一种北虫草液体菌种的制备方法
【专利摘要】一种北虫草液体菌种的制备方法，包括以下步骤：（1）配制培养基：（2）装瓶灭菌：将配好的培养基装入培养瓶，封口膜封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；（3）接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却后，接入北虫草斜面母种；（4）培养：将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种。本发明不使用发酵罐、摇床等设备，不需要通气或者搅拌培养，可以减少投资，降低生产成本，非常适合大批量的成产和推广；制备的北虫草液体菌种，及时使用能保证菌丝的良好活性，样品中菌丝浓度适中，培养液清澈透亮，便于观察菌丝生长状况，能及时发现和处理污染的菌种，减少因为菌种污染接种造成的不必要损失。
【专利说明】一种北虫草液体菌种的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于食用菌的使用生产【技术领域】，具体涉及一种北虫草液体菌种的制备方法。
【背景技术】
[0002]国内外学者一直在努力探索开发培育新的虫草菌种，进行扩大化生产和综合开发，以替代天然的冬虫夏草，其中以蛹虫草的研究最多。蛹虫草又称为北虫草，作为传统珍贵中药材，北虫草具有免疫调节作用、能够治疗系统失调、具有抗氧化抗凋亡活性、同时有治疗哮喘，支气管和炎症的功能。随着人们生活水平的提高，虫草作为我国传统的名贵滋补中药材，由于的营养、药用价值很高，市场需求日益扩大。在野生虫草日益稀少的今天，北虫草的子实体被中医认为是最好的入药部位，且人工培养子实体已实现规模化，因此北虫草的开发和利用具有广阔的前景。
[0003]北虫草的菌种一般采用液体菌种，因为其具有灭菌时间短、培养周期短而且活性强的优点而备受重视。栽培实践证明北虫草栽培采用液体种方式更易获得成功和高产，明显优于固体种栽培的效果。现有的液体菌种培养制备需要摇床、发酵罐等设备，在摇床上培养的液体种菌丝体浓度高，易形成菌丝团或者球，这样不便于肉眼检查亮度。
[0004]液体种制备是北虫草栽培步骤中最关键技术之一，由于受技术和设备条件限制使北虫草栽培还只是局限 在小范围，这不利于北虫草产业的全面推广普及。
【发明内容】
[0005]本发明要解决的技术问题是提供一种北虫草液体菌种的制备方法，该方法克服现有液体菌种培养过程中使用发酵罐、摇床等设备，投资大，操作不便等不足。
[0006]本发明的制备方法不使用发酵罐、摇床等设备，不用通气或者搅拌培养，可以成功培养出健壮活力的菌丝，此方法简单方便、易于推广。
[0007]本发明的技术方案包括以下步骤:
(1)、配制培养基:将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取200g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖20 g、磷酸二氢钾I g以及硫酸镁0.5 g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml,最后用氢氧化钠水溶液调整PH至7.0-7.2得到培养基；
(2)、装瓶灭菌:按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口膜封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶；
(3)、接种:灭菌完成后，等培养液温度冷却到28°C以下后，接入北虫草斜面母种；
(4)、培养:将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种；所述培养箱温度控制在20-25°C，湿度保持在60-70%。
[0008]上述方案可进一步优选为:所述步骤(2)中封口膜采用边长为12cm、厚度为5mm耐高温无毒薄膜。
[0009]所述步骤(2)中的高压灭菌程序为121°C下保持30min。
[0010]所述步骤(3)的接种是指在无菌条件下挑0.5 cmX0.5 cm小方块4块北虫草斜
面母种接入培养基中。
[0011]所述步骤(4)中的避光密闭培养需要将接种的菌种瓶先静置培养48h，以后每天人工摇晃2-3次，每次2分钟，防止菌丝结块，同时检查菌丝生长情况，发现污染的菌种及时剔除。
[0012]与现有的技术相比，本发明具有以下优点:
1、本发明提供的方法不使用发酵罐、摇床等设备，不需要通气或者搅拌培养，可以减少投资，降低生产成本，非常适合大批量的成产和推广。
[0013]2、本发明提供的方法制备的北虫草液体菌种，及时使用能保证菌丝的良好活性，样品中菌丝浓度适中，培养液清澈透亮，便于观察菌丝生长状况，能及时发现和处理污染的菌种，减少因为菌种污染接种造成的不必要损失。
[0014]3、本发明提供的方法不用电，不消耗能源，对环境没有任何污染，符合国家节能环保的产业政策。
【具体实施方式】
`[0015]实施例1
1、准备洗干净的塑料培养瓶500 mL16只,边长为12cm,厚度为5mm的正方形的聚丙烯
酰胺封口膜和适量橡皮筋。
[0016]2、配制方法:洗净新鲜的马铃薯，去皮后称取400 g，切成小块(或小条、薄片均可)，加水2000 mL，煮沸20-30 min，至马铃薯软而不烂时，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，取其液汁于烧杯中，再加入葡萄糖40 g，磷酸二氢钾2.0 g，硫酸镁1.0 g，并搅拌均匀，补足水至2000 mL ;最后用氢氧化钠水溶液调整pH7.0-7.2。
[0017]3、装瓶灭菌:将配好的培养液按照每瓶250 mL装入培养瓶后，用准备好的聚丙烯酰胺封口膜封口后，用橡皮筋扎紧，放入高压灭菌锅中按照常规灭菌，灭菌温度121°C，时间30mino
[0018]4、接种:等培养液温度冷却到28°C以下后，在无菌的条件下接入北虫草斜面母种，挑0.5 cmX 0.5 cm小方块4块。
[0019]5、培养:将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养,先静置培养48h,以后每天人工摇晃3次，每次2分钟，防止菌丝结块，同时检查菌丝生长情况，发现污染的菌种及时剔除，培养箱温度控制在20-25°C，湿度保持在60-70%。培养6_8天后即可得到北虫草的液体菌种。
[0020]6、使用:将获得的液体菌种导入灭菌的处理的瓶中，用移液枪均匀接种到北虫草大米培养基中，每瓶接种3-5 mL。
[0021]下面将连续振荡方法(摇床、发酵罐)制备的液体菌种与本发明定时振荡制备的液体菌种做比较，结果如下表:
【权利要求】
1.一种北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)、配制培养基:将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取200g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖20 g、磷酸二氢钾I g以及硫酸镁0.5 g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml,最后用氢氧化钠水溶液调整PH至7.0-7.2得到培养基； (2)、装瓶灭菌:按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口膜封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶； (3)、接种:灭菌完成后，等培养液温度冷却到28°C以下后，接入北虫草斜面母种； (4)、培养:将接种好的培养瓶放到培养箱中避光密闭培养，培养6-8天后即可得到北虫草的液体菌种；所述培养箱温度控制在20-25°C，湿度保持在60-70%。
2.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)中封口膜采用边长为12cm、厚度为5mm耐高温无毒薄膜。
3.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于:所述步骤(2)中的高压灭菌程序为121°C下保持30min。
4.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)的接种是指在无菌条件下挑0.5 cmX0.5 cm小方块4块北虫草斜面母种接入培养基中。
5.根据权利要求1所述的北虫草液体菌种的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中的避光密闭培养需要将接种的菌种瓶先静置培养48h，以后每天人工摇晃2-3次，每次2分钟，防止菌丝结块，同时检查菌`丝生长情况，发现污染的菌种及时剔除。
【文档编号】A01G1/04GK103858676SQ201410110255
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2014年3月24日 优先权日:2014年3月24日
【发明者】周元科, 陈永民, 刘群涛, 支月娥, 刘霞, 刘涛 申请人:山东晨阳菌业有限公司