室内快速鉴定苗期向日葵黄萎病抗性的方法与流程

文档序号:11780649阅读:726来源:国知局

该发明涉及作物遗传育种和植物病理学领域,是一种室内快速鉴定苗期向日葵黄萎病抗性的方法。



背景技术:

向日葵是一种重要的油料作物,同时它也是一种观赏植物,并且向日葵油是一种潜在的生物能源,而向日葵黄萎病是影响向日葵产量、品质的世界性病害之一。因其土传病害的特点致使目前没有有效的防治措施,选育抗性品种是有效、环保、经济并且公认的方法。目前我国向日葵的黄萎病的鉴定方法大多数采用大田人工接菌、自然发病进行鉴定,鉴定时间长(100天左右)且受环境影响大。室内快速、准确鉴定向日葵资源材料的黄萎病抗性是抗病育种的关键。



技术实现要素:

本发明的目的:提供一种室内快速、准确鉴定苗期向日葵黄萎病抗性的方法。

本发明的技术方案:向日葵黄萎病是一种土传真菌病害,在大田其发病一般起始于向日葵现蕾期,大面积发病时间随着地块土壤菌量、空气湿度、温度等环境因素变化,一般其出现在盛花期和成熟期之间。所以要准确鉴定向日葵黄萎病抗性,接菌量、接菌时间、环境因素(温度、湿度、光照)是鉴定的关键因子。

实验步骤如下:

1 菌培养PDA(马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉13-15g、蒸馏水定容至1000mL),高温高压灭菌(压力升至103.4kPa(1.05kg/cm2),温度达121.3℃),维持20分钟,分装到灭菌的培养皿中,并对选定的向日葵黄萎病菌进行初始培养。待菌斑长至3-5cm时,将其分成4-6块,分别接菌在养菌钵(麦麸∶水=5∶2体积比混匀分装在200-300ml的有盖塑料钵中灭菌)中,10-14天黄萎病菌可长 满整个养菌钵。

2 制作接菌钵 将四层报纸制作成15×20cm大小的长方形,后沿20cm边对折,并将对折的边用订书机订好,得到一个高15cm的圆柱桶做为接菌钵。再准备一个长方形的塑料培养盒(20cm×30cm),将培养盒底平铺4层报纸,并将装满灭菌营养土的接菌钵摆放在培养盒中,每盒放6-8个接菌钵可保证调查苗量。

3 播种 将挑选好的饱满度、大小一致的向日葵种子用70%的酒精浸泡5分钟,再用0.1%升汞深度灭菌8-10分钟,后用无菌水冲洗三次。将无菌的向日葵种子播种在接菌钵中,播种深度2-3cm,每钵播种10-12粒,在营养盒中注入烧开后冷却的自来水(每钵50-100ml),后将其培养在28/25℃(昼/夜)、光照16小时黑暗8小时的光照培养箱中,每天定时浇水1-2次,保持接菌钵表面土壤湿润为宜,一个星期后可出苗,出苗后保留每钵5-6株整齐一致的向日葵幼苗待用。

4 接菌 待向日葵幼苗长至2片真叶平展时,接种向日葵黄萎病菌孢子悬浮液(孢子含量2×106个/ml)50ml。接菌时期是影响室内鉴定苗期向日葵黄萎病抗性准确性的关键因素之一,接菌太早,因向日葵幼苗根不够长而致使接菌不均匀;接菌太晚会导致向日葵在培养箱中培养时间太长,因其不适应室内条件而徒长。向日葵幼苗长至2片真叶平展时(约2个星期)为适宜时期。接菌量也是室内鉴定的关键因素之一,向日葵黄萎病菌液孢子含量一般选择2×106-10×106个/ml,但是优选浓度为2×106个/ml孢子悬浮液50ml为宜,该浓度和接菌量可促使向日葵黄萎病菌孢子均匀分布在整个接菌钵内。

5 统计分析 接菌2周后,向日葵开始发病,一般第3周是向日葵黄萎病发病盛期,调查供试品种总叶片数和发病叶片数,病叶变色的程度、叶片是否有脱落、卷枯等,并用改进的5级分级标准(表1)进行分级统计,计算调查品种的病情指数。最后将每一处理的三次重复数据进行平均。不同向日葵品种的抗性级 别划分标准见表2。

表1 向日葵黄萎病病情指数划分标准

表2 向日葵品种对黄萎病抗性水平的划分标准

6 特点

(1)向日葵幼苗苗龄一致 作为接菌对象的向日葵幼苗的整个生长过程全部在光照培养箱中完成。且采用相对较小无底纸钵培养向日葵幼苗,这样保证了用于实验的向日葵种子在播种后生长条件相同一致,保证可向日葵幼苗在同一天破土,生长整齐一致,为了排除试验材料本生影响,对每钵实验材料进行人工筛选,综上所述,在该方法下鉴定的同一向日葵品种的所有幼苗的妙龄是一样的。

(2)感菌均匀 采用无底营养土纸钵接菌,蘸菌法保证了根部完全均匀的接触到菌液,50ml的接菌量使得每个幼苗充分且均匀接触到病原菌,2×106个/ml 浓度的菌液是参考前人的工作和我们多年实验得出的实验值,以上条件下促使该方法下每个向日葵幼苗均匀感菌。

(3)统计科学 很多病情指数的划分是以统计病株数和总株数为计算基础数据,而我们采用统计表现出黄萎病的病叶和总叶数为统计基础数据,这样的统计更加准确、科学,可操作性更强,使得计算得出的病情指数和实际情况更加相符。

(4)快速准确 和大田病圃鉴定方法相比,该方法的更加快速、简捷、可重复性强,病圃鉴定一年一般鉴定一批样品,而该方法可一般1个月鉴定结果就可得到,并且不收外界环境影响,只要实验需要随时都可进行。

(5)经济环保 实验用的纸钵可用废旧的报纸或书纸等制作(本试验用的是废报纸),营养土可用蛭石和沙土自己根据实际需要配置(大概比例:蛭石∶沙土,6∶4),菌培养基使用麦麸和水按5∶2体积混合制成,更加节约成本,且其灭菌后还可作为肥料。

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