一种野生米斛的选种培育方法
【专利摘要】本发明公开了一种野生米斛的选种培育方法生产工艺，包括采集野生种苗、人工培育和授粉、配制培养基、培养基培育、移植各个步骤。本发明能彻底改变了米斛自然授粉结实率低的问题，同时解决野外的种种环境因素制约，受气候影响较大，且病虫害严重且难以防治，保护了野生米斛，同时提高了野生米斛繁殖率，保护了米斛的繁殖。
【专利说明】一种野生米斛的选种培育方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品领域，具体涉及一种野生米斛的选种培育方法。
【背景技术】
[0002] 米斛是我国濒临灭绝的珍稀物种，被誉为"中华仙草"之首，是霍山县独有的、拥有 原产地地理标志的名贵中药材，具有极高的药用保健价值，具有生津益明、清热养阴、消炎 止痛、清音明目功能及抗癌、抗衰老、抗辐射和增强免疫力等功效，尤其米斛多糖具有极高 的保健和医疗作用。但由于其生境狭窄，繁殖困难，植株数量极少，因此人工种植霍山米斛 具有广阔的前景，但缺乏优质种苗是霍山米斛种植业的瓶颈之一。虽然国内早有关于霍山 米斛种苗生产的专利和文献报道，但是却没有见到利用试管开花授粉结果的方法来繁殖霍 山米斛的。
[0003] 安徽省霍山县地处我省西部偏南，大别山北麓。介于北纬33° 03' -3Γ 33'， 东经115° 52'-116° 32'之间。平均海拔500米，属亚热带季风气候区。四季分明，雨 量充沛，年平均气温14. 2°C -16. 1°C，最冷月平均气温2°C，最热月平均气温27. 8°C。年降 水量1100-1600mm，绝对湿度年平均15. 6mb，常年相对湿度80%，全年> 80%天数200天左 右。无霜期为220-270天，无霜期长。自然环境优美，是霍山米斛品质形成的重要条件。
[0004] 米斛为兰科多年生附生草本植物，形曲不直，似蚱蜢髀，是米斛中的极品，为我县 独有，拥有原产地地理保护标志和濒临灭绝的国家级珍惜名贵中药材，是国家野生中药材 二级保护品种，有"植物大熊猫"之称，《本草纲目》记载：米斛生于悬崖峭壁之间、性微寒， 有养胃生津、滋阴除热、补肾益精、明目之功效。以之代茶可开胃健脾，霍山米斛具有益精填 髓、补五脏内绝不足，平胃气、长肌肉、益智除烦、清虚热、轻身延年之功效，清赵学敏、赵学 凯《本草纲目拾遗》《百草经》语曰：米斛近时有一种形短祗寸许细如灯芯，色青黄、嚼之味 甘，微有滑涎。
[0005] 米斛喜阴凉湿润环境，常附生于阴凉湿润的树上和岩石上。喜风，又有"风大贯"之 称。尤其是半阴半阳的地方，附生有苔藓植被石灰岩石上和树上最好。其生长条件苛刻，米 斛种子细小，不具胚乳(供幼苗生长的物质)，在自然状态下，发芽率很低，成苗更难，20世 纪40年代kundson介绍了简便萌发兰花种子的培养基。为米斛种子培育试管苗奠定了基 础，但米斛组织培养试管苗工作大多起步于20世纪70年代末至80年代初。20世纪90 年代，国内许多教育科研植物园等单位均开展此项研究工作，发展很快，至90年代末组织 培养试管苗移栽大田成活率已达95%以上。
[0006] 由于野外的种种环境因素制约，受气候影响较大，且病虫害严重且难以防治，野生 的米斛濒临灭绝，属于国家级珍惜名贵中药材，野外养殖繁殖率低，且成本较高。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种野生米斛的选种培育方法。
