一种青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法
【专利摘要】本发明公开了一种青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，属于分子育种【技术领域】。本发明采用分子辅助选择的方法鉴定鸡显性白羽位点基因型，可以快速判定出该位点的基因型，克服了传统常规育种中测交繁琐、世代间隔长等缺点。采用本发明的方法生产基因型为II的青胫显性白羽肉鸡品系，不仅避免了测交选育的繁琐，缩短了世代间隔，加快了育种进程，降低了培育成本；而且该品系肉质细嫩，肉味鲜美，生产性能高，其屠体上不存在有色羽残迹，从而使屠体更加美观。此外，该品系用作父本与高产蛋鸡品种或快大肉鸡品种杂交配套，可分别生产出高产型或快大型青胫显性白羽鸡。
【专利说明】—种青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法
【技术领域】
[0001]本发明具体涉及一种青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，属于分子育种【技术领域】。
【背景技术】
[0002]我国地方鸡品种资源丰富，其肉质细嫩、肉味鲜美，但是在外观上多表现为黄羽、麻羽等有色羽。对于冷鲜鸡市场来说，有色羽肉鸡常因屠宰后羽毛不容易脱干净而影响屠体的美观。对于国外的快大型白羽肉鸡生长速度快，屠体性状好，但是肉质远不如我国的地方鸡。因此，显性白羽优质肉鸡的培育具有重要意义。
[0003]传统育种中常常采用测交的方法，依据杂交后代鸡的表型性状留种。即通过测交、繁殖扩群来淘汰隐性白羽鸡群体里的显性白纯合子个体和显性白杂合子个体。但是测交过程较为繁琐，周期长，且会受到扩群的大小的影响。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法。
[0005]为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是:
[0006]一种青胫显性 白羽肉鸡品系的选育方法，包括以下步骤:
[0007](I)利用青胫肉鸡品种作为父本与快大型白羽肉鸡品种作为母本进行杂交，生产出Fl代，选留Fl代青胫白羽公母鸡；
[0008](2) Fl代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡；
[0009](3)利用AS-PCR测定F2代青胫白羽鸡的基因型，选留显性白羽位点为II基因型的个体，淘汰显性白羽位点为Ii和ii基因型的个体，得到显性白羽位点为II基因型的公母鸡；
[0010](4)对得到的II基因型个体进行横交和扩繁，按照家系选择和个体选择方法，提高生产速度和鸡肉品质，同时提纯和固定青胫和白羽两个外观性状，经过3个世代以上的选育后，得到显性白羽位点为II基因型的青胫显性白羽肉鸡品系。
[0011]所述步骤(1)中青胫肉鸡品种为固始鸡、狼山鸡、淮北麻鸡、淮南麻黄鸡、黄山黑鸡、五华鸡、德化黑鸡、崇仁麻鸡、寿光鸡、卢氏鸡、景阳鸡、郧阳大鸡、东安鸡、桃源鸡、瑶鸡、茶花鸡、和田黑鸡等。
[0012]所述步骤(1)中快大型白羽肉鸡品种为罗斯308、科宝、艾维茵、哈巴德、艾拔益加(AA )、海波罗、迪闻等。
[0013]所述步骤(3)中利用AS-PCR测定F2代青胫白羽鸡基因型的方法，包括以下步骤:以包含PMEL17基因的待测鸡全基因组DNA为模板，以引物对Pl为引物PCR扩增鸡PMEL17基因I等位基因，以引物对P2为引物PCR扩增鸡PMEL17基因i等位基因；对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡显性白羽位点的基因型；
[0014]所述的引物对Pl为:[0015]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)，
[0016]下游引物，Pl-R:5’-GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)；
[0017]所述的引物对P2为:
[0018]上游引物，P2-F:5’-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3’(如 SEQ ID N0.3 所示)，
[0019]下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.4 所示)。
[0020]所述的PCR 扩增反应体系为:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L,Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L, P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
[0021]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化镁和PCR反应缓冲液，为市售商品，可购自上海生工、大连宝生物、北京百泰克、北京康为等公司。
[0022]所述的PCR扩增反应程序为:94°C预变性4min ;94°C变性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s, 35个循环；72°C延伸IOmin0
[0023]所述的琼脂糖凝胶的质量浓度为1.5%。
