一种用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基及其成活方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基及其成活方法，该培养基的基本培养基为WPM，并添加有15~60g/L蔗糖、0~80mg/LGA3、0~2.0mg/LIAA、0~10mg/L2ip。本发明用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基及其成或方法，针对中国野生杜鹃杂交幼胚萌发率的特点，以大量杂交组合的杂交胚为试验材料，成功利用组培方法研究创造出适宜野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养，并建立起有效的野生杜鹃杂交胚的成活方法，提高了野生杜鹃杂交胚的萌发率，具有很好的实用性和较好的工业应用前景。
【专利说明】一种用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基及其成活方 法
【技术领域】
[0001] 本发明属于植物繁育【技术领域】，具体涉及一种用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的 培养基及其成活方法。
【背景技术】
[0002] 杜_$ (Rhododendron L.)是杜醇花科杜醇属植物的总称，是我国传统十大名花之 一，被誉为"花中西施"。杜鹃不仅有很高的观赏价值，还具有很高的药用、食用价值。全世 界约有960种杜鹃花属植物，我国野生杜鹃花资源非常丰富，约有杜鹃花542种，是世界杜 鹃花分布中心，但是大多优良野生杜鹃仍然隐匿于山间，我国的杜鹃花园艺栽培品种总数 不到300种，杂交育种研究也远远落后于其他国家。中国现有授权保护的杜鹃花园艺品种 多由芽变选种获得，仅有少数是通过杂交育种得来，利用本国资源培育新品种对于中国杜 鹃花品种开发极为重要。杜鹃远缘杂交同时存在受精前、后障碍，受精后障碍主要表现为胚 珠停止发育，种子不能发芽和后代白化苗等情况。受精后障碍的克服，可通过未成熟种子的 培养来进行胚拯救，提高种子的萌发率及成苗率。
[0003] Ureshino (URESHINO, K. , I. MIYAJIMA and M. AKABANE. Effectivenes s of three-way crossing for the breeding of yellow-flowered evergreen azalea[J]. Euphytica. 1998, 140 (2) :113 - 118.)等以Anderson为基本培养基对常绿杜鹃和日本 落叶黄花杜鹃的杂交胚进行了胚拯救。Anderson (MICHISHITA AYAN 0, KENJI URESHINO AND IKUO MIYAJIMA. Shortening the period from cr ossing to the seedling stage through ovule culture of interspecific crosses of A zalea(Rhododendron spp.) [J]. Journal of the Japanese Society for Horticultur al Science. 2001, 70(I):54-59)、 WPM(EECKHAUT TOM, ELLENl DE KE YSERjVAN HUYLENBROECK J, et al. Application of embryo rescue after i nterspecific crosses in the genus Rhododendron[J]. Plant Cell Tiss Organ Cult. 2007,89(1):29 - 35.)等培养基在杜鹃杂交胚拯救中也有所应用。 但针对杜鹃不同杂交组合，最适培养基类型的研究还鲜见报道，尤其是国内有关杜鹃杂交 胚的组培技术还未见报道。仅刘燕（刘燕，王济红，陈训等.大白杜鹃种子胚组织培养研 究[J].贵州农业科学，2010, 38 (12) :30-33.)等以1/4MS为基本培养基，对大白花杜鹃 (R. decorum)的种子胚进行了组培配方的探讨。
【发明内容】
[0004] 发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种用于野生杜 鹃杂交胚的成活培养的培养基，对杂交胚进行胚拯救，提高萌发率。本发明的另一目的是提 供一种野生杜鹃杂交胚的成活方法。
[0005] 技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
[0006] -种用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基，基本培养基为WPM，并添加有 15 ?60g/L 蔗糖、O ?80mg/L GA3、0 ?2. Omg/L ΙΑΑ、0 ?lOmg/L 2ip ;其中，GA3、IAA、2ip 三者的浓度不同时为0。
[0007] 所述的GA3浓度为50-80mg/L，所述的IAA浓度为0· 5mg/L，无添加2ip。
[0008] 所述的野生杜鹃杂交胚为映山红X云锦杜鹃的杂交胚，添加的蔗糖浓度为15g/ L〇
[0009] 所述的野生杜鹃杂交胚为马银花X云锦杜鹃杂交胚，添加的蔗糖浓度为30g/L或 60g/L。
[0010] 所述的野生杜鹃杂交胚为马银花X云锦杜鹃杂交胚，在WPM中添加有20mg/L GA 3>0. 5mg/L IAA、2mg/L 2ip〇 toon] 一种野生杜鹃杂交胚的成活方法，包括以下步骤：
