一组糖基转移酶及其应用的制作方法

一组糖基转移酶及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一组糖基转移酶及其应用。具体地，提供了糖基转移酶gGT25、gGT13、gGT30、gGT25-1、gGT25-3、gGT25-5，gGT29、gGT29-3、gGT29-4，gGT29-5，gGT29-6，gGT29-7、3GT1、3GT2、3GT3、3GT4及其衍生多肽在萜类化合物糖基化催化及新皂苷合成中的应用，其中，糖基转移酶能特异和高效地催化四环三萜化合物底物的C-20位和/或C-6位和/或C-3的羟基糖基化，和/或将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-3位和C-6位的第一个糖基上以延伸糖链。本发明糖基转移酶还可应用于构建人工合成稀有人参皂苷及多种新人参皂苷及其衍生物。
【专利说明】一组糖基转移酶及其应用

【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术和植物生物学领域，具体地，本发明涉及一种糖基转移酶及 其应用。

【背景技术】
[0002] 人参皂苷是从人参及其同属植物（如三七、西洋参等）中分离到的皂苷的总称，属 于三萜类皂苷，是人参中的主要有效成份。目前，已经从人参中分离出了至少60种皂苷，其 中一些人参皂苷被证实具有广泛的生理功能和药用价值：包括抗肿瘤、免疫调节、抗疲劳、 护心、护肝等功能。
[0003] 从结构上来看，人参皂苷是皂苷元经过糖基化后形成的生物活性小分子。人参皂 苷的皂苷元只有有限的几种，主要是达玛烷型的原人参二醇和原人参三醇，以及齐墩果烷 酸。近年来，人们又从三七中分离到了新的皂苷元，25-0H-PH)和25-ocH 3-pro，这些新的皂 苷元都具有非常好的抗肿瘤活性。
[0004] 皂苷元通过糖基化后，可以提高水溶性，并产生出不同的生理活性。原人参二醇型 阜苷的糖链一般结合在阜苷兀的C3(和）或C20的轻基上。原人参三醇阜苷与原人参二醇 皂苷相比，在C6位多一个羟基，目前发现的原人参三醇型皂苷都是在C6(和）或C20的羟 基上结合糖基化，在C3上结合糖基的原人参三醇型皂苷尚未见报道。糖基可以是葡萄糖、 鼠李糖、木糖、和阿拉伯糖。
[0005] 不同的糖基结合位点，糖链组成和长度使人参皂苷在生理功能和药用价值上产生 极大的差异。例如，人参皂苷Rbl，Rd和Rc都是以原人参二醇为皂苷元的皂苷，它们之间的 差别只是糖基修饰上的差别，但它们之间的生理功能就有很多的差别。Rbl有稳定中心神经 元系统的功能，而Rc的功能却是抑制中心神经元系统的功能，Rbl的生理功能非常广泛，而 Rd却只有非常有限的几种功能。
[0006] 人参皂苷皂苷元和皂苷之间的结构多样性还体现在空间立体结构上，虽然四环三 萜的骨架上存在很多的手性碳原子，但是能够产生空间立体结构的主要是在C20位上。几 乎每种人参皂苷和皂苷元都存在C20位的差向异构体。在人参中，C20位S构型的人参皂 苷和皂苷元含量要远远高于C20位R构型的人参皂苷和皂苷，所以一般情况下所说的人参 皂苷和皂苷元都指的C20位S构型的人参皂苷和皂苷元。但是，人参皂苷和皂苷元C20位 的差向异构体具有明显不同的生理活性。例如，S构型人参皂苷Rh2(3-〇-0 -(D-glucopyr anosyl) -20 (S) -protopanaxadiol)可以明显抑制前列腺癌细胞，但是R构型人参阜苷Rh2 ( 3-〇-β -(D-glucopyranosyl)_20(R)-protopanaxadiol)的抑制效果却很差。R构型人参阜 苷Rh2可以选择性地抑制破骨细胞的生成且没有任何细胞毒性作用，但是S构型人参皂苷 Rh2抑制破骨细胞生成的作用很弱，但是对破骨细胞却有很强的细胞毒性作用。并且S构型 和R构型人参皂苷Rh2对于P-糖蛋白的调节作用也存在很大的差异。
[0007] 糖基转移酶的功能是将糖基供体（核苷二磷酸糖，例如UDP-葡萄糖）上的糖基转 移到不同的糖基受体上。根据氨基酸序列的不同，目前糖基转移酶已有94个家族。目前已 测序的植物基因组中，发现了上百种以上不同的糖基转移酶。这些糖基转移酶的糖基受体 包括糖、脂、蛋白、核酸、抗生素和其它的小分子。在人参中参与皂苷糖基化的糖基转移酶， 其作用是把糖基供体上的糖基转移到皂苷元或者苷元的C-3、C-6或C-20的羟基上，从而形 成具有不同药用价值的皂苷。
[0008] 目前，通过对人参，花旗参和三七的转录组分析，研究人员已经发现了大量的糖基 转移酶基因，但是还不明确哪些糖基转移酶参与了人参皂苷的合成。由于人参中含有数量 众多的糖基转移酶，且它们的含量都很低，所以它们的分离纯化的研究进展缓慢。
