白芨种茎的生产方法
【专利摘要】本发明公开了一种白芨种茎的生产方法，包括如下步骤：1）外植体的处理及接种；2）原球茎的获得与增殖；3）原球茎分化成苗；4）试管球茎的获得；5）一级种茎的获得；6）二级种茎的获得。本发明利用白芨成熟种子进行无菌播种培养，获得大量的试管种茎，再通过一级、二级种茎的繁殖，从而获得可栽种于大田的较大的生产用种茎，此方法克服了组培苗直接炼苗成活率低的问题，解决了白芨人工规模化种植的种源问题，为白芨的持续发展及开发利用奠定了基础。
【专利说明】白芨种茎的生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其是一种白芨种茎的生产方法。
【背景技术】
[0002]白芨「Bletilla striata (Thunb.)Reichb.f.〕为兰科白芨属多年生草本植物，别名白根、白鸡娃、连芨草、紫兰等，是一种常用大宗药材，以干燥块茎入药，其性微寒，味苦、 甘、涩，归肺、胃、肝经，具有补肺止血、消肿生肌等功能，主治肺结核咳血、支气管扩张咯血、 胃溃疡吐血、尿血、便血等症；外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症；另白芨含较高的白芨胶，可作为混悬剂及乳化剂，在食品及化工领域中广泛应用；且在生物医药、保健食品、美容业、纺织印染、特种涂料和日用化工等方面也被广泛应用。白芨花色艳丽，可作漂亮的观赏植物。白芨主产于四川、贵州、云南、陕西、甘肃等省。
[0003]白芨生于高山和丘陵地区的山坡草丛、疏林及山谷阴湿处或沟谷岩石缝中，喜温暖、阴凉湿润的环境；叶2-6枚，互生，狭长圆状披针形至线状披针形，叶片与叶柄之间具关节，叶柄互相卷抱成茎状，花序顶生，总状，常具数朵花，通常不分枝或极罕见分枝、花具有紫红色、粉红色、黄色或白色，萼片与花瓣相似，近等长，离生；唇瓣中部以上明显3裂，侧裂片直立，花粉团8个，成2群，每室4个，粒粉质，柱头I个，位于蕊喙之下，茹果长圆状纺锤形，直立，果期7-9月。该属植物有膨大地下块茎，呈三角状扁球形或规则菱形，其近旁常具多枚前一年和以前每年所残留的假鳞茎。
[0004]长期以来，白芨市场主要依靠野生资源。由于用途的广泛、需求量的增加以及价格的高涨，导致资源被掠夺式采挖，加上生态环境的破坏，野生资源日渐枯竭，白芨已成为我国二级保护植物。
[0005]采用人工繁育是满足白芨市场的有力措施，但种源成为发展的“瓶颈”。白芨种子在自然条件下播种繁殖困难，块茎分切繁殖较容易，但需种量大，繁殖系数低，抗病害能力差，会逐年退化，难以满足大规模生产的需要。
【发明内容】
[0006]本发明的目的是:提供`一种白芨种茎的生产方法，它克服了白芨组培苗直接炼苗成活率低的问题，解决了白芨人工规模化种植的种源问题，为白芨的持续发展及开发利用奠定了基础。
[0007]本发明是这样实现的:白芨种茎的生产方法，包括如下步骤:
I)外植体的处理及接种:在9-10月采集白芨蒴果，用水冲洗干净表面灰尘，自然晾干后，在超净工作台上用质量百分比浓度为75%的酒精浸泡消毒30 S，再用0.1%升汞液浸泡消毒8 min，然后用无菌水清洗5次后，再用无菌的滤纸将白芨蒴果表面的水分吸干，将白芨蒴果内的种子取出后，均匀的撒播到种子萌发培养基的表面，在培养室中培养，培养温度为25±2°C，光照强度为1500-2000LX，光照时间为12h/d ;所述的萌发培养基的主体为 1/2MS培养基，其中NAA为0.5mg/L, 6-BA为1.0 mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为5.8 ;
2)原球茎的获得与增殖:种子培养10天后，形成黄色原球茎，在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为25±2°C的培养室培养，光照强度1500-2000LX，光照时间12h/d，培养25天后，形成丛生形原球茎；所述的增殖培养基的主体为MS培养基， 其中NAA为0.2mg/L,6-BA为0.5 mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为 0.7%, pH 为 5.8 ;
