本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种新型石斛培养方法。
背景技术：
铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)是兰科石斛属多年生附生草本植物，是一种名贵的中药材，具有悠久的应用历史，被列为九大仙草之首，是药中黄金。《神农本草经》记载：“石斛除痹下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，久服厚肠胃”。金元四大名医之一朱丹溪称石斛有卓著的滋阴健阳功效，并且在中医补阴药物中，石斛是独树一帜的。古往今来石斛被称为滋阴补肾、养生保健之上品，一年四季皆可服用，且对各脏器的阴虚之证有通补之效。长期的临床试验和科学研究的结果表明石斛具有补阴强身、健壮筋骨，延缓衰老、润肤养颜，治疗眼疾、降低血糖、滋养肝阴、利胆溶石等多种功效，同时这些功效与石斛中所含的丰富的营养成分密切相关，现代医学研究表明：铁皮石斛中所含有的石斛多糖，氨基酸、生物碱及菲类化合物等具有较高的医疗保健作用，能够提高机体免疫力。
长期以来，应用铁皮石斛主要以采集野生资源为主。近年来，随着人们对铁皮石斛药用价值认识的日益提高，铁皮石斛的需求量也不断提高，传统的野生资源已不能满足人们的需求量，甚至有些地区的野生资源面临枯竭。为了更好地保护和利用铁皮石斛资源，越来越多的科研工作者开始响应国家号召，开始关注于铁皮石斛的研发工作，包括铁皮石斛人工驯化栽培，无性繁殖等，铁皮石的组织培养技术是铁皮石斛繁殖的一种重要手段，也是大力推广铁皮石斛种植、繁殖苗木的关键途径，但是一般组织培养过程中幼苗生长周期较长，消耗大量资源，增加组培生产成本，且所得的培育的过程中容易发生病虫害，所得的石斛品质也很难保证。
技术实现要素：
为解决上述问题，本发明提供了一种新型石斛培养方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种新型石斛培养方法，包括如下步骤：
S1、将成熟铁皮石斛种子置于浸种剂消毒浸泡20～40min，所述浸种剂由以下重量份的原料制备而成：
0.1-0.3份MnSO4粉末、0.05-0.15份CuSO4粉末、0.1-0.3份ZnSO4粉末、0.2-0.4份NiSO4粉末、0.2-0.5份(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末、3～5份多菌灵、10～20份EM原露100倍稀释液；
S2、将消毒浸种完成后的种子播种于自制培养基中培养15-20天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎；培养条件为27-30℃，光照为1800-2300lx，光照时间为13-14h/d；
S3、将圆球茎转入加蕨根发酵粉的自制培养基中培养23-28天，使得圆球茎堆积在培养基中，并出现叶原基和分化苗；培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S4、将圆球茎分化苗用清水冲洗后转入改良1/2MS培养基中培养20-30天，经诱导产生叶原基；
S5、将步骤S4中产生的小苗转入改良MS培养基中进行壮苗，经过60-70天壮苗培养，高度达到1.5-2.5cm的幼苗出现，培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S6、将步骤S5得到的幼苗转入加花宝1号和2号的改良培养基进行诱导生根；
S7、将步骤S6得到的生根苗进行炼苗驯化。
优选地，所述自制培养基通过以下步骤制备所得：
步骤一、取苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份分别进行粉碎后混合搅拌均匀，加水，使其含水量达60％-70％，搅拌20-40分钟，pH控制在7.0-7.5，其颗粒大小在5mm以下，颗粒粗细度均匀；
步骤二、将拌匀后的原料堆积发酵，做成高1.1-1.3米、底宽1.3-1.7米、长度不限的梯形堆，在其上打一些通气孔，发酵9-10天，发酵结束后再加入适量的水，拌匀，调节含水量在60-70％之间；
步骤三、常压下先将温度升至110-115℃，保温20-25min；然后将温度上升至120-125℃，保温60-70min；再将温度升至130-145℃，在压力为0.13-0.14MPa的情况下保温60-70min，最后再闷置30-35min，停止加热，让其自然冷却到25℃以下，得自制培养基。
优选地，所述加蕨根发酵粉的自制培养基由以下重量份的原料制备而成：
苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份、蕨根发酵粉为10-20份。
优选地，所述步骤S4中的改良1/2MS培养基的配方为硝酸钾19000mg/L、硝酸铵16500mg/L、磷酸二氢钾1700mg/L、氨基酸螯合镁3700mg/L、碘酸钙4400mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰2230mg/L、硫酸锌860mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁2780mg/L、乙二胺四乙酸二钠3730mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
优选地，所述步骤S5中的改良MS培养基的配方为：硝酸钾38000mg/L、硝酸铵33000mg/L、磷酸二氢钾3400mg/L、氨基酸螯合镁7400mg/L、碘酸钙8800mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰4460mg/L、硫酸锌1720mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁5560mg/L、乙二胺四乙酸二钠7460mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、NAA6ml/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
