专利名称：一种橡皮树组培快繁方法
技术领域：
本发明涉及一种植物的繁殖方法，尤其是一种橡皮树组培快繁方法。
背景技术：
橡皮树原产印度和马来西亚，因其革质叶片宽厚，观赏价值极高，栽培管理容易而深受人们的喜爱，是著名的室内观叶及园林绿化树种。橡皮树常采用扦插或高压，成活率较高，但繁殖速度慢，所需母本材料较多，造成资源的极大浪费。2005年《甘肃农业科技》第I期陈韬等撰写的《橡皮树的组织培养和快速繁殖》以橡皮树茎段为试验外植体材料，其诱导丛生芽及丛生芽增殖系数相对较低，生根培养方法较复杂。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种橡皮树组培快繁方法，可以克服现有技术中外植体诱导丛生芽增殖系数较低及生根培养方法复杂的缺点，简化了生根炼苗程序，达到繁殖速度快、节约生产成本并适用于工厂化规模育苗的目的。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是一种橡皮树组培快繁方法，该方法包括以下步骤
1)选取外植体取橡皮树茎尖为外植体，消毒后备用；
2)茎尖诱导培养将 橡皮树茎尖最外层去除苞叶后消毒，剥去茎尖苞叶及至第4片叶片，将下切口至节处留O. 5cm并切成45度角后，接种在茎尖诱导培养基上，将接种的外植体置于温度22土1°C、光照14h/d、光照强度1500-20001x的培养室内，培养10天后橡皮树茎尖下切口处周围形成团状黄色愈伤组织，连续培养20天后愈伤组织逐渐膨大，培养至愈伤组织长至F2-3cm ；
3)丛生芽诱导培养将长至F2-3cm的愈伤组织切除基部疏松的愈伤组织后，转接到丛生芽诱导培养基上，置于温度25土 1°C、光照12h/d、光照强度2000-30001x的培养室内，30天后愈伤组织上分化丛生芽(通过30天培养诱导单芽平均诱导丛生芽增殖系数达到20. 2)，橡皮树组培苗开始形成；
4)丛生芽增殖继代将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25土1°C、光照12h/d、光照强度2000-30001x的培养室内，每30-40天继代转管一次，继代5次生成生长健壮的试管苗(在继代第5次时其丛生芽增殖系数平均达到28. 5)；
5)壮苗生根将生长健壮的试管苗采用MS培养基进行生根培养，30天后长成带根的橡皮树幼苗；
6)炼苗移栽将带根的橡皮树幼苗进行炼苗移栽，即培养成橡皮树组培苗。步骤2)的茎尖诱导培养基为MS基本培养基+6-BA1. O mg/L +ΝΑΑ0.1 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L。步骤3)所用的丛生芽诱导培养基和步骤4)所用的丛生芽增殖继代培养基为MS基本培养基 +ZT2. O mg/L +NAAO.1 mg/L + 蔗糖 30g/L+ 琼脂粉 6g/L。本发明提供的一种橡皮树组培快繁方法，有益效果如下1、橡皮树以茎尖为外植体，将下切口切成45度角，便于外植体与培养基充分接触，增大吸收面积，充分供应丛生芽分化所需营养成份。2、橡皮树在丛生芽诱导中外源分裂素采用ZT比6-BA增殖速度快，随着继代的次数增加，在继代第5次时增殖系数达到28. 5，且试管苗生长健壮，缩短培养时间，节约生产成本。3、随着继代次数逐渐增加，橡皮树丛生芽内源激素不断积累，导致生根率大大增力口，所以橡皮树生根培养不需添加生长激素，仅采用基本培养基MS即可，经过30天的生根培养单株平均粗度增加1. 83mm,平均高度增加1. 59cm,平均节间长度增加3. 33mm,生根率达到100%且主根平均达到5. 6条侧根明显。炼苗移栽采用园土 +蛭石，园土和蛭石的质量比为2 :1，移栽成活率高达99. 5%。3、可以克服现有技术中外植体诱导丛生芽增殖系数较低及生根培养方法复杂的缺点，简化了生根炼苗程序，达到繁殖速度快、节约生产成本并适用于工厂化规模育苗的目的。
具体实施例方式一种橡皮树组培快繁方法，该方法包括以下步骤
1)选取外植体选取当年生生长健壮无病虫害的橡皮树枝条茎尖为外植体，用自来水冲洗切口处白色胶状物质，然后用O. 1%PVP浸泡lOmin，最后晾干材料表面水分备用；
2)茎尖诱导培养将橡皮树茎尖最外层去除苞叶后，置于质量浓度为5%的洗衣液中搅拌清洗lOmin，置于流水冲洗lh，在超净工作台上将去除苞叶的橡皮树茎尖先用质量浓度为75%酒精浸泡30s，再用质量浓度为O. 1%升汞消毒12min，最后用无菌水冲洗3次，再将茎尖置于无菌滤纸上吸干表面多余水分，剥去茎尖苞叶及至第4片叶片，将下切口至节处留O. 5cm并切成45度角后，接种在茎尖诱导培养基上，将接种的外植体置于温度22±1°C、光照14h/d、光照强度1500-20001x的培养室内，培养10天后橡皮树茎尖下切口处周围形成团状黄色愈伤组织，连续培养20天后愈伤组织逐渐膨大，培养至愈伤组织长至F2-3cm ；
