微生物及其在制备生物肥料中的应用、生物肥料及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明上述实施例提供的微生物及其在制备生物肥料中的应用、生物肥料及其应用，与现有技术中的用于生物肥料中的微生物以及生物肥料相比，由于其中的微生物为匍枝根霉PF102，因此，将该微生物用于生物肥料的制备，并将生物肥料用于作物培养时，不仅能够提高作物的产量，而且能够大大的降低作物的发病率以及由于发病导致的死亡率，同时还能够改善作物根际微生物数量、土壤容重、土壤孔隙度、植物叶子的长宽度、果实数量等生长状况。
【专利说明】微生物及其在制备生物肥料中的应用、生物肥料及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物肥料领域，具体而言，涉及微生物及其在制备生物肥料中的应用、生物肥料及其应用。
【背景技术】
[0002]近年来，随着人们环保意识的加强和对生活质量要求的提高，生物肥料由于不会对环境产生污染，是一种绿色高效的肥料，在农作物培养中得到了快速的发展和广泛的应用。
[0003]相关技术中，生物肥料中常用的微生物有固氮菌:如根瘤菌；溶磷菌:如巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、腊祥芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌；解钾菌:如胶质芽孢杆菌。
[0004]但是，含有上述微生物的生物肥料不能在提高作物产量的同时，有效的防治作物的致病菌。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供微生物及其在制备生物肥料中的应用、生物肥料及其应用，以解决上述的问题。
[0006]在本发明的实施例中第一方面提供了一种微生物，保藏号为:CGMCC N0.8435,保藏名称为:匍枝根霉PF102 (Rhizopus stolonifer)，保藏日期为:2013年11月5日，保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址:北京市朝阳区北辰西路I号院3号中国科学院微生物研究所，邮编:100101。
[0007]在本发明的实施例中第二方面提供了上述微生物在生物肥料制备中的应用。[0008]在本发明的实施例中的第三方面提供了一种生物肥料，包括上述微生物或者源自所述微生物的突变体。
[0009]进一步地，所述生物肥料还包括腐熟有机质。
[0010]具体地，所述生物肥料由以下重量份的原料制得:所述微生物的孢子悬浮液:5-15份，腐熟有机质:30-50份；其中，所述孢子悬浮液的活孢子浓度为3.0-5.0 X IO10Cfu/ml ο
[0011]具体地，所述生物肥料还包括2-4重量份的甲壳素。
[0012]更具体地，所述生物肥料还包括1-3重量份的腐殖酸。
[0013]进一步更具体地，所述生物肥料还包括3-10重量份的壳聚糖。
[0014]优选地，所述生物肥料由以下重量份的原料制得:所述微生物的孢子悬浮液:10份，所述腐熟有机质:45份，所述甲壳素:3份，所述腐殖酸:2份，所述壳聚糖:10份。
[0015]在本发明的实施例中的第四方面提供了上述生物肥料在提高作物产量以及防治作物病虫害中的应用。
[0016]本发明上述实施例提供的微生物及其在制备生物肥料中的应用、生物肥料及其应用，与现有技术中的用于生物肥料中的微生物以及生物肥料相比，由于其中的微生物为匍枝根霉PF102，因此，将该微生物用于生物肥料的制备，并将生物肥料用于作物培养时，不仅能够提高作物的产量，而且能够大大的降低作物的发病率以及由于发病导致的死亡率，同时还能够改善作物根际微生物数量、土壤容重、土壤孔隙度、植物叶子的长宽度、果实数量等生长状况。
【具体实施方式】
[0017]下面通过具体的实施例对本发明做进一步的详细描述。
[0018]生物肥料是一种集有机质、无机营养元素和微生物于一体的养分全面、肥效均衡持久的复合肥料。由于生物肥料不仅能提供作物生长发育所需的有机、无机营养，还可通过其中的微生物对有机物进行降解和营养转化，产生某些能够促进植物生长的生理活性物质；另外，由于生物肥料的原料为农作物秸杆、城市污泥、畜禽粪便等，发展生物肥料有利于缓解废弃物的处理压力。
[0019]但是，相关技术中，生物肥料中的微生物大多不能在提高作物产量的同时，有效的防治农作物的致病菌。
[0020]本发明为了解决上述问题，筛选得到了一种微生物(以下简称本微生物)，该微生物于2013年11月5日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏号为=CGMCC N0.8435，保藏名称为:匍枝根霉 PF102 (Rhizopus stolonifer)。
[0021]本微生物属于匍枝根霉，相关技术中，还没有发现将匍枝根霉菌株用于生物肥料中，并用于防治作物的致病菌。
[0022]将该微生物 用于制备生物肥料，将生物肥料施加在作物生长的土壤中，从而提高作物的产量以及有效的防治作物的致病菌。
[0023]本发明实施例提供的生物肥料包括本微生物，且以孢子悬浮液的形式存在。其中，孢子悬浮液，的活孢子浓度为3.0-5.0X1010cfu/mL.[0024]本发明实施例提供的生物肥料还包括腐熟有机质。
[0025]本发明实施例提供的生物肥料中的原料具有如下作用:
