一种含蜡样芽孢杆菌的微生物有机肥料的制作方法
【专利摘要】本发明具体涉及一种含蜡样芽胞杆菌的微生物有机肥料，包含蜡样芽孢杆菌菌液1％～5％、烟渣35％～40％、泥碳35％～45％、油枯8％～10％、花渣9％～12％，将以上原料经混合均匀后，加入总体积10％的水，堆捂发酵。每隔5天进行一次翻堆，发酵40天后，制得该生物有机肥料，该菌肥有效活性菌(蜡样芽孢杆菌)≥0.5亿/g(cfu)。将该生物有机肥作为底肥施用，同时将蜡样芽孢杆菌发酵菌液按照5000倍稀释，移栽后浇灌烟株根部或者喷施于页面，能够有效防控烟草黑胫病，减少化学药剂使用造成的环境污染。
【专利说明】一种含蜡样芽孢杆菌的微生物有机肥料
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物农药【技术领域】，涉及一种含蜡样芽孢杆菌的生物有机肥料，具体 地说就是将蜡样芽孢杆菌生产的微生物菌肥结合该菌发酵液共同联合抑制烟草黑胫病的 发生。
【背景技术】
[0002] 烟草黑胚病（Phytophthora parasitica var. nicotiane)是烟草的毁灭性病害， 同时也是世界烟草生产中危害最严重的病害之一，该病在我国各产烟省均有不同程度的发 生，且危害较为普遍和严重。近年来由于连作烟田面积扩大以及连作年限的增长，不少地方 烟草黑胫病有加重流行的趋势。多年来人们为了减轻该病造成的损失，曾试用农业防治、化 学防治、抗病育种等多种方法控制烟草黑胫病，但由于该病菌的游动孢子形成速度快且数 量大，侵染烟株后潜育期短、发病快，在一个生长季节可以发生多次再侵染，同时该病有时 还与其它病害混合发生，从而导致一些抗黑胫病品种抗性的丧失；而且，抗病品种的大面积 连年连片单一种植，布局不合理，易使优良品种的抗性丧失，缩短抗病品种的使用年限，而 且一旦病害流行则难以控制。目前，生产上用来防治烟草黑胫病的化学药剂多为苯基酰胺 类及乙磷铝等同一种或作用机制相同的几种内吸性杀菌剂，很容易产生耐药性，从而引起 药效下降，药剂用量增加。烟草是叶用经济作物，对烟叶的外观和内在质量有特殊的要求， 农药残留、病原菌耐药性以及对卷烟卫生的影响大大限制了农药的大规模利用。在烟草及 烟草制品逐渐向无公害方向发展的趋势下，生物防治作为一种安全、有效的方法而越来越 受到重视。
[0003] 烟草黑胚病菌的拮抗细菌有假单胞杆菌（Pseudomonas spp.)和芽孢杆菌 (Ba-cillus spp.)，它主要通过产生抗菌素而使烟草黑胫病菌菌丝溶解；通过在田间土壤 中加入拮抗细菌发现能显著降低烟草黑胫病菌的侵染机会，从而减少发病率。目前采用的 主要方法就是将拮抗菌制成浓缩液体制剂、纯孢子粉剂或者复合固体粉剂，然后在烟苗移 栽前施用。这些方法较为单一，由于生防菌株受到复杂土壤生态因子的影响，生防菌剂防 效的稳定性得不到保证，防效不明显。而本项专利所采用的是"联合用药"的方法，先通过 底肥施用，后在通过多次喷施使生防菌能够在土壤中定植并最终形成优势菌群，从而对烟 草黑胫病起到较好的防效。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为了解决现有采用单一拮抗菌剂（液）防治烟草黑胫病技术的不 足。旨在提供一种含蜡样芽孢杆菌的生物有机肥料，将该抗菌肥与拮抗菌剂联合防控病害 的新技术，通过联合作用能够提高拮抗菌在土壤中的定植能力，有效提高其对该病害的抗 性。对改善烟田微环境，促进生物防治技术的发展具有重要意义。
[0005] 本发明通过以下技术方案实现：
[0006] -种含蜡样芽孢杆菌的生物有机肥料，以质量百分比计，包含蜡样芽孢杆菌菌液 1 %?5%、烟渣35%?40%、泥碳35%?45%、油枯8%?10%、花渣9%?12%，优选为 蜡样芽孢杆菌菌液1 %、烟渣40%、泥碳40%、油枯10%、花渣9%。
[0007] 所述的蜡样芽孢杆菌采用液体培养基进行发酵培养，该培养基成分为：葡萄糖 2. Og/L ?2. 8g/L、麦芽提取物 2. Og/L ?2. 5g/L、蛋白胨 1. Og/L ?1. 2g/L、NaCll. Omg/L ? 1. 5mg/L、（NH4)2S041. Omg/L ?1. 5mg/L、无水 CaCl20. lmg/L ?0· 5mg/L、ZnS04 · 7Η200· lmg/ L ?0· 5mg/L、FeCl3 · 6Η200· Olmg/L ?0· 05mg/L、ρΗ6· 5 ?7. 2。优选的，培养基成分为： 葡萄糖 2. 0g/L、麦芽提取物 2. 0g/L、蛋白胨 1. 0g/L、NaCll. 2mg/L、（NH4)2S041. 5mg/L、无水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· 3mg/L、FeCl3 · 6Η200· 02mg/L、ρΗ6· 8、H201000ml。