3)丛生芽诱导培养将长至F2-3cm的愈伤组织切除基部疏松的愈伤组织后，转接到丛生芽诱导培养基上，置于温度25土1°C、光照12h/d、光照强度2000-30001x的培养室内，30天后愈伤组织上分化丛生芽(通过30天培养诱导单芽平均诱导丛生芽增殖系数达到20. 2)，橡皮树组培苗开始形成；
4)丛生芽增殖继代将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25土1°C、光照12h/d、光照强度2000-30001x的培养室内，每30-40天继代转管一次，继代5次生成生长健壮的试管苗(在继代第5次时其丛生芽增殖系数平均达到28. 5)；
5)壮苗生根将生长健壮的试管苗采用MS培养基进行生根培养，30天后长成带根的橡皮树幼苗；
6)炼苗移栽将带根的橡皮树幼苗进行炼苗移栽，即培养成橡皮树组培苗。
步骤2)的茎尖诱导培养基为MS基本培养基+6-BA1. O mg/L +NAAO.1 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L。
步骤3)所用的丛生芽诱导培养基和步骤4)所用的丛生芽增殖继代培养基为MS基本培养基+ZT2.0 mg/L +NAAO.1 mg/L + 蔗糖 30g/L+琼脂粉 6g/L。
权利要求
1.一种橡皮树组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤 1)选取外植体取橡皮树茎尖为外植体，消毒后备用； 2)茎尖诱导培养将橡皮树茎尖最外层去除苞叶后消毒，剥去茎尖苞叶及至第4片叶片，将下切口至节处留O. 5cm并切成45度角后，接种在茎尖诱导培养基上，将接种的外植体置于温度22土 1°C、光照14h/d、光照强度1500-20001x的培养室内，培养10天后橡皮树茎尖下切口处周围形成团状黄色愈伤组织，连续培养20天后愈伤组织逐渐膨大，培养至愈伤组织长至F2-3cm时； 3)丛生芽诱导培养将长至F2-3cm的愈伤组织切除基部疏松的愈伤组织后，转接到丛生芽诱导培养基上，置于温度25 ± I °C、光照12h/d、光照强度2000-30001x的培养室内，30天后愈伤组织上分化丛生芽，橡皮树组培苗开始形成； 4)丛生芽增殖继代将丛生芽接入丛生芽增殖继代培养基上，置于温度25土1°C、光照12h/d、光照强度2000-30001x的培养室内，每30-40天继代转管一次，继代5次生成生长健壮的试管苗； 5)壮苗生根将生长健壮的试管苗采用MS培养基进行生根培养，30天后长成带根的橡皮树幼苗； 6)炼苗移栽将带根的橡皮树幼苗进行炼苗移栽，即培养成橡皮树组培苗。
2.根据权利要求1所述的一种橡皮树组培快繁方法，其特征在于步骤2)的茎尖诱导培养基为MS基本培养基+6-BA1. O mg/L +ΝΑΑ0.1 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂粉6g/L。
3.根据权利要求1或2所述的一种橡皮树组培快繁方法，其特征在于步骤3)所用的丛生芽诱导培养基和步骤4)所用的丛生芽增殖继代培养基为MS基本培养基+ZT2. O mg/L +NAAO.1 mg/L + 鹿糖 30g/L+ 琼脂粉 6g/L。
全文摘要
一种橡皮树组培快繁方法，该方法包括以下步骤1)选取外植体2)茎尖诱导培养；3)丛生芽诱导培养，橡皮树组培苗开始形成；4)丛生芽增殖继代继代5次生成生长健壮的试管苗；5)壮苗生根将生长健壮的试管苗采用MS培养基进行生根培养，30天后长成带根的橡皮树幼苗；6)炼苗移栽将带根的橡皮树幼苗进行炼苗移栽，即培养成橡皮树组培苗。本发明提供的一种橡皮树组培快繁方法，可以克服现有技术中外植体诱导丛生芽增殖系数较低及生根培养方法复杂的缺点，简化了生根炼苗程序，达到繁殖速度快、节约生产成本并适用于工厂化规模育苗的目的。
文档编号A01H4/00GK103053416SQ20121057276
公开日2013年4月24日 申请日期2012年12月26日 优先权日2012年12月26日
发明者马晓波, 张国禹, 黄桂云, 胡梅香, 邱利文, 吴笛, 张海波, 杨兰芳, 汪磊 申请人:中国长江三峡集团公司, 长江三峡生态园林有限公司