[0008] 本发明通过以下技术方案实现： 一种野生米斛的选种培育方法，包括以下步骤： (1) 采集健康、生长性状良好的野生米斛，将采集的米斛幼苗置于大棚栽培生长，保持 大棚湿度为60%，夏季棚中的温度控制在20-25°C，冬季棚内温度控制在10-15°c ; (2) 待野生米斛生长开花至花期绽放，一般开花后一个星期授粉为佳，授粉环境须天气 晴朗且无风，温度以20°C为佳，采用人工授粉的方式： a、 选取茁壮的米斛植株的花朵，拔除唇瓣； b、 用牙签挑取花药，将牙签上的花药送入蕊柱腔，花粉粘在蕊柱腔内即可，动作要轻， 以免刺伤花朵； c、 一周内可观察授粉是否成功，若授粉成功，得到果荚； (3) 配制培养基， ① 培养基工作液包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物质， a、 所述大量元素浓度和成分为：1650mg/L的NH4N03,1900mg/L的KN03,440mg/L的 CaC12 · 2H20,370mg/L 的 MgS04 · 7H20,170mg/L 的 KH2P04 ;所述微量元素浓度和成分为： 0· 83mg/L 的 KI，6. 3mg/L 的 H3B03,22. 3mg/L 的 MnS04 · 4H20,8. 6mg/L 的 ZnS04 · 7H20， 0· 25mg/L 的 Na2Mo04 · 2Η20,0· 025mg/L 的 CuS04 · 5Η20,0· 025mg/L 的 CoC12 · 6H20 ;所述 铁盐浓度和成分为：27. 8mg/L的FeS04 · 7H20, 37. 3mg/L的Na2-EDTA · 2H20 ;所述有机物质 浓度和成分为：l〇〇mg/L的肌醇，0. 5mg/L的烟酸，0. 5mg/L的盐酸批咳醇，0. lmg/L的盐酸硫 胺素，2.0mg/L的甘氨酸； b、 大量元素母液的配制，在分析天平上按a中分别称取大量元素药品，置于三角瓶中， 分别加蒸馏水l〇〇ml左右于三角瓶中，再放到磁力搅拌器搅拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中，注意CaC12要后加，最后加蒸馏水定容至刻度，此为10倍液的大量元素母液； c、 微量元素母液的配制，在分析天平上按a中分别称取微量元素药品，按大量元素母 液配制方法，配成100倍液的微量元素母液； d、 铁盐母液的配制，在分析天平上按a中称取FeS04. 7H2 0和Na2 - EDTA药品，配成 100倍液的铁盐母液； e、 有机物母液的配制，用分析天平按a中分别称取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50 倍有机物质母液； ② 培养基的合成： a、 加入药品用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中；用专用的移液管分别 移取微量元素母液l〇ml，铁盐母液10ml，有机物母液10ml，均加入该定容瓶中，再用蒸馏 水定容至刻度，摇匀，取3/1至1/2液体培养基移入白瓷缸中，称取琼脂丝7 - 9g和蔗糖 30g放入白瓷缸中； b、 加热通电加热，烧开后改用文火，至琼脂全部融化，透澈见底为止； c、 调整PH值从电炉上取下冷却后，用0. 1N的NaOH或0. 1N的HC1调整pH值为5. 8; d、 培养基的分装搅拌均匀后，分装到三角瓶中，每瓶约25-30 ml，即1升培养基分装 40-35瓶，最后用封口塑料膜包上瓶口，用线绳扎口，写上标号； (4) 待种子成熟后，将种子掰开，取出壳内果实，用酒精进行消毒后，同时对配制好的培 养基进行高温消毒灭菌，再放入培养室内的培养基中培养，培养条件：要求每日光照12-16 小时，光照度1000-50001x，温度以23-27°C为宜，湿度为100%，保持畅通的空气； (5)将在培养室培养后的幼苗取出，洗去培养基，移栽到无菌的混合土中，保持湿度为 60%和温度为25°C，当长出新叶时，即可移栽到种植地中。
