一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术，其特征在于：其步骤如下：1、外植体的准备，2、外植体的灭菌与接种，3、试管苗的增殖培养，4、壮苗与生根培养，5、炼苗与移栽，本发明的技术方案具有以下有益效果：以尼泊尔菊三七的茎段为外植体，建立了包括丛生芽诱导、生根、壮苗以及移栽的离体快繁体系，为将来大规模生产奠定了基础。
【专利说明】一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术【技术领域】[0001]本发明涉及一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术，包括丛生芽诱导、生根、壮苗以及移栽。【背景技术】[0002]尼泊尔菊三七为多年生草本植物，高30-45厘米。在我国主要产于云南(镇康、腾冲)、贵州(罗甸、赤水、望谟、荔波)等地。生于溪边岩石上或田边。海拔1100-2100米。印度、尼泊尔、锡金、不丹、緬甸、泰国也有分布。[0003]尼泊尔菊三七含黄酮、生物碱、香豆素类等多种成分。有镇痛、止血，抗凝血、降糖、 抗肿瘤作用。据《中药大辞典》载:“功能主治:清热凉血，散瘀消肿。治支气管炎，肺结核， 崩漏，臃肿，烫伤，跌打损伤，刀伤出血。”[0004]近年来科学研究发现尼泊尔菊三七具有良好的降血糖功效，由此尼泊尔菊三七的作用越来越受到人们的重视，被人们称之为“降糖草”。[0005]由于尼泊尔菊三七其对气候要求高，受繁殖方法和繁殖速度的影响，目前尚未人工引种栽培，而野生资源已远不能满足市场需求。所以建立一套现代化的快繁体系可以有效地实现尼泊尔菊三七的大规模生产，本发明通过茎段诱导丛生芽建立的离体快繁体系能在短时间内提供优质种苗，实现人工大规模栽培，对开发该药用植物具有重要意义。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是为了提供一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术，以填补人工引种栽培技术的空白。[0007]本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:[0008]一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术，其步骤如下:[0009]1、外植体的准备[0010]将3~6个月尼泊尔菊三七的幼嫩茎段用洗洁精清洗干净后，再用蒸馏水浸泡数小时，浙干水滴，备用。[0011]2、外植体的灭菌与接种[0012]将清洗好的尼泊尔菊 三七茎段，放入烧杯中，用75%的乙醇溶液处理20s，用0.1% 的升汞溶液浸泡6min，浸泡期间不断摇动，使灭菌剂升汞和外植体充分接触，进行表面消毒，再用无菌蒸馏水清洗5~6次，将经过消毒后的茎段切成0.5~1.0cm且含有一个茎节的茎段，进行接种诱导试验。[0013]3、试管苗的增殖培养[0014]采用MS培养基，其中含有3%蔗糖、0.5%琼脂，pH为6.0。培养温度为(25± I) °C， 光照时间为每天12h,光照强度为1400 μ mol/(m2.s)。[0015]设定好乙醇和升汞灭菌时间的同时，在MS培养基上分别添加NAA0.5mg/L和6 — BAl.0mg/L，培养 45d。[0016]4、壮苗与生根培养[0017]将2.5~3.0cm高的试管小苗接种于1/2MS培养基并附加6 — BAl.0mg/L、 NAA0.5mg/L、30g/L蔗糖、2g/L活性炭进行生根培养，培养45d。