专利名称：金银花组培繁殖方法
技术领域：
本发明涉及一种植物的繁殖方法，特别是金银花的组培繁殖方法。
背景技术：
金银花属于忍冬科植物，全草均可入药，花蕾含有挥发性芳香油、肌醇、皂苷、绿原酸、 黄酮类化合物、肉桂酸、橙花醇、茉莉醛等，茎中含有生物碱，叶中含有忍冬甙和木犀素等， 是传统中药材之一，也是药食两用的原料，具有清热解毒，凉散风热，保肝利胆的功效，在中医领域一直用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病的治疗；现在更多的用于保健养生茶饮，金银花茶香气宜人，可以制作饮料，对防治盛夏中暑、上呼吸道感染、风热感冒和肠胃疾病有良好的效果，对清除人体自由基、延缓衰老、提高人体免疫机能等具有良好的作用，因而也是高血压和心血管系统患者降低胆固醇的保健佳品；金银花集观赏药用于一身，经济价值高，市场需求量很大，因而需要大量繁殖金银花。目前，金银花主要以扦插、播种、嫁接、压条等传统方法进行繁殖，不仅受季节限制，而且成活率很低，不能满足大规模生产的需要；嫁接繁殖虽然植株适应性强，根系发达的优点，但须大量采集野生资源， 而且工序繁杂，成活率也很低。发明专利申请号200610050985. 4公开了 “灰毡毛忍冬金银花高效繁殖技术”，采用先进的扦插方法，但其方法繁杂，其成活率也只有70%。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种方便大面积推广且不受季节限制，可快速大量繁殖的金银花组培繁殖方法。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是以带腋芽的金银花枝条为材料，进行金银花腋条组织培养繁殖，其步骤如下
1.引种和灭菌从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段，截成 10-13cm的小段，剪去叶，留叶柄基部，用洗衣粉溶解于水清洗3-5分钟，再放到浓度为0. 1% 的升汞液中处理15-17分钟，为防止污染，可适当加入少量链霉素，然后用无菌水清洗4-5 次，彻底除去升汞。2.诱导和分化培养接着取出外植体，用无菌滤纸吸干多余水分，接种在分化培养基上，培养温度25-28°C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时； 材料接种15天后，基部产生少量黄白色的愈伤组织，20天左右逐渐形成丛生芽，25天左右腋芽长出2-3cm。3.增殖培养待腋芽长出2-3cm时，再进行分段处理，剪切成2. 0-2. 5cm长的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，培养温度2548°C，湿度50%，光照强度 1500-3000Lx,光照时间为每天10-12小时；经过25天左右，芽苗可长到2. 0-3. Ocm高，在丛生芽增殖倍率达6-7倍时，调低培养温度至21°C，每天增加光照时间至12-14小时，以培养壮苗，为生根打下基础。4.生根培养选取生长健壮，高达2. 5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，在温度23-25°C、湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时的环境下培养2周左右，小苗将长出白色短根，生根率达80%，20天时，生根率达98%。
其中，MB母液的配制成分和重量比为大量元素硝酸钾1.5g、二水氯化钙 0. 3g、硝酸镁0. 22g、磷酸二氢钾0. 17g、硝酸铵0. 15g、硫酸铵0. 2g、磷酸二氢钠0. 04g ；铁盐=EDTAO. 0373g、硫酸亚铁0. 0278g ；微量元素碘化钾0. 00083g、七水硫酸锌0. 0086g/ L、硼酸0. 0062g、一水硫酸猛0. 0223g、二水钼酸钠0. 00025g、无水硫酸铜0. 00002 、氯化钴0. 000025g ；有机物甘氨酸0. 002g、烟酸0. 0005g、盐酸吡哆辛0. 0005g、盐酸硫胺 0. 0004g、肌醇 0. 05g ；激素(单独配制):6-BAlg/L、IBAlg/L、NAAlg/L。分化培养基为MB+BA1.0-2. 0mg/L+NAA0. 3-0. 5mg/L+30g/L 蔗糖+6g/L 琼脂，pH 值为 5. 8。丛生芽增殖培养基为MB50ml+微量元素3. 