[0008] 所述的液体培养基通过以下方法制备：分别称取上述组分并溶于1L蒸馏水中， 待溶解后用pH计调节pH至6. 8,将上述溶液装于三角瓶中放在灭菌锅中于121°C灭菌20 分钟，待培养基冷却后用接种环沾取lml蜡样芽孢杆菌转接到该培养基中，于37°C摇床 lOOrprn振荡培养48hr。
[0009] 所述的葡萄糖还可以为蔗糖；
[0010] 所述的蛋白胨还可以为玉米浆或者胰蛋白胨替代。
[0011] 所述的蜡样芽孢杆菌在LB固体培养基上菌落突起，边缘光滑细腻，呈乳白色，直 径 1. 1mm ?1. 8mm η
[0012] 所述的微生物有机肥料通过以下方法制备：将蜡样芽孢杆菌菌液分别与泥碳、油 枯、花渣以及碳氨水均匀混合，加入总体积10%的水后进行堆捂，每隔5天进行一次翻堆， 发酵40天后，制得该生物有机肥料。
[0013] 所述的微生物有机肥料用于联合抑制烟草黑胫病的用途，其使用方法为：首先将 该生物有机肥作为底肥施用，每塘施用80g?100g，每亩施用90kg?110kg。同时将錯样芽 孢杆菌发酵菌液按照4000?5500倍稀释，移栽后浇灌烟株根部，每亩用量为9kg?12kg。 在烟株生长幼苗期，比较稀疏时采用浇灌，待烟株生长后期，烟叶茂密时采用喷灌。使用喷 灌系统喷施在烟株叶面上，叶部以及根部每次喷施均要浸透，每15天喷施1次，每个月喷施 2次。
[0014] 本发明的有益效果：本发明微生物有机肥料对于烟草的促生长作用有着积极的意 义，同时结合该生物菌的菌液联合施用可有效防止烟草黑胫病，达到不施用化学农药且能 有效抑制烟草黑胫病的发生或者降低危害程度，本项技术符合当前农业生产向绿色、环保 和可持续发展转变的要求，并且对提高烟草及烟草制品的安全性、减少吸烟对健康带来的 危害方面也具有重要的意义。
【具体实施方式】
[0015] 下面结合实施例对本发明做进一步的说明，以下所述，仅是对本发明的较佳实施 例而已，并非对本发明做其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示 的技术内容加以变更或改型为同等变化的等效实施例。凡是未脱离本发明方案内容，依据 本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化与改型，均落在本发明的 保护范围内。
[0016] 实施例1
[0017] 一种含蜡样芽孢杆菌的生物有机肥料，由蜡样芽孢杆菌菌液1kg、烟渣35kg、泥碳 45kg、油枯8kg、花渔9kg组成。
[0018] 该生物有机肥料通过以下方法制备：
[0019] 1)分别称取葡萄糖2.0g/L、麦芽提取物2.0g/L、蛋白胨1.2g/L、NaC11.0mg/L、 (NH4) 2S041. 5mg/L、无水 CaCl20. 3mg/L、ZnS04 · 7Η200· 5mg/L、FeCl3 · 6Η200· 01mg/L、pH6. 9 ;
[0020] 2)将上述组分并溶于1L蒸馏水中，待溶解后用pH计调节pH至6. 8 ;
[0021] 3)将上述溶液装于三角瓶中放在灭菌锅中于121°C灭菌20分钟，待培养基冷却后 用接种环沾取lml蜡样芽孢杆菌转接到该培养基中，于37°C摇床lOOrpm振荡培养48hr。
[0022] 4)将制备的蜡样芽孢杆菌菌液分别与泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均匀混合，加入 总体积10%的水后进行堆捂，每隔5天进行一次翻堆，发酵40天后，制得该生物有机肥料， 该菌肥有效活性菌（蜡样芽孢杆菌）>〇. 5亿/g(cfu)。
[0023] 实施例2
[0024] -种含蜡样芽孢杆菌的生物有机肥料，由蜡样芽孢杆菌菌液4kg、烟渣39kg、泥碳 35kg、油枯10kg、花渔12kg组成。
[0025] 该生物有机肥料通过以下方法制备：
[0026] 1)分别称取葡萄糖2. 3g/L、麦芽提取物2. 4g/L、蛋白胨1. Og/L、NaCll. 3mg/L、 (NH4)2S041. 5mg/L、无水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· lmg/L、FeCl3 · 6Η200· 03mg/L、ρΗ7· 0、 H201000ml ；
[0027] 2)将上述组分并溶于1L蒸馏水中，待溶解后用pH计调节pH至6. 8 ;
[0028] 3)将上述溶液装于三角瓶中放在灭菌锅中于121°C灭菌20分钟，待培养基冷却后 用接种环沾取lml蜡样芽孢杆菌转接到该培养基中，于37°C摇床lOOrpm振荡培养48hr。