[0026]本微生物属于根霉，具有根霉的特征。根霉在快速繁殖过程中，可以产生维生素、氨基酸、糖化酶、蛋白酶、淀粉酶等多种生理活性物质，促进土壤中有机质的分解和土壤有效成分的释放。本微生物能够产生丰富的胞外活性物质，包括淀粉酶、蛋白酶、氨基酸类、核酸类、维生素、鞘脂类等多种化合物，它们具有分解有机质，抑制有害微生物，促进植物根系生长等作用；本微生物外分泌2种抑菌物质，即脂肽类抗生素表面活性素和多烯类，对多种病原菌有抑制活性，其代谢产物抗逆性强，既可防病，又能促进植株生长。其次，该微生物适应性很强，在4°C~42°C之间都可生长，繁殖速度惊人，这有利于它们快速占领空间资源和营养资源。此外，本微生物易于在人工条件下培养，可用于病原菌防治的种类很多。
[0027]甲壳素具有“植物疫苗”的作用，连续使用可诱导农作物自身产生对病害的抗性因子，增强植物的抗病、抗倒、抗低温等抗逆能力。甲壳素还可用作化肥缓释剂，提高化肥利用率，降低病害发生率，显著减少农药使用量。此外它还有极强叶面附着性能，可促根壮苗，促进果实成熟。
[0028]壳聚糖可诱导植物组织产生甲壳素酶，从而阻碍植物病原菌的增殖。经壳聚糖处理后的小麦和萝卜可明显减少病虫的侵害，产量有显著的提高。用壳聚糖还可以合成植物防治剂，它具有良好的杀虫机制，可抑制害虫的繁殖。
[0029]腐殖酸可以缩小气孔的开张度，减少水分蒸腾，使植株和土壤保持较多的水分，同时促进根系发育，提高根系活力，使作物吸收较多的水分和养料。提高植物体的多种酶活性和叶绿素含量，使新陈代谢旺盛，光合作用加强，糖分和干物质增多，从而达到提高作物产量、改善品质、提高抗寒、抗病等抗逆能力的效果。
[0030]本发明实施例中，通过优选制备生物肥料的原料及重量份数的比例，使得到的生物肥料用于作物生长时，不仅能够大幅度提高作物的产量，而且能够大大的降低作物的发病率以及由于发病导致的死亡率，同时还能够改善作物根际微生物数量、土壤容重、土壤孔隙度、植物叶子的长宽度、果实数量等生长状况。
[0031 ] 实施例1，本微生物的筛选
[0032]1、材料
[0033]供试土壤:从山东省寿光市同一连作黄瓜种植温室中，拨开表土米集3_15cm的根际土壤，每样约100g。把土壤样品分别编号、装袋，带回实验室4°C冰箱保存。
[0034]供试培养基:PDA培养基、孟加拉红培养基。
[0035]2、土壤悬浮液的制备
[0036]将土壤样品放入已灭菌的研钵内，在无菌操作台内研磨至颗粒均匀。采用10倍比稀释法，先称取Ig研磨好的土壤，放入装有99mL无菌水的三角瓶中充分振荡30min,制成10-2的土壤稀释液，再取出ImL加到9mL无菌水中充分振荡制成10_3的稀释液，以此类推，制成10-4的稀释液备用。
[0037]3、平板接种
[0038]采用平板涂布法，分别取10_2、10_3、10_4的稀释液0.1mL加入PDA培养基和孟加拉红培养基中，用玻璃涂布棒将稀释液均匀的涂开，于28°C恒温培养箱中培养，各土样重复3次，各稀释度重复2次。
[0039]4、本微生物的纯化与保存
[0040]观察菌落生长情况并记录原始培养结果。根据微生物在培养基上的生长特性和菌落形态，挑取单菌落，分离纯化微生物。经过多次重复上述操作，得到纯化的本微生物，然后保存于_80°C冰箱中。
[0041]5、本微生物的鉴定
[0042]结合本领域常规的真菌鉴定的方法:①形态学观察法基因分析方法；③分析研究脂肪酸特征的色谱方法，确定本微生物为匍枝根霉PF102。
`[0043]6、本微生物的传代培养
[0044]将本微生物在PDA培养基中传代培养，28°C,培养5天传一代,每一代培养物均进行淀粉酶和蛋白酶活力测定，并与原始菌株的酶活力做对比，以此作为考察菌株遗传稳定性的指标。其中，采用a-淀粉酶活力测定方法测定本微生物的淀粉酶活力，采用福林-酚法测定本微生物的蛋白酶活力。结果如下表所示。
[0045]
【权利要求】
1.一种微生物，其特征在于，保藏号为:CGMCC N0.8435，保藏名称为:匍枝根霉PF102 (Rhizopus stolonifer)，保藏日期为:2013 年 11 月 5 日。
2.权利要求1所述的微生物在生物肥料制备中的应用。
3.—种生物肥料，其特征在于，包括权利要求1所述的微生物。
4.根据权利要求3所述的生物肥料，其特征在于，还包括腐熟有机质。
5.根据权利要求4所述的生物肥料，其特征在于，由以下重量份的原料制得:所述微生物的孢子悬浮液:5-15份，腐熟有机质:30-50份；其中，所述孢子悬浮液中活孢子浓度为.3.0-5.0X1010cfu/mL.
6.根据权利要求5所述的生物肥料，其特征在于，还包括2-4重量份的甲壳素。
7.根据权利要求6所述的生物肥料，其特征在于，还包括1-3重量份的腐殖酸。
8.根据权利要求7所述的生物肥料，其特征在于，还包括3-10重量份的壳聚糖。
9.根据权利要求8所述的生物肥料，其特征在于，由以下重量份的原料制得:所述微生物的孢子悬浮液:10份，所述腐熟有机质:45份，所述甲壳素:3份，所述腐殖酸:2份，所述壳聚糖:10份。
10.权利要求3-9任一项所述的生物肥料在提高作物产量以及在防治作物致病菌中的应用。
【文档编号】A01P3/00GK103695321SQ201310728657
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2013年12月26日 优先权日:2013年12月26日
【发明者】杨文慧 申请人:杨文慧