[0024]所述的琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为40min。
[0025]所述的鉴定鸡显性白羽位点基因型的方法为:11基因型表现为322bp和224bp条带；Ii基因型表现为322bp、224bp和144bp条带；ii基因型表现为322bp和144bp条带。
[0026]优选的，将步骤(4)得到的显性白羽位点为II基因型的青胫显性白羽肉鸡品系作为父本与高产蛋鸡品种或快大肉 鸡品种杂交配套，生产出高产型或快大型青胫显性白羽肉鸡。
[0027]本发明的有益效果:
[0028]采用本发明的方法生产基因型为II的青胫显性白羽肉鸡品系，不仅避免了测交选育的繁琐，缩短了世代间隔，加快了育种进程，降低了培育成本；而且该品系肉质细嫩，肉味鲜美，生产性能高，其屠体上不存在有色羽残迹，从而使屠体更加美观。此外，该品系用作父本与蛋鸡品种或肉鸡品种杂交配套，可分别生产出高产型和快大型青胫显性白羽鸡。
[0029]本发明中用于检测鸡PMEL17基因显性白羽位点基因型的引物，是针对PMEL17基因第10外显子9bp插入(-CTGGGCACC-)设计等位基因I特异性引物Pl-R ;针对PMEL17基因第10外显子无9bp插入设计等位基因i特异性引物P2-F。这样引物Pl-R与Pl-F只能扩增I等位基因，扩增的片段大小为224bp ;引物P2-R与P2-F只能扩增i等位基因，扩增的片段大小为144bp。此外，由于上游引物Pl-F与下游引物P2-R的组合也可以扩增，扩增的片段大小为322bp，这个扩增不受9bp插入的影响，即每个个体均可以扩增。
[0030]本发明采用分子辅助选择的方法鉴定鸡显性白羽位点的基因型，可以快速判定出该位点的基因型，从而缩短育种时间，加快育种进程，克服了传统常规育种中测交繁琐、世代间隔长等缺点。
【专利附图】
【附图说明】
[0031]图1为本发明实施例1中各样本PMEL17基因显性白羽位点的PCR电泳图；
[0032]注:自左至右泳道分别代表DNA Marker I和基因型i1、i1、I1、I1、I1、i1、I1、ii和Ii的电泳带型。
【具体实施方式】[0033]下述实施例仅对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0034]实施例1
[0035]本实施例中青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，包括以下步骤:
[0036](I)利用固始鸡纯系公鸡作为父本与艾维茵母鸡作为母本进行杂交，生产出Fl代鸡，淘汰杂交出现的少量的有色羽个体，在Fl白羽群体中选留Fl代青胫白羽公母鸡；
[0037](2) Fl代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡；
[0038](3)利用AS-PCR的方法测定F2代青胫白羽鸡的基因型，具体包括以下步骤:
[0039]①样品的采集
[0040]对F2代选留的青胫白羽鸡翅静脉采血，加1/3抗凝剂，用蛋白酶K法提取血液DNA,将DNA样品保存于4°C冰箱保存备用；
[0041]②引物设计
[0042]以PMEL17 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)为模板设计引物对 Pl 和P2，如下所示；
[0043]所述的引物对Pl为:
[0044]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
[0045]下游引物，P1-R: 5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3，；
[0046]所述的引物对P2为:
[0047]上游引物，P2-F: 5 ’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，，
[0048]下游引物，P2-R: 5，-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3，；
[0049]③PCR扩增
[0050]以引物对Pl和P2为引物建立了 25.0 μ L扩增体系:2XTaq PCR MasterMix(购自北京百泰克公司)12.5 μ L，CldH2O 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L, P2-F 0.6 μ L, P2-R0.4μ L, DNA 模板 1.0μ L ；
[0051]反应程序为:94°C预变性4min ;94°C变性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35个循环；72°C延伸IOmin ；
[0052]④PCR扩增产物的检测与结果判定
[0053]取10.0μ L PCR扩增后产物，1.5%的琼脂糖凝胶电泳(电泳电压:120V ;电泳时间:40min)点样，电泳结束后，用凝胶成像系统对琼脂糖凝胶照相检测，电泳图谱参见图1 ;根据电泳图谱中出现的条带的大小判定:当出现322bp和224bp片段，则为显性白羽纯合子(II基因型);当出现322bp和144bp的片段，则为野生型纯合子(ii基因型);当出现322bp、224bp和144bp的片段，则为显性白羽杂合子(Ii基因型)；
[0054](4)根据基因型判定结果，选留显性白羽位点为II基因型的个体，淘汰显性白羽位点为Ii和ii基因型的个体，得到显性白羽位点为II基因型的公母鸡；
