保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌在田间生产中的应用的制作方法

文档序号:251791阅读:252来源:国知局
保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌在田间生产中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了保水剂与烟草青枯病病原菌拮抗菌共同在田间生产中的应用,该保水剂具有延长拮抗菌在土壤中定殖的作用,由于延长了拮抗菌在土壤中的定殖,起到了更好的防病效果,对烟草青枯病具有良好的防治效果。
【专利说明】保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌在田间生产中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于微生物和农业生产领域,涉及保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌在田间生产中的应用。
【背景技术】
[0002]保水剂又称高吸水剂、保湿剂、超强吸水树脂、亲水智多能交聚物等,是利用超强吸水性树脂制成的一种具有超强吸水保水能力的功能性高分子聚合物。这类物质含有大量结构特异的强吸水基因团,它能吸收自身重量几百倍的水分。由于分子结构交联,分子网络所吸水分不能用一般物理方法挤出,故具有很强的保水性能。保水剂具有反复吸水功能,吸水后膨胀为水凝胶,在干燥条件下又能将水分缓慢释放供作物利用。保水剂能增强土壤保水性,改善土壤结构,提高降雨入渗率,减少土壤水分和养分的流失,提高降雨、灌溉水和土壤蓄积水的利用率。此外保水剂还具有选择吸液性、耐寒性、透水性、缓释性、膨胀性等特点。
[0003]保水剂广泛用于土壤改良剂,许多研究表明,土壤中施用保水剂可以改善土壤物理水分性状,增大土壤持水性,增加对肥料的吸附作用,从而达到促进作物出苗、成活、提高作物干物质积累,促进根系发育的目的。保水剂也可以作为培养基质用于花卉、蔬菜等作物的育苗。赵瑞等在黄瓜上的研究结果表明,在育苗基质中添加保水剂明显改善了基质的供水状况,促进了秧苗的根系生长发育,改善了秧苗的生理活性,利于形成壮苗并且可提高黄瓜的产量。
[0004]近年来,随着科技进步和人们环保意识的加强,生物防控方法引起了人们的高度重视。生物防控烟草青枯病就是利用微生物间的拮抗、竞争、捕食、寄生等关系抑制病原菌的生长发育与繁殖,从而减少病害的发生。生物防控烟草青枯病主要分为以下两个方面:1、利用从烟草大田的根际土壤中筛选的拮抗菌来防控烟草青枯病。这样回接于原位生态环境中更容易定殖,更易与病原菌竞争生态位点。拮抗菌是通过抑制病原菌的生长和诱导烟株的系统抗性来起作用的。2、利用茄科劳尔氏菌无致病力菌株来抑制致病性茄科劳尔氏菌的生长。细菌素是一种细菌所产生的,对同种细菌或关系较近的细菌有杀伤作用、大多含蛋白的抗菌物质。
[0005]但如何延长拮抗菌在田间的定制时间,充分发挥其作用是本领域的技术人员亟待解决的技术问题。

【发明内容】

[0006]本发明的目的是克服现有技术所存在的上述不足,本发明一方面涉及保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌在田间生产中的应用,另一方面,还涉及烟草青枯病菌拮抗菌本身。为了实现本发明的目的,拟采用如下技术方案:
[0007]本发明涉及保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌共同在田间生产中的应用。
[0008]在本发明的一个优选实施方式中,所述的烟草青枯病菌拮抗菌Ba-S属于解淀粉芽孢杆菌或其直接传代物,于2013年9月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,菌种保藏号为CGMCCN0.8262。
[0009]在本发明的另一个优选实施方式中,所述的田间是指烟草种植田。
[0010]在本发明的一个优选实施方式中,所述的保水剂是丙稀盐酸-丙烯酰胺类保水剂(BJ2101),购自北京汉力淼新技术有限公司。
[0011]在本发明的另一方面,本发明还涉及所述的烟草青枯病菌拮抗菌。
[0012]在本发明的另一方面,本发明还涉及保水剂在延长烟草青枯病菌拮抗菌定殖时间中的应用。
【专利附图】