3ml+铁盐5ml+有机物 5ml+6-BA0. 4ml+IBA0. Iml+ 白糖 30g+ 卡拉胶 6g, pH 值为 5. 8。生根培养基为MB25ml+有机物、铁盐、微量元素各5ml+IBA;3ml+糖20g+卡拉胶 6g+AC0. 5g，pH 值为 5.8。各培养基需灭菌，将配制好的培养基装进灭菌器里，调节温度达到121°C时，记时灭菌21分钟，灭菌完后，把灭菌好的培养基迅速转移到无菌室储存起来。步骤2中，分化培养时每管接种1芽，以免交叉感染；增殖培养可用繁殖瓶，每瓶可接种多一些，以5芽为宜。步骤2中，分化培养时每管接种1芽，以免交叉感染；增殖培养可用繁殖瓶，每瓶可接种多一些，以5芽为宜。本发明的有益效果是本方法生产成本低，操作简单，繁殖周期短，成活率高，生产量大，可根据市场情况大批量生产优质金银花苗。
具体实施例方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。1.配制培养基。MB母液培养基由大量元素、铁盐、微量元素、有机物和激素组成，其具体配制成分和重量比为
-大量元素硝酸钾1. 5g、二水氯化钙0. 3g、硝酸镁0. 22g、磷酸二氢钾0. 17g、硝酸铵 0. 15g、硫酸铵0. 2g、磷酸二氢钠0. 04g ；
⑵铁盐EDTA0. 0373g、硫酸亚铁0. 0278g ；
⑶微量元素碘化钾0. 00083g、七水硫酸锌0. 0086g/L、硼酸0. 0062g、一水硫酸锰 0. 0223g、二水钼酸钠 0. 00025g、无水硫酸铜 0. 000025g、氯化钴 0. 000025g ；
⑷有机物甘氨酸0. 002g、烟酸0. 0005g、盐酸吡哆辛0. 0005g、盐酸硫胺0. 0004g、肌醇 0. 05g ；
？激素(单独配制):6-BAlg/L、IBAlg/L、NAAlg/L。分化培养基为MB+BA1.0-2. 0mg/L+NAA0. 3-0. 5mg/L+30g/L 蔗糖+6g/L 琼脂，pH 值为 5. 8。丛生芽增殖培养基为MB50ml+微量元素3. 3ml+铁盐5ml+有机物 5ml+6-BA0. 4ml+IBA0. Iml+ 白糖 30g+ 卡拉胶 6g, pH 值为 5. 8。生根培养基为MB25ml+有机物、铁盐、微量元素各5ml+IBA;3ml+糖20g+卡拉胶 6g+AC0. 5g，pH 值为 5.8。
然后将各培养基灭菌，将配制好的培养基装进灭菌器里，调节温度达到121°C，记时灭菌21分钟，灭菌完后，把灭菌好的培养基迅速转移到无菌室储存起来。2.取材从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段，截成10-13cm 的小段100段，剪去叶，留叶柄基部。3.用洗衣粉溶解于水清洗5分钟，再放到浓度为0. 1%的升汞液中处理16分钟，然后用无菌水清洗5次；接着取出外植体，用无菌滤纸吸干多余水分。4.诱导和分化培养每管接种1芽，接种在分化培养基上，调节培养温度25_28°C， 湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时；材料接种15天后，基部产生少量黄白色的愈伤组织，20天后逐渐形成丛生芽，25天后腋芽长出2-3cm。5.增殖培养待腋芽长出2-3cm时，进行分段处理，剪切成2. 0-2. 5cm长的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，调节培养温度25-28°C，湿度50%，光照强度 1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时；25天后，芽苗平均长到2. 5cm高，在丛生芽增殖倍率达6-7倍时，调低培养温度至21°C，每天增加光照时间至12-14小时。6.生根培养将2. 5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，每瓶5芽， 在温度23-25°C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时的环境下培养15天后，小苗将长出白色短根，生根率达80%，20天时，生根率达98%，每株生根数2-3条。经过70天的组织培养，获得了生长健康的金银花小苗。
权利要求
