枯萎病严重度分级标准 0级，无病症； 1级，茎叶轻微症状；
2级，植株轻度萎蔫，茎出现坏死斑，叶片黄化； 3级，植株中度萎蔫，叶片下垂黄化； 4级，植株严重萎蔫，倒伏枯死。
病情指数=
Σ (各级病叶数χ相对级数的代表值)
总叶数χ 4
xlOO；
防治效果=对照平均病情指数一处理平均病情指数χ100
对照平均病情指数从表3中可以看出，多抗霉素和枯草芽孢杆菌及其复配杀菌组合拌土法对黄瓜枯萎病菌的防治效体抑菌都有一定效果，尤其以2. 5%多抗霉素·100亿枯草芽孢杆菌对西瓜枯萎病的防效比其各单剂要高出15 25% ；另外，这两种药剂作用机制不同，不存在交互抗药性问题，故这两类药剂混配可用于缓解各单剂的抗性问题，延长药剂的使用寿命。表3拌土法下多抗霉素和枯草芽孢杆菌及其复配杀菌组合对黄瓜枯萎病防治的效果
药剂组别药剂拌土倍数/倍病情指数防效/%A40020.3775.05B40041.0350.29C40032.3260.84空白对照_ -82.54-实施例7于2010年8月15号(水稻孕穗期)在镇江农业科学研究所水稻试验田内进行田间药效试验。试验水稻品种为镇稻10号。取实施例1的2. 5%多抗霉素· 100亿枯草芽孢杆菌可湿性粉剂作为试验药剂(组Α)，对比药剂分别为武汉天惠生物工程有限公司提供的 3%多抗霉素可湿性粉剂(组B)，以及武汉科诺生物科技股份有限公司提供的200亿孢子/ 克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂(组C)。采用喷雾法防治水稻纹枯病。在水稻分蘖盛期施药，按每667m2用量兑水50Kg均勻喷雾，每小区133. 4m2 ；每个处理设2次重复，处理间以小埂分隔，并设保护行。药后15天调查各个小区的纹枯病发病指数，计算防治效果。病情分级标准如下0级无病斑；
1级基部有少量病斑；2级基部有较多病斑，井上升到第2叶(倒4叶)；3级倒3叶有病斑；4级倒2叶有病斑；5级剑叶有病斑或全株枯死。表4多抗霉素和枯草芽孢杆菌及其复配杀菌组合防治水稻纹枯病的田间效果
权利要求
1.一种杀菌组合物，其特征在于，所述组合物的活性成分包括枯草芽孢杆菌和多抗霉素，所述活性成分占总重量的10、5%，所述枯草芽孢杆菌占活性成分重量的1(Γ70%。
2.一种杀菌组合物在防治草莓灰霉病的应用。
3.一种杀菌组合物在防治黄瓜枯萎病的应用。
4.一种杀菌组合物在防治水稻纹枯病的应用。
全文摘要
本发明公开了一种杀菌组合物，属于农用杀菌药剂领域，该组合物的活性成分包括枯草芽孢杆菌和多抗霉素，所述活性成分占总重量的10~85%，所述枯草芽孢杆菌占活性成分重量的10~70%。本发明还公开了该杀菌组合物在防治草莓灰霉病、黄瓜枯萎病、水稻纹枯病的应用。本发明提供的杀菌组合物，在草莓灰霉病、黄瓜枯萎病、水稻纹枯病上的防治效果和活性都要优于单一采用多抗霉素或枯草芽孢杆菌作为活性成分配制成的杀菌药剂。由于活性成分中的两种药剂的作用机制不同，缓解了多抗霉素的抗性问题，延长药剂的使用寿命。
文档编号A01N63/02GK102356771SQ20111023431
公开日2012年2月22日 申请日期2011年8月16日 优先权日2011年8月16日
发明者吉沐祥, 吴祥, 庄义庆, 杨晨, 王健, 王莉莉, 缪康, 赵来成 申请人:江苏省绿盾植保农药实验有限公司