[0009] 本发明的有益效果：能彻底改变了米斛自然授粉结实率低的问题，同时解决野外 的种种环境因素制约，受气候影响较大，且病虫害严重且难以防治，保护了野生米斛，同时 提高了野生米斛繁殖率，保护了米斛的繁殖。
【具体实施方式】
[0010] 一种野生米斛的选种培育方法，包括以下步骤： (1) 采集健康、生长性状良好的野生米斛，将采集的米斛幼苗置于大棚栽培生长，保持 大棚湿度为60%，夏季棚中的温度控制在22°C，冬季棚内温度控制在12°C ; (2) 待野生米斛生长开花至花期绽放，一般开花后一个星期授粉为佳，授粉环境须天气 晴朗且无风，温度以20°C为佳，采用人工授粉的方式： a、 选取茁壮的米斛植株的花朵，拔除唇瓣； b、 用牙签挑取花药，将牙签上的花药送入蕊柱腔，花粉粘在蕊柱腔内即可，动作要轻， 以免刺伤花朵； c、 一周内可观察授粉是否成功，若授粉成功，得到果荚； (3) 配制培养基， ① 培养基工作液包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物质， a、 所述大量元素浓度和成分为：1650mg/L的NH4N03,1900mg/L的KN03,440mg/L的 CaC12 · 2H20,370mg/L 的 MgS04 · 7H20,170mg/L 的 KH2P04 ;所述微量元素浓度和成分为： 0· 83mg/L 的 KI，6. 3mg/L 的 H3B03,22. 3mg/L 的 MnS04 · 4H20,8. 6mg/L 的 ZnS04 · 7H20， 0· 25mg/L 的 Na2Mo04 · 2Η20,0· 025mg/L 的 CuS04 · 5Η20,0· 025mg/L 的 CoC12 · 6H20 ;所述 铁盐浓度和成分为：27. 8mg/L的FeS04 · 7H20, 37. 3mg/L的Na2-EDTA · 2H20 ;所述有机物质 浓度和成分为：l〇〇mg/L的肌醇，0. 5mg/L的烟酸，0. 5mg/L的盐酸批咳醇，0. lmg/L的盐酸硫 胺素，2.0mg/L的甘氨酸； b、 大量元素母液的配制，在分析天平上按a中分别称取大量元素药品，置于三角瓶中， 分别加蒸馏水l〇〇ml左右于三角瓶中，再放到磁力搅拌器搅拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中，注意CaC12要后加，最后加蒸馏水定容至刻度，此为10倍液的大量元素母液； c、 微量元素母液的配制，在分析天平上按a中分别称取微量元素药品，按大量元素母 液配制方法，配成100倍液的微量元素母液； d、 铁盐母液的配制，在分析天平上按a中称取FeS04. 7H2 0和Na2 - EDTA药品，配成 100倍液的铁盐母液； e、 有机物母液的配制，用分析天平按a中分别称取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50 倍有机物质母液； ② 培养基的合成： a、加入药品用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中；用专用的移液管分别 移取微量元素母液l〇ml，铁盐母液10ml，有机物母液10ml，均加入该定容瓶中，再用蒸馏 水定容至刻度，摇匀，取3/1液体培养基移入白瓷缸中，称取琼脂丝8g和蔗糖30g放入白 瓷缸中；
【权利要求】