[0029] 4)将制备的蜡样芽孢杆菌菌液分别与泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均匀混合，加入 总体积10%的水后进行堆捂，每隔5天进行一次翻堆，发酵40天后，制得该生物有机肥料， 该菌肥有效活性菌（蜡样芽孢杆菌）>〇. 5亿/g(cfu)。
[0030] 实施例3
[0031] 一种含蜡样芽孢杆菌的生物有机肥料，由蜡样芽孢杆菌菌液1kg、烟渣40kg、泥碳 40kg、油枯10kg、花渔9kg组成。
[0032] 该生物有机肥料通过以下方法制备：
[0033] 1)分别称取葡萄糖2. 0g/L、麦芽提取物2. 0g/L、蛋白胨1. 0g/L、NaCll. 2mg/L、 (NH4)2S041. 5mg/L、无水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· 3mg/L、FeCl3 · 6Η200· 02mg/L、ρΗ6· 8、 H201000ml ；
[0034] 2)将上述组分并溶于1L蒸馏水中，待溶解后用pH计调节pH至6. 8 ;
[0035] 3)将上述溶液装于三角瓶中放在灭菌锅中于121°C灭菌20分钟，待培养基冷却后 用接种环沾取lml蜡样芽孢杆菌转接到该培养基中，于37°C摇床lOOrpm振荡培养48hr。
[0036] 4)将制备的蜡样芽孢杆菌菌液分别与泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均匀混合，加入 总体积10%的水后进行堆捂，每隔5天进行一次翻堆，发酵40天后，制得该生物有机肥料， 该菌肥有效活性菌（蜡样芽孢杆菌）>〇. 5亿/g(cfu)。
[0037] 实施例4微生物有机肥进行检测和鉴定
[0038] 按照实施例3配方制备生物肥，在同等条件下将含蜡样芽孢杆菌生物肥于传统型 的有机肥进行检测，对比两种肥料各组分的含量以及活性。
[0039] 表1含蜡样芽孢杆菌生物肥和传统有机肥检测数据
[0040]
【权利要求】
1. 一种含蜡样芽孢杆菌的微生物有机肥料，其特征在于：以质量百分比计，包含蜡样 芽孢杆菌菌液1 %?5%、烟渣35%?40%、泥碳35%?45%、油枯8%?10%、花渣9%? 12%。
2. 根据权利要求1所述的一种含蜡样芽胞杆菌的微生物有机肥料，其特征在于：以质 量百分比计，包含蜡样芽孢杆菌菌液1 %、烟渣40 %、泥碳40 %、油枯10 %、花渣9 %。
3. 根据权利要求1所述的一种含蜡样芽胞杆菌的微生物有机肥料，其特征在于：所 述的蜡样芽孢杆菌采用液体培养基进行发酵培养，该培养基成分如下：葡萄糖2. Og/L? 2. 8g/L、麦芽提取物 2. Og/L ?2. 5g/L、蛋白胨 1. Og/L ?1. 2g/L、NaCll. Omg/L ?1. 5mg/L、 (NH4)2S041. Omg/L ?1. 5mg/L、无水 CaCl20. lmg/L ?0· 5mg/L、ZnS04 ·7Η200· lmg/L ?0· 5mg/ L、FeCl3 · 6Η200· Olmg/L ?0· 05mg/L、ρΗ6· 5 ?7· 2。
4. 根据权利要求3所述的一种含蜡样芽胞杆菌的微生物有机肥料，其特征在于： 所述的培养基包含葡萄糖2.(^/1、麦芽提取物2.(^/1、蛋白胨1.(^/1、似(：11.21^/1、 (NH4) 2S041. 5mg/L、无水 CaCl20. 2mg/L、ZnS04 · 7Η200· 3mg/L、FeCl3 · 6Η200· 02mg/L、ρΗ6· 8、 H201000ml。
5. 根据权利要求1所述的一种含錯样芽胞杆菌的微生物有机肥料，其特征在于：该微 生物有机肥通过以下方法制备：将蜡样芽孢杆菌菌液分别与泥碳、油枯、花渣以及碳氨水均 匀混合，加入总体积10%的水后进行堆捂，每隔5天进行一次翻堆，发酵40天后，制得该生 物有机肥料。
6. 根据权利要求1或2所述的一种含蜡样芽胞杆菌的微生物有机肥料，其特征在于： 所述的微生物有机肥料用于联合抑制烟草黑胫病的用途。
【文档编号】C05G3/00GK104230563SQ201410460497
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月11日 优先权日:2014年9月11日
【发明者】徐洁, 王绍坤, 周晓罡, 王耀进, 王超, 杨应明, 罗华元, 朱海滨, 姚春馨, 丁玉梅, 陶南, 戴毕 申请人:红云红河烟草(集团)有限责任公司, 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所, 云南千州生物有机肥有限公司