[0018]5、炼苗与移栽[0019]尼泊尔菊三七在壮苗与生根培养基上生长45d后，苗高度达到IOcm左右时，选取其中植株健壮、根系发达的组培苗，将敞开的组培瓶置室温炼苗5~7d后，除去根部的残留培养基并植于含细砂的腐殖土中，保湿10~15d，直接移栽到腐殖土:木炭土 =3:2的基质中进行培养，待苗生长健壮后，移植于大地栽培。[0020]本发明的技术方案包含以下关键点:[0021]I)离体扩繁的外植体为尼泊尔菊三七的茎段；[0022]2)用75%乙醇和0.1%升汞对外植体消毒的时间分别为20s，6min ；[0023]3)尼泊尔菊三七离体快繁的最佳增殖培养条件为MS+萘乙酸0.5mg/L+6 一苄氨基嘌呤 1.0mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 琼脂 5.0g/L, pH=6.0 ；[0024]4)壮苗生根的最佳培养条件是1/2MS+萘乙酸0.5mg/L+6 一苄氨基嘌呤1.0mg/L+ 鹿糖 30g/L+ 活性炭 2.0g/L+ 琼脂 5.0g/L, pH=6.0 ；[0025]5)移栽期间的最佳基质是腐殖土:木炭土 =3:2。[0026]本发明的技术方案具有以下有益效果:[0027]1、以尼泊尔菊三七的茎段为外植体，建立了包括丛生芽诱导、生根、壮苗以及移栽的离体快繁体系，为将来大规模生产奠定了基础。[0028]2、离体快繁技术可以有效的防止植株变异，保存母本植株的优良特性，成活率高， 不受季节气候限制，增殖过程中无农药无化肥，并且可以通过改善培养基配方提高植株中有效成分的含量，与传统无性繁殖技术相比拥有显著地优势。【具体实施方式】[0029]下面结合具体实施例进一步阐述本发明的技术特点。[0030]实施例1[0031]将3个月尼泊尔菊三七的幼嫩茎段用洗洁精清洗干净后，再用蒸馏水浸泡数小时，浙干水滴，备用。将清洗好的尼泊尔菊三七茎段，放入烧杯中，用75%的乙醇 溶液处理 20s，用0.1%的升汞溶液浸泡6min，浸泡期间不断摇动，使灭菌剂升汞和外植体充分接触， 进行表面消毒，再用无菌蒸馏水清洗5~6次，将经过消毒后的茎段切成0.5~1.0cm且含有一个茎节的茎段，进行接种诱导试验。[0032]采用MS培养基，其中含有3%蔗糖、0.5%琼脂，pH为6.0。培养温度为(25± I) °C， 光照时间为每天12h,光照强度为1400 μ mol/(m2.s)。[0033]设定好乙醇和升汞灭菌时间的同时，在MS培养基上分别添加NAA0.5mg/L和6 — BAl.0mg/L，培养 45d。[0034]将2.5~3.0cm高的试管小苗接种于1/2MS培养基并附加6 — BAl.0mg/L、 NAA0.5mg/L、30g/L蔗糖、2g/L活性炭进行生根培养，培养45d。[0035]尼泊尔菊三七在壮苗与生根培养基上生长45d后，苗高度达到IOcm左右时，选取其中植株健壮、根系发达的组培苗，将敞开的组培瓶置室温炼苗7d后，除去根部的残留培养基并植于含细砂的腐殖土中，保湿15d，直接移栽到腐殖土:木炭土 =3:2的基质中进行培养，待苗生长健壮后，移植于大地栽培。[0036] 实施例2[0037]将6个月尼泊尔菊三七的幼嫩茎段用洗洁精清洗干净后，再用蒸馏水浸泡数小时，浙干水滴，备用。将清洗好的尼泊尔菊三七茎段，放入烧杯中，用75%的乙醇溶液处理 20s，用0.1%的升汞溶液浸泡6min，浸泡期间不断摇动，使灭菌剂升汞和外植体充分接触， 进行表面消毒，再用无菌蒸馏水清洗5~6次，将经过消毒后的茎段切成0.5~1.0cm且含有一个茎节的茎段，进行接种诱导试验。[0038]采用MS培养基，其中含有3%蔗糖、0.5%琼脂，pH为6.0。培养温度为(25± I) °C， 光照时间为每天12h,光照强度为1400 μ mol/(m2.s)。[0039]设定好乙醇和升汞灭菌时间的同时，在MS培养基上分别添加NAA0.5mg/L和6 — BAl.0mg/L，培养 45d。