[0009] 稀有人参皂苷是指在人参中含量极低的皂苷。人参皂苷CK(20-0-i3-(D-gluc〇py ranosyl)-20(S)-protopanaxadiol)属于原人参二醇类的阜苷，在阜苷元的C-20位轻基上 连有一个葡萄糖基。人参皂苷CK在人参中含量极低，它是原人参二醇型皂苷在人体肠道中 被微生物水解后产生的主要代谢产物。研究表明，多数原人参二醇型皂苷只有被代谢为CK 后才能被人体吸收，所以人参皂苷CK是直接被体内吸收和发挥作用的真正实体，而其他皂 苷只是药物前体。人参皂苷CK具有很好的抗肿瘤活性，可以诱导肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤 细胞转移。它与放疗和化疗结合试验，可以增强放疗和化疗的效果。除此之外，人参皂苷CK 还有具有抗过敏活性，抗炎活性，并且可以起到神经保护作用，抗糖尿病作用和抗皮肤衰老 作用。人参皂苷CK的药理活性具有多靶点、高活性和低毒性的特点。
[0010] 人参阜苷 F1 (2〇-〇- β -D-glucopyranosyl-20 (S) -protopanaxatriol)属于原人 参三醇型皂苷，它在人参中的含量也非常低，也属于稀有人参皂苷。人参皂苷F1的结构与 CK非常接近，也是在皂苷元的C-20位羟基上连有一个葡萄糖基。人参皂苷F1也具有独特 的药用价值。它具有抗衰老和抗氧化的功能。
[0011] 人参阜苷 Rhl (6-〇- β -D-glucopyranosyl-20 (S) -protopanaxatriol)属于原人 参三醇型皂苷，它在人参中的含量也非常低，也属于稀有人参皂苷。人参皂苷Rhl的结构与 F1非常接近，但是它的糖基化位点是在C6位上的羟基。人参皂苷Rhl也具有特殊的生理功 能，能够抗过敏和抗炎症。
[0012] 人参阜苷 Rh2 (3-〇_ β - (D-glucopyranosyl) -20 (S) -protopanaxadiol)在人参中 含量极低，它的含量大约只有人参干重的万分之一左右，也属于稀有人参皂苷。但是，人参 皂苷Rh2具有良好的抗肿瘤活性，是人参中最主要的抗肿瘤活性成分之一，能够抑制肿瘤 细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、抗肿瘤转移。研究表明人参阜苷Rh2能够抑制lung cancer cells3LL(mice), Morris liver cancer cells(rats), B_16melanoma cells(mice),以及 HeLa cells (human)的增值。在临床上，人参皂苷Rh2与放疗或化疗结合治疗，可以增强放疗 和化疗的效果。此外，人参皂苷Rh2还具有抗过敏，提高机体免疫力的功能，抑制N0和PGE 产生的炎症等作用。
[0013] 人参皂苷Rg3在人参中含量也很低，具有明显的抗肿瘤的作用，与人参皂苷Rh2在 抗肿瘤的功能方面有互补性，临床使用证明，Rg3与Rh2联合使用其治疗肿瘤的增效作用进 一步提商。
[0014] 由于稀有人参皂苷CK、FI、Rhl，Rh2和Rg3的含量非常低，所以目前生产的方 法是从人参中的大量皂苷出发，通过选择性水解糖基的方法进行转化后再进行提取和纯 化。以人参属植物的总皂苷或原人参二醇类皂苷为原料，转化、分离和提取20(S)_原人 参皂苷-Rh2。该制备方法的优点是利用了大量的二醇类皂苷，但是需在高温和高压下反 应（宋长春等.20 (S)-人参皂苷-Rh2的制备方法及其药物组合物及应用[P].中国专利： 1225366,1999年）。韩国人参烟草研究所公开了 2种从人参成分中制备20 (R&S)-人参皂 苷-Rh2的方法。其特征在于首先得到原人参二醇皂苷组分，再经酸水解处理得20 (R&S)-人 参皂苷_Rg3,然后将人参皂苷Rg3处理得到人参皂苷Rh2。以上这些方法主要缺陷在于产 物的起始材料需要原人参二醇类系列单体皂苷，使得反应步骤较繁琐，原料损失较大，操作 繁琐，从而导致成本增加，而且难以提高产率。由于CK和F1在C-20位的糖基容易在水解 过程中被破坏，所以化学法不适用于CK和F1的生产。而酸法和碱法水解皂苷制备Rhl的 产率很低，而且还存在很多副产物。
[0015] 由于酶转化法的条件温和，专一性强、产物易分离纯化的特点，是目前生产CK、F1 和Rhl的主要方法。用于制备人参皂苷CK，Fl、Rhl和Rh2的酶主要有柚苷酶、果胶酶、纤维 素酶及乳糖酶等。人参皂苷CK也可以通过微生物转化的方法获得，主要是利用肠道来源的 厌氧菌。虽然，生物转化法（酶法和微生物法）制备稀有人参皂苷CK、FI、Rhl和Rh2取得 了很大的进步，但是由于其原料为人参皂苷，所以制备CK、FI、Rhl和Rh2的成本仍然非常 高，并且其产量也相当有限（中国专利：CN1105781C;金东史等，大连轻工业学院学报，2001 年）。