[0055](5)对得到的II基因型个体进行横交和扩繁，按照家系选择和个体选择方法，提高生产速度和鸡肉品质，同时提纯和固定青胫和白羽两个外观性状，经过3个世代以上的选育后，得到显性白羽位点为II基因型的青胫显性白羽肉鸡品系；
[0056](6)将步骤(5)得到的显性白羽位点为II基因型的青胫显性白羽肉鸡品系作为父本，分别与白来航、固始鸡进行杂交，得到高产型或快大型青胫显性白羽肉鸡商品代。
【权利要求】
1.一种青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)利用青胫肉鸡品种作为父本与快大型白羽肉鸡品种作为母本进行杂交，生产出Fl代，选留Fl代青胫白羽公母鸡； (2)Fl代自交得到F2代，选留F2代青胫白羽公母鸡； (3)利用AS-PCR测定F2代青胫白羽鸡的基因型，选留显性白羽位点为II基因型的个体，淘汰显性白羽位点为Ii和ii基因型的个体，得到显性白羽位点为II基因型的公母鸡； (4)对得到的II基因型个体进行横交和扩繁，按照家系选择和个体选择方法，提高生产速度和鸡肉品质，同时提纯和固定青胫和白羽两个外观性状，经过3个世代以上的选育后，得到显性白羽位点为II基因型的青胫显性白羽肉鸡品系。
2.根据权利要求1所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述步骤(O中青胫肉鸡品种为固始鸡、狼山鸡、淮北麻鸡、淮南麻黄鸡、黄山黑鸡、五华鸡、德化黑鸡、崇仁麻鸡、寿光鸡、卢氏鸡、景阳鸡、郧阳大鸡、东安鸡、桃源鸡、瑶鸡、茶花鸡、和田黑鸡中任一种。
3.根据权利要求1所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述步骤(O中快大型白羽肉鸡品种为罗斯308、科宝、艾维茵、哈巴德、艾拔益加、海波罗、迪高中任一种。
4.根据权利要求1所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述步骤(3)中利用AS-PCR测定F2代青胫白羽鸡基因型的方法，包括以下步骤:以包含PMEL17基因的待测鸡全基因组DNA为模板，以引物对Pl为引物PCR扩增鸡PMEL17基因I等位基因，以引物对P2为引物PCR扩增鸡P MEL17基因i等位基因；对扩增得到的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定鸡显性白羽位点的基因型； 所述的引物对Pl为: 上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
下游引物，Pl-R:5’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’ ； 所述的引物对P2为: 上游引物，P2-F:5’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，， 下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
5.根据权利要求4所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的PCR 扩增反应体系为:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L，Pl-F 0.4μ L，Pl-R0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L，P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
6.根据权利要求4所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的PCR扩增反应程序为:94°C预变性4min ;94°C变性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35个循环；72°C延伸 lOmin。
7.根据权利要求4所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的琼脂糖凝胶的质量浓度为1.5%。
8.根据权利要求4所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的琼脂糖凝胶电泳的电压为120V，电泳时间为40min。
9.根据权利要求4所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:所述的鉴定鸡显性白羽位点基因型的方法为:11基因型表现为322bp和224bp条带；Ii基因型表现为322bp、224bp和144bp条带；ii基因型表现为322bp和144bp条带。
10.根据权利要求1所述的青胫显性白羽肉鸡品系的选育方法，其特征在于:将步骤(4)得到的显性白羽位点为II基因型的青胫显性白羽肉鸡品系作为父本与高产蛋鸡品种或快大肉鸡品种 杂交配套，生产出高产型或快大型青胫显性白羽肉鸡。
【文档编号】A01K67/027GK103583469SQ201310590887
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2013年11月20日 优先权日:2013年11月20日
【发明者】康相涛, 韩瑞丽, 蒋瑞瑞, 杨朋坤, 刘小军, 闫峰宾, 李转见, 田亚东, 王彦彬, 王丹丹, 吕世杰, 孙桂荣, 李国喜 申请人:河南农业大学