3)原球茎分化成苗:将丛生形原球茎转接于分化培养基中，置25±2°C的培养室、光照强度1500-2000LX、光照时间12h/d条件培养，至培养获得2_3片叶的植株；所述的分化培养基的主体为MS培养基，其中NAA为0.3mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为 0.7%, pH 为 5.8 ;
4)试管球茎的获得:将步骤3)获得的植株转接于生根培养基中，在温度为25±2°C的培养室培养，光照强度1500-2000LX，光照时间12h/d，培养45-60天后，获得试管球茎；所述的生根培养基的主体为MS培养基，其中NAA为0.5mg/L,6-BA为0.lmg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为5.8 ;
5)一级种茎的获得:将形成有试管球茎的培养瓶放在室温下放置3天，然后揭开封口膜炼苗2天，用镊子将瓶中的试管球茎夹出，在自来水下冲洗掉培养基，并清理干净枯叶及根，栽种于准备好的蛭石和细树皮的混合基质中，蛭石和细树皮的体积比为4:1，细树皮粒径小于1cm，浇淋透1000倍多菌灵液，然后按照常规管理，待发新芽时开始每半月喷施一次营养液；待生长期结束，叶片枯黄脱落，采收地下部的白芨球茎，即获得一级种球茎；
6)二级种茎:当气温回升时，将获得的一级种茎种植在蛭石、腐殖土和细树皮混合的基质中，蛭石、腐殖土和细树皮的体积比为3:1:1，细树皮粒径小于1cm，淋透1000倍多菌灵液，按照常规管理；待种茎发出新芽时开始每半月喷施一次营养液，待叶片枯黄脱落时，采收地下部白芨球茎，获得作为栽培生产用种茎的二级种茎。
[0008]当种植季节时，二级种茎可以直接栽种于大田，从而获得商品球茎。
[0009]由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明利用白芨成熟种子进行无菌播种培养，获得大量的试管种茎，再通过一级、二级种茎的繁殖，从而获得可栽种于大田的较大的生产用种茎，此方法克服了组培苗直接炼苗成活率低的问题，解决了白芨人工规模化种植的种源问题，为白芨的持续发展及开发利用奠定了基础。
【具体实施方式】
[0010]本发明的实施例:白芨种茎的生产方法，包括如下步骤:
I)外植体的处理及接种:在每年白芨开花季节进行人工授粉，在9-10月采集白芨蒴果，用水冲洗干净表面灰尘，自然晾干后，在超净工作台上用质量百分比浓度为75%的酒精浸泡消毒30 S，再用0.1%升汞液浸泡消毒8 min，然后用无菌水清洗5次后，再用无菌的滤纸将白芨蒴果表面的水分吸干，用无菌解剖刀纵向剖开蒴果，将白芨蒴果内的种子取出后，均匀的撒播到种子萌发培养基的表面，在培养室培养，培养温度为25 ± 2°C,光照强度为 1500-2000LX，光照时间为12h/d ;所述的萌发培养基的主体为1/2MS培养基，其中NAA为 0.5mg/L,6-BA为1.0 mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为 5.8 ；2)原球茎的获得与增殖:种子培养10天后，形成黄色原球茎，后有的原球茎分化出绿色的叶原基，在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为25±2°C的培养室中常温培养，光照强度1500-2000LX，光照时间12h/d，培养25天后，形成丛生形原球茎， 其增殖倍数可达5-8倍，部分原球茎开始产生分化变绿；所述的增殖培养基的主体为MS培养基，其中NAA为0.2mg/L,6-BA为0.5 mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为 0.7%, pH 为 5.8 ;
3)原球茎分化成苗:将丛生形原球茎转接于分化培养基中，置25±2°C的培养室、光照强度1500-2000LX、光照时间12h/d条件培养，10天左右原球茎开始变绿，后逐渐分化出叶原基及叶片，30天大部分长成2-3片叶的植株；所述的分化培养基的主体为MS培养基，其中NAA为0.3mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为5.8 ;
4)试管球茎的获得:将步骤3)获得的植株转接于生根培养基中，在温度为25±2°C的培养室培养，光照强度1500-2000LX，光照时间12h/d，培养15天开始形成根，生根率100%， 叶片长大，苗基部逐渐膨大，形成壮苗，培养45-60天苗叶片变黄枯落，获得试管球茎；所述的生根培养基的主体为MS培养基，其中NAA为0.5mg/L,6-BA为0.lmg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为5.8 ;