[0040]将2.5~3.0cm高的试管小苗接种于1/2MS培养基并附加6 — BAl.0mg/L、 NAA0.5mg/L、30g/L蔗糖、2g/L活性炭进行生根培养，培养45d。[0041]尼泊尔菊三七在壮苗与生根培养基上生长45d后，苗高度达到IOcm左右时，选取其中植株健壮、根系发达的组培苗，将敞开的组培瓶置室温炼苗5d后，除去根部的残留培养基并植于含细砂的腐殖土中，保湿10d，直接移栽到腐殖土:木炭土 =3:2的基质中进行培养，待苗生长健壮后，移植于大地栽培。[0042]实施例3[0043]将5个月尼泊尔菊三七的幼嫩茎段用洗洁精清洗干净后，再用蒸馏水浸泡数小时，浙干水滴，备用。将清洗好的尼泊尔菊三七茎段，放入烧杯中，用75%的乙醇溶液处理 20s，用0.1%的升汞溶液浸泡6min，浸泡期间不断摇动，使灭菌剂升汞和外植体充分接触， 进行表面消毒，再用无菌蒸馏水清洗5~6次，将经过消毒后的茎段切成0.5~1.0cm且含有一个茎节的茎段，进行接种诱导试验。[0044]采用MS培养基，其中含有3%蔗糖、0.5%琼脂，pH为6.0。培养温度为(25± I) °C， 光照时间为每天12h,光照强度为1400 μ mol/(m2.s)。[0045]设定好乙醇和升汞灭菌时间的同时，在MS培养基上分别添加NAA0.5mg/L和6 — BAl.0mg/L，培养 45d。[0046]将2.5~3.0cm高的试管小苗接种于1/2MS培养基并附加6 — BAl.0mg/L、 NAA0.5mg/L、30g/L蔗糖、2g/L活性炭进行生根培养，培养45d。[0047]尼泊尔菊三七在壮苗与生根培养基上生长45d后，苗高度达到IOcm左右时，选取其中植株健壮、根系发达的组培苗，将敞开的组培瓶置室温炼苗6d后，除去根部的残留培养基并植于含细砂的腐殖土中，保湿12d，直接移栽到腐殖土:木炭土 =3:2的基质中进行培养，待苗生长健壮后，移植于大地栽培。[0048]上述实施例1-3中的尼泊尔菊三七的生根率100%，而移栽成活率可达97%。
【权利要求】
1.一种尼泊尔菊三七的离体快繁技术，其特征在于:其步骤如下:1.外植体的准备将3~6个月尼泊尔菊三七的幼嫩茎段用洗洁精清洗干净后，再用蒸馏水浸泡数小时， 浙干水滴，备用。
2.外植体的灭菌与接种将清洗好的尼泊尔菊三七茎段，放入烧杯中，用75%的乙醇溶液处理20s，用0.1%的升汞溶液浸泡6min，浸泡期间不断摇动，使灭菌剂升汞和外植体充分接触，进行表面消毒，再用无菌蒸馏水清洗5~6次，将经过消毒后的茎段切成0.5~1.0cm且含有一个茎节的茎段，进行接种诱导试验。
3.试管苗的增殖培养采用MS培养基，其中含有3%蔗糖、0.5%琼脂，pH为6.0 ;培养温度为(25 ± I) V，光照时间为每天12h,光照强度为1400 μ mol/(m2.s)；设定好乙醇和升汞灭菌时间的同时，在MS培养基上分别添加NAA0.5mg/L和6 — BAl.0mg/L，培养 45d。
4.壮苗与生根培养将2.5~3.0cm高的试管小苗接种于1/2MS培养基并附加6 — BAl.0mg/L,NAA0.5mg/ L、30g/L蔗糖、2g/L活性炭进行生根培养，培养45d。
5.炼苗与移栽尼泊尔菊三七在壮苗与生根培养基上生长45d后，苗高度达到IOcm左右时，选取其中植株健壮、根系发达的组培苗，将敞开的组培瓶置室温炼苗5~7d后，除去根部的残留培养基并植于含细砂的腐殖土中，保湿10~15d，直接移栽到腐殖土:木炭土 =3:2的基质中进行培养，待苗生长健壮后，移植于大地 栽培。
【文档编号】A01H4/00GK103598089SQ201310513457
【公开日】2014年2月26日 申请日期:2013年10月25日 优先权日:2013年10月25日
【发明者】朱恩灿, 邢斌 申请人:上海仙草堂保健食品有限公司