优选地，所述步骤S6中的加花宝1号和2号的改良培养基的配方为：花宝1号2000mg/L、花宝2号2000mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、碘酵母100g/L、NAA5ml/L、IBA5ml/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
优选地，所述蕨根发酵粉通过以下步骤制备所得：
将洗净后的蕨根沥干，置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7-1.5MPa，爆破处理7-23min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.5-2.1MPa，蒸汽爆破处理0.8-2.8min后，按照接种量1.5-1.7％的比例接种微生物发酵剂，保持温度25-35℃，发酵48-54小时后，高温灭菌，冷冻干燥，得蕨根发酵粉。
本发明具有以下有益效果：
本发明通过优化和改进各个步骤的培养基对铁皮石斛组织培养，可促进种子萌发并缩短萌发时间，为种子萌发提供充足的营养，铁皮石斛萌发率高，且萌发时间短，加快了组培苗的生长速率，减少时间消耗，降低成本，且提高了所得铁皮石斛的品质。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明实施例提供了一种新型石斛培养方法，包括如下步骤：
S1、将成熟铁皮石斛种子置于浸种剂消毒浸泡20～40min，所述浸种剂由以下重量份的原料制备而成：
0.1-0.3份MnSO4粉末、0.05-0.15份CuSO4粉末、0.1-0.3份ZnSO4粉末、0.2-0.4份NiSO4粉末、0.2-0.5份(NH4)6Mo7O24.4H2O粉末、3～5份多菌灵、10～20份EM原露100倍稀释液；
S2、将消毒浸种完成后的种子播种于自制培养基中培养15-20天，经过种胚膨大、萌发形成绿色圆球茎；培养条件为27-30℃，光照为1800-2300lx，光照时间为13-14h/d；
S3、将圆球茎转入加蕨根发酵粉的自制培养基中培养23-28天，使得圆球茎堆积在培养基中，并出现叶原基和分化苗；培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S4、将圆球茎分化苗用清水冲洗后转入改良1/2MS培养基中培养20-30天，经诱导产生叶原基；
S5、将步骤S4中产生的小苗转入改良MS培养基中进行壮苗，经过60-70天壮苗培养，高度达到1.5-2.5cm的幼苗出现，培养条件：温度25-26℃，光照度1700-2100lx，光照时间为13-14h/d；
S6、将步骤S5得到的幼苗转入加花宝1号和2号的改良培养基进行诱导生根；
S7、将步骤S6得到的生根苗进行炼苗驯化。
所述自制培养基通过以下步骤制备所得：
步骤一、取苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份分别进行粉碎后混合搅拌均匀，加水，使其含水量达60％-70％，搅拌20-40分钟，pH控制在7.0-7.5，其颗粒大小在5mm以下，颗粒粗细度均匀；
步骤二、将拌匀后的原料堆积发酵，做成高1.1-1.3米、底宽1.3-1.7米、长度不限的梯形堆，在其上打一些通气孔，发酵9-10天，发酵结束后再加入适量的水，拌匀，调节含水量在60-70％之间；
步骤三、常压下先将温度升至110-115℃，保温20-25min；然后将温度上升至120-125℃，保温60-70min；再将温度升至130-145℃，在压力为0.13-0.14MPa的情况下保温60-70min，最后再闷置30-35min，停止加热，让其自然冷却到25℃以下，得自制培养基。
所述加蕨根发酵粉的自制培养基由以下重量份的原料制备而成：
苔藓泥炭土36-48份、酒糟8-10份、树皮块18-22份、硝酸钾0.5-0.9份、碳酸钙纤维2-3份、蔗糖1-2份、磷酸二氢钾0.5-1.5份、尿素0.2-0.4份、醋糟8-12份、豆饼粉8-12份、蕨根发酵粉为10-20份。
所述步骤S4中的改良1/2MS培养基的配方为硝酸钾19000mg/L、硝酸铵16500mg/L、磷酸二氢钾1700mg/L、氨基酸螯合镁3700mg/L、碘酸钙4400mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰2230mg/L、硫酸锌860mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁2780mg/L、乙二胺四乙酸二钠3730mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
所述步骤S5中的改良MS培养基的配方为：硝酸钾38000mg/L、硝酸铵33000mg/L、磷酸二氢钾3400mg/L、氨基酸螯合镁7400mg/L、碘酸钙8800mg/L、碘化钾166mg/L、硼酸1240mg/L、硫酸锰4460mg/L、硫酸锌1720mg/L、钼酸钠50mg/L、硫酸铜5mg/L、三氯化六氨合钴5mg/L、硫酸亚铁5560mg/L、乙二胺四乙酸二钠7460mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、NAA6ml/L、蕨根发酵粉15g/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
所述步骤S6中的加花宝1号和2号的改良培养基的配方为：花宝1号2000mg/L、花宝2号2000mg/L、肌醇20000mg/L、甘氨酸400mg/L、盐酸硫胺素100mg/L、盐酸吡哆醇100mg/L、烟酸100mg/L、碘酵母100g/L、NAA5ml/L、IBA5ml/L、蔗糖30g/L、琼脂6.5-8g/L。
所述蕨根发酵粉通过以下步骤制备所得：
将洗净后的蕨根沥干，置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.7-1.5MPa，爆破处理7-23min；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.5-2.1MPa，蒸汽爆破处理0.8-2.8min后，按照接种量1.5-1.7％的比例接种微生物发酵剂，保持温度25-35℃，发酵48-54小时后，高温灭菌，冷冻干燥，得蕨根发酵粉。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。