5)一级种茎的获得:将形成有试管球茎的培养瓶放在室温下放置3天，然后揭开封口膜炼苗2天，用镊子将瓶中的试管球茎夹出，在自来水下冲洗掉培养基，并清理干净枯叶及根，栽种于准备好的蛭石和细树皮的混合基质中，蛭石和细树皮的体积比为4:1，细树皮粒径小于1cm，浇淋透1000倍多菌灵液，然后按照常规管理，待发新芽时开始每半月喷施一次营养液，球茎发芽成活率达85%以上；待生长期结束，叶片枯黄脱落，采收地下部的白芨球茎，即获得一级种球茎(种茎)；
6)二级种茎:当气温回升时，将获得的一级种茎种植在蛭石、腐殖土和细树皮混合的基质中，蛭石、腐殖土和细树皮体积比为3:1:1，细树皮粒径小于1cm，淋透1000倍多菌灵液，按照常规管理；待种茎发出新芽时开始每半月喷施一次营养液，球茎发芽成活率达90% 以上，待叶片枯黄脱落时，采收地下部白芨球茎，获得作为栽培生产用种茎的二级种茎(种茎)。`
【权利要求】
1.一种白芨种茎的生产方法，其特征在于:包括如下步骤:1)外植体的处理及接种:在9-10月采集白芨蒴果，用水冲洗干净表面灰尘，自然晾干后，在超净工作台上用质量百分比浓度为75%的酒精浸泡消毒30 S，再用0.1%升汞液浸泡消毒8 min，然后用无菌水清洗5次后，再用无菌的滤纸将白芨蒴果表面的水分吸干，将白芨蒴果内的种子取出后，均匀的撒播到种子萌发培养基的表面，在培养室中培养，培养温度为25±2°C，光照强度为1500-2000LX，光照时间为12h/d ;所述的萌发培养基的主体为 1/2MS培养基，其中NAA为0.5mg/L, 6-BA为1.0 mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为5.8 ;2)原球茎的获得与增殖:种子培养10天后，形成黄色原球茎，在原球茎未分化出叶片时转接到增殖培养基中，放置于温度为25±2°C的培养室培养，光照强度1500-2000LX，光照时间12h/d，培养25天后，形成丛生形原球茎；所述的增殖培养基的主体为MS培养基， 其中NAA为0.2mg/L,6-BA为0.5 mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为 0.7%, pH 为 5.8 ;3)原球茎分化成苗:将丛生形原球茎转接于分化培养基中，置25±2°C的培养室、光照强度1500-2000LX、光照时间12h/d条件培养，至培养获得2_3片叶的植株；所述的分化培养基的主体为MS培养基，其中NAAS0.3mg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为 0.7%, pH 为 5.8 ; 4)试管球茎的获得:将步骤3)获得的植株转接于生根培养基中，在温度为25±2°C的培养室培养，光照强度1500-2000LX，光照时间12h/d，培养45-60天后，获得试管球茎；所述的生根培养基的主体为MS培养基，其中NAA为0.5mg/L,6-BA为0.lmg/L,白糖的质量百分比为3%，琼脂粉的质量百分比为0.7%，pH为5.8 ;5)一级种茎的获得:将形成有试管球茎的培养瓶放在室温下放置3天，然后揭开封口膜炼苗2天，用镊子将瓶中的试管球茎夹出，在自来水下冲洗掉培养基，并清理干净枯叶及根，栽种于准备好的蛭石和细树皮的混合基质中，蛭石和细树皮的体积比为4:1，细树皮粒径小于1cm，浇淋透1000倍多菌灵液，然后按照常规管理，待发新芽时开始每半月喷施一次营养液；待生长期结束，叶片枯黄脱落，采收地下部的白芨球茎，即获得一级种球茎；6)二级种茎:当气温回升时，将获得的一级种茎种植在蛭石、腐殖土和细树皮混合的基质中，蛭石、腐殖土和细树皮的体积比为3:1:1，细树皮粒径小于1cm，淋透1000倍多菌灵液，按照常规管理；待种茎发出新芽时开始每半月喷施一次营养液，待叶片枯黄脱落时，采收地下部白芨球茎，获得作为栽培生产用种茎的二级种茎。
【文档编号】A01H4/00GK103583365SQ201310579744
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月19日 优先权日:2013年11月19日
【发明者】毛堂芬, 陈娅娅, 王沁, 刘作易 申请人:贵州省生物技术研究所