[0016] 由于人参皂苷Rh2的重要生物活性和巨大的经济价值，几十年来人们也一直尝 试利用化学合成的方法来生产这种皂苷，其基本思路是由原人参二醇和相应糖基缩和而 成，即半合成法（日本专利：特开平8-208688, 1996年）。该方法以原人参二醇为原料半 合成20 (S)-原人参皂苷-Rh2,其合成步骤分为六步，且在糖苷化反应中使用了当量的碳 酸银作为催化剂，价格贵重使得该方法的成本较高，同时该催化剂的立体选择性不高，产 物得率低。另一种方法利用了芳香烃类的酰基或烷基取代原人参二醇C-12位羟基，再在 有机溶剂和惰性气体的保护下，加入活化了 C-1为羟基的葡萄糖基供体，在分子筛存在和 路易斯酸的催化下生发生缩合反应，生成的产物经过柱层析或重结晶纯化后出去保护基 团，得到20 (S)-人参皂苷-Rh2(惠永正等，20 (S)-人参皂苷-Rh2的制备方法，中国专利： CNl587273A，2〇〇5 年）
[0017] 目前本领域尚缺乏一种有效的生产稀有人参皂苷CK、Fl、Rhl、Rh2和Rg3的方法， 因此迫切需要开发多种特异高效的糖基转移酶。


【发明内容】

[0018] 本发明的目的就是提供一组糖基转移酶及其应用。
[0019] 在本发明的第一方面，提供了一种体外糖基化方法，包括步骤：
[0020] 在糖基转移酶存在下，将糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的以下位点 上：
[0021] C-20位、C-6位、C-3位上或C-3、C-6位的第一个糖基上；
[0022] 从而形成糖基化的四环三萜类化合物；
[0023] 其中，所述的糖基转移酶选自：
[0024] 如 SEQ ID NOs. :2、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 所示的糖基转移 酶。
[0025] 本发明第二方面，提供了一种分离的多肽，所述的多肽选自下组：
[0026] (a)具有SEQIDN0s·:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59或61中任一条所示氨 基酸序列的多肽；
[0027] (b)将SEQIDN0s·:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59或61中任一条所示氨基 酸序列的多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信号肽 序列后形成的、并具有糖基转移酶活性的衍生多肽；
[0028] (c)序列中含有（a)或（b)中所述多肽序列的衍生多肽；
[0029] (d)氨基酸序列与 SEQ ID NOs :2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一 条中所示氨基酸序列的同源性> 85%或> 90% (较佳地> 95% )，并具有糖基转移酶活性 的衍生多肽。
[0030] 在另一优选例中，所述的序列（c)为由（a)或（b)添加了标签序列、信号序列或分 泌信号序列后所形成的融合蛋白。
[0031] 在另一优选例中，所述的多肽为 SEQ IDNOs. :2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或61所示氨基酸序列的多肽。
[0032] 本发明的第三方面，提供了一种分离的多肽，所述的多肽选自下组：
[0033] (al)具有SEQ ID NOs. :22、24中任一条所示氨基酸序列的多肽；
[0034] (bl)序列中含有（al)中所述多肽序列的多肽；和/或
[0035] 所述的多肽选自下组：
[0036] (a2)具有SEQ ID NOs. :4或6中任一条所示氨基酸序列的多肽；
[0037] (b2)将SEQ ID NOs. :4或6中任一条所示氨基酸序列的多肽经过一个或多个氨基 酸残基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信号肽序列后形成的、并具有糖基转移酶活 性的衍生多肽；
[0038] (c2)序列中含有（b2)中所述多肽序列的衍生多肽；
[0039] (d2)氨基酸序列与SEQ ID NOs. :4或6中任一条中所示氨基酸序列的同源性 彡85% (较佳地彡95% )，并具有糖基转移酶活性的衍生多肽。