【附图说明】
[0013]图1拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗作用;
[0014]图2拮抗菌数量在保水剂中动态监测;
[0015]图3 土壤中拮抗菌在保水剂中的数量动态变化;
[0016]图4保水剂延长拮抗菌定殖以防控烟草青枯病。
[0017]微生物信息
[0018]本发明的一个优选实施方式以及【具体实施方式】中所使用的烟草青枯病菌拮抗菌Ba-S解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号CGMCCN0.8262,保藏地址为:北京市朝阳区北辰西路I号院3号,中国科学院微生物研究所,保藏日期为2013年9月25日。
【具体实施方式】
[0019]下面结合附图和具体实施例对本发明的方法作进一步详细地说明。
[0020]一、烟草青枯病菌拮抗菌微生物的筛选
[0021 ] 选择对烟草青枯病病原菌具有较好拮抗作用的一株拮抗菌Ba-S (Bacil Iusamyloliquefaciens解淀粉芽孢杆菌,中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCCN0.8262),此菌株筛选自烟草青枯病发病严重烟田中未发病的烟株根际土壤中。按照稀释涂布平板法将土壤样品溶液稀释到10-4~10-6,然后均匀的涂布于改良后的牛肉膏蛋白胨培养基上(葡萄糖IOg,蛋白胨5g,牛肉膏3g,酵母膏0.5g,去离子水1000mL,PH7.0~7.2,琼脂粉20g,115°C灭菌30min),在30°C黑暗条件下培养24h待菌落长出后,将青枯病病原菌48h发酵菌悬液均匀喷洒在平板上,进行培养观察,根据抑菌圈的有无、大小来进行筛选并纯化。筛选到的解淀粉芽孢杆菌Ba-S主要生物学特征为:革兰氏染色阳性G+,细胞形态为杆状,芽孢卵圆形,孢囊膨大,菌落白色、半透明,呈圆或不规则形,有鞭毛,可运动,接触酶实验阳性,氧化酶阴性,产纤维素酶,糖醇类发酵试验甘油、L-阿拉伯糖、D-木糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、甘露糖、淀粉等阳性,半乳糖、山梨糖、鼠李糖、木糖醇等阴性。
[0022]图1平板中心接种拮抗菌,然后将烟草青枯病菌48h发酵液喷洒在平板上(约
0.5mL),于30°C微生物培养箱中培养48h后发现,拮抗菌周围病原菌的生长明显被抑制,拮抗圈达到11_。由此可见,拮抗菌Ba-S对烟草青枯病菌有显著的拮抗作用。
[0023]二、烟草青枯病菌拮抗菌在保水剂中的定殖[0024]将所筛选的烟草青枯病菌拮抗菌接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中,170r/min,30°C摇床培养36h后,菌液浓度达到107cfu/mL,按1:16.85的吸水倍率接种于丙稀盐酸-丙烯酰胺类保水剂(BJ2101,粒径为M号)中,以接种于相同量的培养基中设为对照,于30°C下培养于微生物培养箱中,每隔5天测定保水剂中拮抗菌的数量,绘制数量动态监测图(图2)。从图中可以看出,烟草青枯病菌拮抗菌的数量在保水剂中0-10天内呈先下降后升高的趋势,65天内数量级上未发生变化。而拮抗菌在液体培养基中呈一直下降趋势,接种10天后保水剂中Ba-S拮抗菌数量显著高于液体培养基,从而表明,保水剂对烟草青枯病菌拮抗菌具有延长定殖的作用。
[0025]三、保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌在田间生产中的应用
[0026]3.1保水剂延长烟草青枯病菌拮抗菌在田间的定殖实验
[0027]将拮抗菌Ba-S在牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,NaC15.0g,ρΗ7.0)中,170r/min,30°C摇床培养36h后,菌液浓度达到107cfu/mL,以1:16.85的吸水倍率接种于丙稀盐酸-丙烯酰胺类保水剂中。在烟草移栽时将吸附拮抗菌的保水剂施入到移栽穴土壤中,将烟苗栽于保水剂上,保水剂施用量为100g/株烟。定期从土壤中取得根际土,测定土壤中拮抗菌的数量动态变化。从图3中可以看出,在长达90天的测定中,由于保水剂的存在,土壤中的拮抗菌只下降了一个数量级,这一结果充分说明,该保水剂具有延长拮抗菌在土壤中定殖的作用。
[0028]3.2拮抗菌保水剂防控烟草青枯病
[0029]将拮抗菌Ba-S在牛肉膏蛋白胨培养基(牛肉膏5.0g,蛋白胨10.0g,NaC15.0g,ρΗ7.0)中,170rpm/min,30°C摇床培养36h后,菌液浓度达到107cfu/mL,以1:16.85的吸水倍率接种于丙稀盐酸-丙烯酰胺类保水剂中。在烟草移栽时将吸附拮抗菌的保水剂施入到移栽穴土壤中,将烟苗栽于保水剂上,保水剂施用量为100g/株烟。由于延长了拮抗菌在土壤中的定殖,解决了以往拮抗菌施入土壤快速死亡的难题,因此可以更好地抑制土壤中的青枯病菌,真正有效达到防控烟草青枯病的目的,防控率高达72.08% (表1和图4)。
[0030]防控率=[(对照病情指数一处理病情指数)对照病情指数]X 100%
[0031]表1拮抗菌保水剂对烟草青枯病的防控效果
[0032]
【权利要求】
1.保水剂与烟草青枯病菌拮抗菌共同在田间生产中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用,所述的烟草青枯病病原菌拮抗菌保藏号为CGMCCN0.8262的解淀粉芽孢杆菌或其直接传代物。
3.根据权利要求1所述的应用,所述的田间是指烟草种植田;优选的,所述的应用是指用于防治烟草青枯病的应用。
4.根据权利要求1所述的应用,所述的保水剂是丙稀盐酸-丙烯酰胺类保水剂。
5.权利要求2所述的 烟草青枯病菌拮抗菌。
6.保水剂在延长烟草青枯病菌拮抗菌定殖时间中的应用。
【文档编号】A01P1/00GK103931658SQ201410173900
【公开日】2014年7月23日 申请日期:2014年4月28日 优先权日:2014年4月28日
【发明者】刘艳霞, 李想 申请人:贵州省烟草科学研究院
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