螺三倍体纯系高效育成方法与流程

文档序号:13108747
技术领域本发明涉及螺的多倍体繁育方法,具体涉及螺三倍体纯系高效育成方法。

背景技术:
螺的分布、种类多,是指腹足类(gastropod)动物,特别是指有一个封闭的壳,可以完全缩入其中以得保护的腹足类动物,常见的有环棱螺、田螺等等,螺的繁育方式一般为卵胎生。因螺三倍体的不育特征,使其在生长速度、抗病性、肉质等方面表现出更为显著的优势。现有技术中,要获得三倍体不育螺,最快捷有效的方法是通过四倍体螺与二倍体螺倍间杂交获得,那么就需要建立遗传稳定、纯度极高的四倍体螺纯系。但在螺的遗传育种中,到目前为止还未见四倍体全雄螺育成的报道,更未见用全雄四倍体与二倍体母本回交的先例。

技术实现要素:
针对上述现有技术存在的不足,本发明的目的是提供一种方法稳定、种群纯度高达100%的螺三倍体纯系高效育成方法。为达到上述目的,本发明的技术方案如下:螺三倍体纯系高效育成方法,包括如下步骤:(1)他莫昔芬喂养料的配备:取纯度为90-95%以上的他莫昔芬粉剂,加入到螺人工饲养饲料中,制成喂养料,其中他莫昔芬含量为10~15g\/500g喂养料,待用;(2)投喂:在母螺产卵前5~10天,按常规饲料投喂方法对母螺进行投喂他莫昔芬喂养料,每天两次,早上8:00每100g母螺投喂5~10g,下午6:00每100g母螺投喂10~15g;至其卵发育成熟,然后,取公螺放在一起,使其自然产卵受精,得受精怀卵母螺;(3)静空压处理:在一次卵裂时,采用静空压的方法,把步骤(2)中的受精怀卵母螺放入温度为室内常温的静空压箱中,静空压压力为250~340Kg\/cm2,持续时间为3~5min;(4)雌激素抑制剂溶液的配制:将氯米芬和睾酮一起溶于80%~90%的乙醇中,再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液,其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为100~200mg\/l,睾酮的浓度为10~50mg\/l;(5)取步骤(3)处理后的怀卵母螺,放入用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液中,常温泡浴60~120S,怀卵母螺与溶液比为1:2,通过充氧,使溶液中的氧气含量达5~10mg\/l;(6)取步骤(5)处理后的怀卵母螺,放入育苗池中进行常规育苗培育;直至产出幼螺,从而获得螺的雄性四倍体纯系;(7)取步骤(6)的雄性四倍体作为父本,取普通二倍体作为母本,采用回交的方式,获得100%三倍体。本发明的优点:1、本发明中对母本进行添加他莫昔芬饲料投喂,起到抑制DNA分裂和促雄性的双重作用的同时,将受精卵第一次卵裂的时间推迟了3~5min,并提高所有受精卵第一次卵裂的同步程度(可达99%),为操作下一步提供时间保障和奠定染色体加倍基础;2、在受精卵第一次卵裂采用较低的静空压压力(低于常用350kg\/cm2)和较短的处理时间(低于5min),不仅有效减少对受精卵的不良影响,提高受精卵的成活率;而且进一步加强了四倍体的形成机率;3、雌激素抑制剂溶液浸泡,再一次强化与保证其雄性的转化率;4、用纯系的雄性四倍体与原有的雌性二倍体回交,有效保证了三倍体的纯度。因而通过此方法,可获得100%的三倍体纯系,提高了三倍体的育成率与出苗率,减少了育种与选种的麻烦,更主要是对自然水产品种种质和生态环境无污染。具体实施方式现结合具体实施例,对本发明作进一步描述。实施例一螺雄性四倍体纯系高效育成方法,包括如下步骤:(1)他莫昔芬喂养料的配备:取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂,加入到螺人工饲养饲料中,制成喂养料,其中他莫昔芬含量为10g\/500g喂养料,待用;(2)投喂:在母螺产卵前5天,按常规饲料投喂方法对母螺进行投喂他莫昔芬喂养料,每天两次,早上8:00每100g母螺投喂10g,下午6:00每100g母螺投喂15g;至其卵发育成熟,然后,取公螺放在一起,使其自然产卵受精,得受精怀卵母螺;(3)静空压处理:在一次卵裂时,采用静空压的方法,把步骤(2)中的受精怀卵母螺放入温度为室内常温的静空压箱中,静空压压力为340Kg\/cm2,持续时间为3min;(4)雌激素抑制剂配制:将氯米芬和睾酮一起溶于80%的乙醇中,再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液,其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为200mg\/l,睾酮的浓度为50mg\/l;(5)取步骤(3)处理后的怀卵母螺,放入用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液中,常温泡浴120S,怀卵母螺与溶液比为1:2,通过充氧,使溶液中的氧气含量达5mg\/l;(6)取步骤(5)处理后的怀卵母螺,放入育苗池中进行常规育苗培育;直至产出幼螺,从而获得螺的雄性四倍体纯系。(7)取步骤(6)的雄性四倍体作为父本,取普通二倍体作为母本,采用回交的方式,获得100%三倍体。实施例二螺雄性四倍体纯系高效育成方法,包括如下步骤:(1)他莫昔芬喂养料的配备:取纯度为95%以上的他莫昔芬粉剂,加入到螺人工饲养饲料中,制成喂养料,其中他莫昔芬含量为15g\/500g喂养料,待用;(2)投喂:在母螺产卵前10天,按常规饲料投喂方法对母螺进行投喂他莫昔芬喂养料,每天两次,早上8:00每100g母螺投喂5~10g,下午6:00每100g母螺投喂10g;至其卵发育成熟,然后,取公螺放在一起,使其自然产卵受精,得受精怀卵母螺;(3)静空压处理:在一次卵裂时,采用静空压的方法,把步骤(2)中的受精怀卵母螺放入温度为室内常温的静空压箱中,静空压压力为250Kg\/cm2,持续时间为5min;(4)雌激素抑制剂溶液的配制:将氯米芬和睾酮一起溶于90%的乙醇中,再加蒸馏水配制成雌激素抑制剂溶液,其中雌激素抑制剂溶液中氯米芬的浓度为180mg\/l,睾酮的浓度为30mg\/l;(5)取步骤(3)处理后的怀卵母螺,放入用步骤(4)所制备的雌激素抑制剂溶液中,常温泡浴60S,怀卵母螺与溶液比为1:2,通过充氧,使溶液中的氧气含量达10mg\/l;(6)取步骤(5)处理后的怀卵母螺,放入育苗池中进行常规育苗培育;直至产出幼螺,从而获得螺的雄性四倍体纯系。(7)取步骤(6)的雄性四倍体作为父本,取普通二倍体作为母本,采用回交的方式,获得100%三倍体。上述两个实施例仅为本发明的优选方案之二,并不能限制本发明的保护范围,任意与本发明等同或相似的技术手段视为本发明的保护范围。以下附上本发明部分处理方式及结果统计。附:螺三倍体育成结果统计注:上述结果是母螺产卵前10天投喂他莫昔芬,冷休克静空压保持5min、雌激素抑制剂溶液浸泡60s所取得的结果。...
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