[0040] 在另一优选例中，所述的序列（C2)为由（a2)或（b2)添加了标签序列、信号序列 或分泌信号序列后所形成的融合蛋白。
[0041] 在本发明的第四方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸为选自下组 的序列：
[0042] (A)编码第一或第二方面所述多肽的核苷酸序列；
[0043] (B)编码如 SEQ ID NOs. :2、4、6、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 所 示多肽的核苷酸序列；
[0044] (C)如 SEQ IDNOs. :1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58或60所示的 核苷酸序列；
[0045] (D)与 SEQ IDNOs. :1、3、5、15、17、19、21、27、40、42、54、56、58或60所示序列的同 源性彡95% (较佳地彡98% )的核苷酸序列；
[0046] (E)在 SEQIDNOs. :1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58或60所示核 苷酸序列的5'端和/或3'端截短或添加1-60个（较佳地1-30,更佳地1-10个）核苷酸 所形成的核苷酸序列；
[0047] (F)与（A)-(E)任一所述的核苷酸序列互补（较佳地完全互补）的核苷酸序列。
[0048] 在另一优选例中，所述的核苷酸的序列如SEQ ID NOs. :1、3、5、15、17、19、21、23、 25、 27、40、42、54、56、58 或 60 所示。
[0049] 在另一优选例中，序列如 SEQ ID NOs. :1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、 56、58或60所示的多核苷酸编码氨基酸序列分别如SEQ ID NOs. :2、4、6、16、18、20、22、24、 26、 28、41、43、55、57、59 或 61 所示的多肽。
[0050] 在本发明的第五方面，提供了一种载体，所述的载体含有第三方面所述的多核苷 酸。较佳地，所述载体包括表达载体、穿梭载体、整合载体。
[0051] 在本发明的第六方面，提供了本发明第一或第二方面所述分离的多肽的用途，它 被用于催化以下一种或多种反应，或被用于制备催化以下一种或多种反应的催化制剂：将 来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物C-20位和/或C-6位和/或C-3位的羟基 以替换所述羟基的H，以及将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-3位或C6 位的第一个糖基上以延伸糖链。
[0052] 在另一优选例中，所述的糖基供体包括选自下组的核苷二磷酸糖：UDP_葡萄糖， ADP-葡萄糖，TDP-葡萄糖，CDP-葡萄糖，⑶P-葡萄糖，UDP-乙酰基葡萄糖，ADP-乙酰基葡 萄糖，TDP-乙酰基葡萄糖，⑶P-乙酰基葡萄糖，⑶P-乙酰基葡萄糖，UDP-木糖，ADP-木糖， TDP-木糖，CDP-木糖，⑶P-木糖，UDP-半乳糖醛酸，ADP-半乳糖醛酸，TDP-半乳糖醛酸， CDP-半乳糖醛酸，⑶P-半乳糖醛酸，Μ)Ρ-半乳糖，ADP-半乳糖，TDP-半乳糖，CDP-半乳糖， ⑶P-半乳糖，m)P-阿拉伯糖，ADP-阿拉伯糖，TDP-阿拉伯糖，CDP-阿拉伯糖，⑶P-阿拉伯 糖，m)P-鼠李糖，ADP-鼠李糖，TDP-鼠李糖，CDP-鼠李糖，GDP-鼠李糖，或其他核苷二磷酸 己糖或核苷二磷酸戊糖，或其组合。
[0053] 在另一优选例中，所述的糖基供体包括选自下组的尿苷二磷酸（UDP)糖：UDP-葡 萄糖，UDP-半乳糖醛酸，UDP-半乳糖，UDP-阿拉伯糖，UDP-鼠李糖，或其他尿苷二磷酸己糖 或尿苷二磷酸戊糖，或其组合。
[0054] 在另一优选例中，所述分离的多肽用于催化下述一种或多种反应或被用于制备催 化下述一种或多种反应的催化制剂：
[0055] (A)

【权利要求】
1. 一种体外糖基化方法，其特征在于，包括步骤： 在糖基转移酶存在下，将糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的以下位点上： C-20位、C-6位、C-3位上、或C-3、C-6位的第一个糖基上； 从而形成糖基化的四环三萜类化合物； 其中，所述的糖基转移酶选自： 如 SEQ IDNOs. :2、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 所示的糖基转移酶。