1.金银花组培繁殖方法，其特征在于以带腋芽的金银花枝条为材料，进行金银花腋条组织培养繁殖，其步骤如下引种和诱导从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段，截成 10-13cm的小段，剪去叶，留叶柄基部，用洗衣粉溶解于水清洗3-5分钟，再放到浓度为0. 1% 的升汞液中处理15-17分钟，然后用无菌水清洗4-5次，彻底除去升汞；接着取出外植体，用无菌滤纸吸干多余水分；⑵分化培养接种在分化培养基上，培养温度25- °C，湿度50%，光照强度 1500-3000Lx，光照时间为每天10-12小时；⑶增殖培养腋芽长出2-3cm时，进行分段处理，剪切成2. 0-2. 5cm长的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，培养温度25-28°C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时；⑷生根培养选取生长健壮高达2. 5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上， 在温度23-25°C、湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时的环境下培养20天。
2.根据权利要求1所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于分化培养基为MB +BAl. 0-2. 0mg/L+NAA0. 3-0. 5mg/L+30g/L 蔗糖 +6g/L 琼脂，pH 值为 5. 8。
3.根据权利要求1所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于丛生芽增殖培养基为 MB50ml+ 微量元素 3. 3ml+ 铁盐 5ml+ 有机物 5ml+6_BA0. 4ml+IBA0. Iml+ 白糖 30g+ 卡拉胶 6g，pH 值为 5.8。
4.根据权利要求1所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于生根培养基为MB25ml+有机物、铁盐、微量元素各5ml+IBA;3ml+糖20g+卡拉胶6g+AC0. 5g，pH值为5. 8。
5.根据权利要求2-4所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于MB母液培养基由大量元素、铁盐、微量元素、有机物和激素组成，其具体配制成分和重量比为大量元素硝酸钾1. 5g、二水氯化钙0. 3g、硝酸镁0. 22g、磷酸二氢钾0. 17g、硝酸铵 0. 15g、硫酸铵0. 2g、磷酸二氢钠0. 04g ；⑵铁盐EDTA0. 0373g、硫酸亚铁0. 0278g ；⑶微量元素碘化钾0. 00083g、七水硫酸锌0. 0086g/L、硼酸0. 0062g、一水硫酸锰 0. 0223g、二水钼酸钠 0. 00025g、无水硫酸铜 0. 000025g、氯化钴 0. 000025g ；⑷有机物甘氨酸0. 002g、烟酸0. 0005g、盐酸吡哆辛0. 0005g、盐酸硫胺0. 0004g、肌醇 0. 05g ；^ 激素(单独配制)6-BAlg/L、IBAlg/L、NAAlg/L。
6.根据权利要求2-5所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于各培养基需要灭菌，将配制好的培养基装进灭菌器里，调节温度达到121°C时，记时灭菌21分钟，灭菌完后，迅速储存到无菌室。
7.根据权利要求1所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于步骤2中，分化培养时每管接种1芽。
8.根据权利要求1所述的金银花组培繁殖方法，其特征在于步骤3中，增殖培养时每瓶接种3-5芽。
全文摘要
金银花组培繁殖方法，以带腋芽的金银花枝条为材料，进行金银花腋条组织培养繁殖，通过引种和灭菌、诱导和分化培养、增殖培养、生根培养可得到大量优质金银花苗；其有益效果是生产成本低，操作简单，繁殖周期短，成活率高，生产量大，可根据市场情况大批量生产优质金银花苗。
文档编号A01H4/00GK102405839SQ20111029250
公开日2012年4月11日 申请日期2011年10月4日 优先权日2011年10月4日
发明者何全慧, 李大根, 杨再江, 祝利, 赵勇彪 申请人:重庆市秀山红星中药材开发有限公司