[0012] 1)以南京地区的映山红、锦绣杜鹃和马银花为母本，自交的同时，与采自庐山的云 锦杜鹃和采自昆明植物园的映山红、白花杜醇、窄叶杜鹃和薄皮杜鹃进行杂交授粉；授粉3 个月后，采集的蒴果；
[0013] 2)采集的蒴果，用75 %乙醇消毒30s，无菌水冲洗3遍，再用10% NaClO消毒 15min，无菌水冲洗5遍后剥胚，对杂交幼胚进行培养；
[0014] 3)采用成活培养基对杂交幼胚进行培养，光照12h/d，光照强度16001x，温度 25±0. 5°C;培养80天后幼胚萌发；所述的成活培养基的基本培养基为WPM，添加8g/L琼脂， pH 值 5. 0,并额外添加有 15 ?60g/L 鹿糖、0 ?80mg/L GA3、0 ?2. Omg/L ΙΑΑ、0 ?10mg/L 2ip ;其中，GA3、IAA、2ip三者的浓度不同时为0。
[0015] 有益效果：与现有技术相比，本发明的用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基 及其成或方法，针对中国野生杜鹃杂交幼胚萌发率的特点，以大量杂交组合的杂交胚为试 验材料，成功利用组培方法研究创造出适宜野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养，并建立起 有效的野生杜鹃杂交胚的成活方法，提高了野生杜鹃杂交胚的萌发率，具有很好的实用性 和较好的工业应用前景。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1是不同激素浓度对杂交胚萌发影响的复合极差图。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
[0018] 以下实施例中所使用的试验材料为：2012年3月底或4月初杜鹃花期，以南京地 区栽培的的映山红（R. simsii)、锦绣杜醇（R. pulchrum)和马银花（R. ovatum)为母本，自交 的同时，与采自庐山的云锦杜胃I (R. fortunei)和采自昆明植物园的映山红（R. simsii)、白 花杜醇（R. mucronatum)、窄叶杜醇（R. araiophyllum)和薄皮杜醇（R. taronense)进行杂交 授粉。授粉3个月后，采集的蒴果为试验材料。
[0019] 实施例1
[0020] 米集蒴果，用75%乙醇消毒30s，无菌水冲洗3遍，再用10% NaClO消毒15min，无 菌水冲洗5遍后剥胚，对杂交幼胚进行培养。
[0021] 1)采用MS，1/4MS，WPM，改良的Anderson4种不同培养基对杂交幼胚进行培养， 培养基中含50mg/L GA3,30g/L蔗糖，8g/L琼脂，pH值调整为5.0,光照12h/d，光照强度 16001x，温度25±0. 5°C。培养80天后统计幼胚萌发率。结果如表1所示。
[0022] 表1不同组合杂交胚在不同基本培养基上萌发率的多重比较
【权利要求】
1?一种用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基，其特征在于：基本培养基为WPM，并 添加有 15?60g/L 蔗糖、O?80 mg/L GA3、0?2.0 mg/L IM、0?10 mg/L 2ip;其中，GA3、IAA、 2ip三者的浓度不同时为0。
2. 根据权利要求1所述的用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基，其特征在于：所 述的GA3浓度为50-80mg/L，所述的IAA浓度为0? 5mg/L,无添加2ip。
3. 根据权利要求1或2所述的用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基，其特征在于： 所述的野生杜鹃杂交胚为映山红X云锦杜鹃的杂交胚，添加的蔗糖浓度为15 g/L。
4. 根据权利要求1或2所述的用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基，其特征在于： 所述的野生杜鹃杂交胚为马银花X云锦杜鹃杂交胚，添加的蔗糖浓度为30g/L或60g/L。
5. 根据权利要求1所述的用于野生杜鹃杂交胚的成活培养的培养基，其特征在于：所 述的野生杜鹃杂交胚为马银花X云锦杜鹃杂交胚，在WPM中添加有20tng/L GA3、0.5mg/L IAA 、2mg/L 2ip。 6?-种野生杜鹃杂交胚的成活方法，其特征在于，包括以下步骤： 1) 以南京地区的映山红、锦绣杜鹃和马银花为母本，自交的同时，与采自庐山的云锦杜 鹃和采自昆明植物园的映山红、白花杜鹃、窄叶杜鹃和薄皮杜鹃进行杂交授粉；授粉3个月 后，采集的蒴果； 2) 采集的蒴果，用75%乙醇消毒30s,无菌水冲洗3遍，再用10%NaC10消毒15min,无菌 水冲洗5遍后剥胚，对杂交幼胚进行培养； 3) 采用成活培养基对杂交幼胚进行培养，光照12h/d，光照强度16001x，温度25 ±〇.5°C ;培养80天后幼胚萌发；所述的成活培养基的基本培养基为WPM,添加Sg/L琼脂， pH值 5.0,并额外添加有 15~60g/L蔗糖、0~80 mg/L GA3、0?2.0 mg/L IM、(Tl〇 mg/L 2ip; 其中，GA3、IAA、2ip三者的浓度不同时为〇。
【文档编号】A01H4/00GK104221858SQ201410439111
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年8月29日 优先权日:2014年8月29日
【发明者】耿兴敏, 吴影倩, 王良桂, 徐雁南 申请人:南京林业大学