2. -种分离的多肽，其特征在于，所述的多肽选自下组： (a) 具有SEQIDN0sパ2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59或61中任一条所示氨基酸 序列的多肽； (b) 将SEQIDN0sパ2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59或61中任一条所示氨基酸序 列的多肽经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信号肽序列 后形成的、并具有糖基转移酶活性的衍生多肽； (c) 序列中含有（a)或（b)中所述多肽序列的衍生多肽； (d) 氨基酸序列与 SEQ ID N0s.:2、16、18、20、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一条中 所示氨基酸序列的同源性> 85% (较佳地> 95% )，并具有糖基转移酶活性的衍生多肽。
3. -种分离的多肽，其特征在于， 所述的多肽选自下组： (al)具有SEQ ID NOs. : 22或24中任一条所示氨基酸序列的多肽； (bl)序列中含有（al)中所述多肽序列的多肽；和/或 所述的多肽选自下组： (a2)具有SEQ ID NOs. :4或6中任一条所示氨基酸序列的多肽； (b2)将SEQ ID NOs. :4或6中任一条所示氨基酸序列的多肽经过一个或多个氨基酸残 基的取代、缺失或添加而形成的、或是添加信号肽序列后形成的、并具有糖基转移酶活性的 衍生多肽； (c2)序列中含有（b2)中所述多肽序列的衍生多肽； (d2)氨基酸序列与SEQ ID NOs. :4或6中任一条中所示氨基酸序列的同源性彡85% (较佳地> 95% )，并具有糖基转移酶活性的衍生多肽。
4. 一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸为选自下组的序列： (A) 编码权利要求2或3所述多肽的核苷酸序列； (B) 编码如 SEQ IDNOs. :2、4、6、16、18、20、22、24、26、28、41、43、55、57、59 或 61 中任一 条所示多肽的核苷酸序列； (C) 如 SEQ ID NOs. :1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58 或 60 中任一条所 示的核苷酸序列； (D) 与 SEQ ID NOs. :1、3、5、15、17、19、25、27、40、42、54、56、58 或 60 中任一条所示序列 的同源性彡95% (较佳地彡98% )的核苷酸序列； (E) 在 SEQ IDNOs. :1、3、5、15、17、19、21、23、25、27、40、42、54、56、58 或 60 中任一条所 示核苷酸序列的5'端和/或3'端截短或添加1-60个（较佳地1-30,更佳地1-10个）核 苷酸所形成的核苷酸序列； (F) 与（A)-(E)任一所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
5. -种载体，其特征在于，所述的载体含有权利要求4所述的多核苷酸。
6. 权利要求2或3所述分离的多肽的用途，其特征在于，它被用于催化以下一种或多种 反应，或被用于制备催化以下一种或多种反应的催化制剂： (i) 将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-20位的羟基； (ii) 将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-6位的羟基； (iii) 将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-3位的羟基； (iv) 将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-3位的第一个糖基上，延伸 糖链； (V)将来自糖基供体的糖基转移到四环三萜类化合物的C-6位的第一个糖基上以延伸 糖链。
7. 如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述分离的多肽用于催化下述一种或多种 反应或被用于制备催化下述一种或多种反应的催化制剂：
式⑴化合物式（II)化合物； 其中，Rl为H，单糖糖基或多糖糖基；R2和R3为H或OH ;R4为糖基；所述的多肽选自 SEQ ID NOs :2、16或18或其衍生多肽；