1. 一种野生米斛的选种培育方法，其特征在于包括以下步骤： (1) 采集健康、生长性状良好的野生米斛，将采集的米斛幼苗置于大棚栽培生长，保持 大棚湿度为60%，夏季棚中的温度控制在20-25°C，冬季棚内温度控制在10-15°c ; (2) 待野生米斛生长开花至花期绽放，一般开花后一个星期授粉为佳，授粉环境须天气 晴朗且无风，温度以20°C为佳，采用人工授粉的方式： a、 选取茁壮的米斛植株的花朵，拔除唇瓣； b、 用牙签挑取花药，将牙签上的花药送入蕊柱腔，花粉粘在蕊柱腔内即可，动作要轻， 以免刺伤花朵； c、 一周内可观察授粉是否成功，若授粉成功，得到果荚； (3) 配制培养基， ① 培养基工作液包括大量元素、微量元素、铁盐和有机物质， a、 所述大量元素浓度和成分为：1650mg/L的NH4N03,1900mg/L的KN03,440mg/L的 CaC12 · 2H20,370mg/L 的 MgS04 · 7H20,170mg/L 的 KH2P04 ;所述微量元素浓度和成分为： 0· 83mg/L 的 KI，6. 3mg/L 的 H3B03,22. 3mg/L 的 MnS04 · 4H20,8. 6mg/L 的 ZnS04 · 7H20， 0· 25mg/L 的 Na2Mo04 · 2Η20,0· 025mg/L 的 CuS04 · 5Η20,0· 025mg/L 的 CoC12 · 6H20 ;所述 铁盐浓度和成分为：27. 8mg/L的FeS04 · 7H20, 37. 3mg/L的Na2-EDTA · 2H20 ;所述有机物质 浓度和成分为：l〇〇mg/L的肌醇，0. 5mg/L的烟酸，0. 5mg/L的盐酸批咳醇，0. lmg/L的盐酸硫 胺素，2.0mg/L的甘氨酸； b、 大量元素母液的配制，在分析天平上按a中分别称取大量元素药品，置于三角瓶中， 分别加蒸馏水l〇〇ml左右于三角瓶中，再放到磁力搅拌器搅拌溶解，然后一一倒入1000ml 的容量瓶中，注意CaC12要后加，最后加蒸馏水定容至刻度，此为10倍液的大量元素母液； c、 微量元素母液的配制，在分析天平上按a中分别称取微量元素药品，按大量元素母 液配制方法，配成100倍液的微量元素母液； d、 铁盐母液的配制，在分析天平上按a中称取FeS04. 7H2 0和Na2 - EDTA药品，配成 100倍液的铁盐母液； e、 有机物母液的配制，用分析天平按a中分别称取甘氨酸VB1、Vpp、VB6、肌醇，配成50 倍有机物质母液； ② 培养基的合成： a、 加入药品用量筒取大量元素母液100ml倒入1000ml定容瓶中，用专用的移液管分 别移取微量元素母液l〇ml，铁盐母液10ml，有机物母液10ml，均加入该定容瓶中，再用蒸 馏水定容至刻度，摇匀，取3/1至1/2液体培养基移入白瓷缸中，称取琼脂丝7 - 9g和蔗 糖30g放入白瓷缸中； b、 加热通电加热，烧开后改用文火，至琼脂全部融化，透澈见底为止； c、 调整PH值从电炉上取下冷却后，用0. 1N的NaOH或0. 1N的HC1调整pH值为5. 8; d、 培养基的分装搅拌均匀后，分装到三角瓶中，每瓶约25-30 ml，即1升培养基分装 40-35瓶，最后用封口塑料膜包上瓶口，用线绳扎口，写上标号； (4) 待种子成熟后，将种子掰开，取出壳内果实，用酒精进行消毒后，同时对配制好的 培养基进行高温消毒灭菌，再放入培养室内的培养基中培养，培养条件：要求每日光照 12-16小时，光照度1000-50001x，温度以23-27°C为宜，湿度为100%，保持畅通的空气； (5)将在培养室培养后的幼苗取出，洗去培养基，移栽到无菌的混合土中，保持湿度为 60%和温度为25°C，当长出新叶时，即可移栽到种植地中。
【文档编号】A01H4/00GK104054575SQ201410236942
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年5月30日 优先权日:2014年5月30日
【发明者】李维宝 申请人:霍山宝信园石斛开发有限公司