一种脐带保存液的制作方法

本发明涉及生物医药
技术领域：
，尤其涉及一种脐带保存液。
背景技术：
：组织在采集过程中需要保存在无菌的环境中，并且使用的培养液能够充足的保证组织在运输过程中能够获取充足的营养，在到达实验室后其样本组织的活性保持刚采集的状态，运输液的配制极大影响着组织在无菌实验室分离、培养后其获得原代细胞的爬出率以及活性和纯度。目前使用的最多的组织保存液为250ml的采集瓶中加入50ml的生理盐水，采集组织直接放入运输瓶中运送到实验室进行处理，但组织在生理盐水中浸泡超过2h后，到达实验室进行分离培养，其原代细胞的爬出率仅为30％左右，在第一代细胞传代后活性仅保持在90％左右，细胞数约为1×106，不利于接下来细胞冻存后的复苏使用。技术实现要素：基于
背景技术：
存在的技术问题，本发明提出了一种脐带保存液，可以保存脐带内间充质干细胞的活性，使脐带在2～10℃时能有效保存至少72小时，大大减少了脐带从采集到制备的时间限制，并能有效降低脐带被污染的概率。本发明提出的一种脐带保存液，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基74.7～77.6％，葡萄糖5.2～6.1％，人血清白蛋白1.8～2.3％，氯化钾0.6～1.1％，维生素E0.4～1.2％，谷氨酰胺2.4～3.3％，抗生素12～16％。具体实施方式中，DMEM培养基的体积百分比可以为74.7％、74.8％、74.9％、75.0％、75.1％、75.2％、75.3％、75.4％、75.5％、75.6％、75.7％、75.8％、75.9％、 76.0％、76.0％、76.1％、76.2％、76.3％、76.4％、76.5％、76.6％、76.7％、76.8％、76.9％、77.0％、77.1％、77.2％、77.3％、77.4％、77.5％、77.6％，葡萄糖的体积百分比可以为5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％，人血清白蛋白的体积百分比可以为1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％，氯化钾的体积百分比可以为0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％，维生素E的体积百分比可以为0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％，谷氨酰胺的体积百分比可以为2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％，抗生素的体积百分比可以为12％、12.5％、13％、13.5％、14％、14.5％、15％、15.5％、16％。优选地，抗生素为两性霉素B、庆大霉素、青霉素、链霉素中的一种或两种以上组合物。优选地，抗生素按体积份数包括：两性霉素B4.5～5.5份，庆大霉素4.5～5.5份，青霉素1.5～2.5份，链霉素1.5～2.5份。优选地，抗生素中，两性霉素B、庆大霉素、青霉素、链霉素的体积比为4.8～5.2：4.8～5.2：1.8～2.2：1.8～2.2。优选地，葡萄糖、人血清白蛋白、氯化钾、维生素E、谷氨酰胺的体积比为5.4～5.8：2.0～2.2：0.6～0.8：0.6～0.8：2.4～2.6。优选地，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基75％，葡萄糖5.6％，人血清白蛋白2％，氯化钾0.6％，维生素E0.6％，谷氨酰胺2.4％，两性霉素B4.8％，庆大霉素5％，青霉素2％，链霉素2％。本发明用于短期保存采集后到分离前的脐带，DMEM培养基、葡萄糖、人血清白蛋白、氯化钾、维生素E和谷氨酰胺相互配合，维持脐带组织内细胞的渗透平衡、保持脐带的湿润状态和短时间提供营养成分，而抗生素可以对可能 发生的污染进行预防或者提示已经发生的污染。本发明可以保存脐带内间充质干细胞的活性，使脐带在2～10℃时能有效保存至少72小时，分离出的间充质干细胞活性受时间的影响很小，大大减少了脐带从采集到制备的时间限制，所用的所有成分均符合临床使用标准，并能有效降低脐带被污染的概率。附图说明图1为采用本发明实施例5所得脐带保存液和空白对照对比培养脐带72h，其各自细胞生长状态的对比图。图2为采用本发明实施例5所得脐带保存液和空白对照对比培养脐带72h，其各自细胞活率的对比图。图3为采用本发明实施例5所得脐带保存液和空白对照对比培养脐带72h，其各自细胞总数的对比图。具体实施方式下面，通过具体实施例对本发明的技术方案进行详细说明。实施例1本发明提出的一种脐带保存液，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基74.7％，葡萄糖5.2％，人血清白蛋白2.3％，氯化钾0.6％，维生素E1.2％，谷氨酰胺2.4％，抗生素13.6％。实施例2本发明提出的一种脐带保存液，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基75.3％，葡萄糖6.1％，人血清白蛋白1.8％，氯化钾1.1％，维生素E0.4％，谷氨酰胺3.3％，抗生素12％。抗生素按体积份数包括：两性霉素B5份，庆大霉素4份，青霉素1.5份，链霉素1.5份。实施例3本发明提出的一种脐带保存液，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基74.6％，葡萄糖5.4％，人血清白蛋白2.2％，氯化钾0.6％，维生素E0.8％，谷氨酰胺2.4％，抗生素14％。抗生素按体积份数包括：两性霉素B4.8份，庆大霉素5.2份，青霉素1.8份，链霉素2.2份。实施例4本发明提出的一种脐带保存液，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基75.2％，葡萄糖5.8％，人血清白蛋白2.0％，氯化钾0.8％，维生素E0.6％，谷氨酰胺2.6％，抗生素13％。抗生素按体积份数包括：两性霉素B5.2份，庆大霉素4.8份，青霉素2.2份，链霉素1.8份。实施例5本发明提出的一种脐带保存液，其原料按体积百分比包括：DMEM培养基75％，葡萄糖5.6％，人血清白蛋白2％，氯化钾0.6％，维生素E0.6％，谷氨酰胺2.4％，两性霉素B4.8％，庆大霉素5％，青霉素2％，链霉素2％。将本发明实施例5所得脐带保存液与空白对照进行对比培养脐带72h，每2h取样进行细胞活率和细胞总数检测，其结果如图1-3所示。由图1、图2和图3可知：本发明可以保存脐带内间充质干细胞的活性，使脐带在2～10℃时能有效保存至少72小时，分离出的间充质干细胞活性受时间的影响很小，大大减少了脐带从采集到制备的时间限制。将本发明实施例5所得脐带保存液与空白对照进行对比培养脐带，取样时间为7～14天，其中“+”为阳性；“－”为阴性；其结果如下：菌种名称本发明实施例5空白对照大肠杆菌－+金黄色葡萄杆菌－－铜绿假单胞菌－－枯草芽孢杆菌－－生胞梭菌－－白色念珠菌－－黑曲霉菌－+由上表可知：本发明能有效降低脐带被污染的概率。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本
技术领域：
的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。当前第1页1 2 3