式（III)化合物式（IV)化合物； 其中，Rl为H或者糖基，R2为糖基，R3为糖基，所述的多肽选自SEQ IDNOs. : 2、16、18 或20 ; 或，Rl为H或者糖基；R2为H或者糖基；R3为糖基，所述的多肽选自SEQ ID NO. : 20或 其衍生多肽；
式（V)化合物式（VI)化合物； 其中，Rl为H或者OH ;R2为H或者OH ;R3为H或者糖基；R4为糖基，所述的多肽选自 SEQ IDNOs. :22、24、41或43或其衍生多肽；
式（VII)化合物式（VIII)化合物； 其中，Rl为OH或者OCH3 ;R2为糖基，所述的多肽选自SEQ IDNOs. : 22、24、41或43或 其衍生多肽；
式（IX)化合物式⑴化合物； 其中，Rl为糖基；R2和R3为OH或者H ;R4为糖基或者H ;R5为糖基，R5-R1-0为C3第 一个糖基衍生的糖基，所述的多肽选自SEQ IDNOs. :26、28、55、57、59或61或其衍生多肽；
式（XI)化合物式（XII)化合物； 所述的多肽选自SEQ ID NOs. : 22或24或其衍生多肽；
式（XIII)化合物式（XIV)化合物； 其中，Rl和R2为H或者糖基，R3和R4为糖基。所述的多肽选自SEQ ID NOs. : 55, 57， 59或61或其衍生多肽；
式（XV)化合物式（XVI)化合物； 所述的多肽选自SEQ ID NOs. : 22或24或其衍生多肽；
式（XVII)化合物式（XVIII)化合物； 所述的多肽选自SEQ ID NOs. : 22或24或其衍生多肽；
式（XIX)化合物式（XX)化合物； 所述的多肽选自SEQ ID NOs. : 22或24或41或43或其衍生多肽；
式（XXI)化合物式（XXII)化合物； 所述的多肽选自SEQ ID NOs. : 22或24或41或其衍生多肽。
8. -种进行糖基催化反应的方法，其特征在于，包括步骤：在权利要求2或3所述的多 肽或其衍生多肽存在的条件下，进行糖基催化反应。
9. 如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述糖基催化反应的底物为式（I)、（III)、 (V)、（VII)、（IX)、（XI)、（XIII)、（XV)、（XVII)、（XIX)或（XXI)化合物，且所述的产物为 (II)、（IV)、（VI)、（VIII)、⑴、（XII)、（XIV)、（XVI)、（XVIII)、（XX)或（XXII)化合物；较 佳地，所述的式（I)化合物为原人参二醇PPD(Pr 〇t〇panaxadi〇l)，并且式（II)化合物为人 参阜苷 CK (20-0- β - (D-批喃葡萄糖基）-原人参二醇）（20-0- β - (D-glucopyranosyl) -pr otopanaxadiol))； 或，所述的式⑴化合物为人参皂苷Rh2(3-〇-i3-(D-吡喃葡萄糖基）-原人参二 醇）（3-〇-0-(D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))，并且式（II)化合物为人参阜苷 F2 (3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基）-20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基）-原人参二醇）（3-0- β - (D-g lucopyranosyl)-2〇-〇-β -(D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式（I)化合物为人参皂苷Rg3,并且式（II)化合物为人参皂苷Rd ; 或，所述的式（I)化合物为原人参三醇PPT (Protopanaxatriol)，并且式（II)化合物为 人参阜苷Fl (20-0- β - (D-批喃葡萄糖基）-原人参三醇）（20-0- β - (D-glucopyranosyl) -protopanaxatriol))； 或，所述的式（I)化合物为达玛烯二醇DM(Dammarenediol II)，并且式（II)化合物为 人参阜苷 20-0- β - (D-批喃葡萄糖基）-达玛烯二醇（20-0- β - (D-glucopyranosyl) -Damm arenediol II ； 或，所述的式（III)化合物为原人参三醇PPT，并且式（IV)化合物为人参皂苷 Rhl (6-〇- β - (D-批喃葡萄糖基）-原人参三醇）（6-〇- β - (D-glucopyranosyl) -protopanax atriol))； 或，所述的式（ΠΙ)化合物为人参皂苷Fl，并且式（IV)化合物为人参皂苷 Rgl (6-0- β - (D-吡喃葡萄糖基）-20-0- β - (D-吡喃葡萄糖基）-原人参二醇）（6-〇-0-(〇_ glucopyranosyl)-2〇-〇-β - (D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式（V)化合物为原人参二醇，并且式（VI)化合物为人参皂苷 Rh2 (3-〇- β - (D-批喃葡萄糖基）-原人参二醇）（3-〇- β - (D-glucopyranosyl) -protopanax adiol))； 或，所述的式（V)化合物为CK，并且式（VI)化合物为人参皂苷F2 (3-0-β-(D-吡喃葡 萄糖基）-20-0- β - (D-批喃葡萄糖基）-原人参二醇）（3-0- β - (D-glucopyranosyl) -20-0 -β -(D-glucopyranosyl)-protopanaxadiol))； 或，所述的式（V)化合物为原人参三醇PPT，并且式（VI)化合物为人参皂苷 3-〇- β - (D-批喃葡萄糖基）-原人参三醇（3-〇- β - (D-glucopyranosyl) -protopanaxatrio I); 或，所述的式（V)化合物为人参皂苷Fl，并且式（VI)化合物为人参皂苷3-0-β-(D-吡 喃葡萄糖基）_F1 (3-〇- β - (D-glucopyranosyl) -F1); 或，所述的式（V)化合物为达玛烯二醇DM，并且式（VI)化合物为人参皂苷 3-〇-β -(D-批喃葡萄糖基）-达玛烯二醇（3-〇-β - (D-glucopyranosyl)-Dammarenediol Π ); 或，所述的式（VII)化合物为25-0H-原人参二醇（25-0H-protopanaxadiol)，并且式 (VIII)化合物为人参皂苷3-0-β-φ-吡喃葡萄糖基）-25-0H-原人参二醇（3-〇-i3-(D-gl ucopyranosyl)-25-〇H-protopanaxadiol)； 或，所述的式（VII)化合物为25-0CH3-原人参二醇（25-0CH3-protopanaxadiol)，并且 式（VIII)化合物为人参皂苷3-0-β-(D-吡喃葡萄糖基）-25-0CH3-原人参二醇（3-0-β-(D-glucopyranosyl) -25_0CH3-protopanaxadiol)； 或，所述的式（IX)化合物为人参皂苷Rh2,并且式（X)化合物为人参皂苷Rg3 ; 或，所述的式（IX)化合物为人参皂苷F2,并且式（X)化合物为人参皂苷Rd; 或，所述的式（XI)化合物为羊毛甾醇（lanosterol)，并且式（XII)化合物为 3-〇- β - (D-批喃葡萄糖基）-羊毛留醇（3-〇- β - (D-glucopyranosyl) -Ianosterol); 或，所述的式（XIII)化合物为人参皂苷Rhl，并且式（XIV)化合物为人参皂苷Rf; 或，所述的式（XV)化合物为灵芝酸C2 (Ganoderic acid C2)，并且式（XVI)化合物为 3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基）-灵芝酸C2 ; 或，所述的式（XVII)化合物为Agladupol Α，并且式（XVIII)化合物为3-0-β-(D-吡 喃葡萄糖基）-Agladupol A ; 或，所述的式（XIX)化合物为Hispidol Β，并且式（XX)化合物为3-0-β -(D-吡喃葡萄 糖基）-Hispidol B ; 或，所述的式（XXI)化合物为24 (R)-环菠萝烷-3 β，24, 25-三醇，并且式（XXII)化合 物为3-0- β - (D-吡喃葡萄糖基）-24 (R)-环菠萝烷-3 β，24, 25-三醇。
10. -种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权利要求5所述的 载体，或其基因组中整合有权利要求4所述的多核苷酸。
11. 权利要求10所述的宿主细胞的用途，其特征在于，用于制备酶催化试剂，或生产糖 基转移酶、或作为催化细胞、或产生糖基化的四环三萜类化合物。
12. -种产生转基因植物的方法，其特征在于，包括步骤：将权利要求11所述的遗传工 程化的宿主细胞再生为植物，并且所述的遗传工程化的宿主细胞为植物细胞。
【文档编号】A01H5/00GK104232723SQ201410254022
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年6月9日 优先权日:2013年6月7日
【发明者】周志华, 严兴, 王平平, 魏勇军, 魏维, 范云 申请人:中国科学院上海生命科学研究院