本发明涉及组培
技术领域：
，具体涉及一种广豆根种子组织培养基。
背景技术：
：广豆根又名山豆根，为豆科植物越南槐的根。具有清热解毒，利咽消肿之功效，可用于治疗咽痛，牙龈肿痛，肺热咳嗽，湿热黄疸，鼻咽癌，宫颈癌等症，近代研究发现广豆根所含的总碱及氧化苦参碱具有促进冠脉流量抑制肿瘤细胞和提高免疫力的功能。广豆根主要分布在广西，云南、贵州亦有产，但产量较小。主要来源于野生，经过多年的采挖，野生资源逐年减少，有些产地己濒临枯竭或处于枯竭状态，分布地域日趋缩小，上市量正在逐年减少，而近年来对广豆根的开发和应用却在逐年增加，导致严重的供不应求。自然状态下，广豆根主要依靠种子进行繁育，然而，往往种子还未成熟就已大部分脱落，造成繁殖系数低，另外，靠采取种子进行人工育苗显然难度较大，所以提供一种能够使广豆根种子为种源，缩短育苗时间，保证出芽后芽的存活率、增加芽肉厚度、保证出芽后芽色油绿的培养方法迫在眉睫。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的在于，提供一种广豆根种子组织培养基，其中，在基础培养液中对菠萝渣的利用减少了传统工艺中蔗糖等培养基原料用量，节省了培养基制备成本，另外，添加本发明的母液配方，在能够快速促进壮苗生根，使得生根率达到99％以上，且壮苗生根后的植株平均根数达到20-25条。为了解决上述技术问题，本发明采用了如下的技术方案：一种广豆根种子组织培养基，所述培养基由基础培养液与母液混合而成，它们的体积比为3-5:0.03-0.08；所述每升母液主要含有：10-15mg的恶霉灵、10-20mg的芸苔素内酯、10-50mg的α-萘乙酸钠、10-50mg的嘧霉胺和20-50mg的胺鲜酯；所述每升基础培养液主要含有：30-46mg的菠萝渣水解液、5-10mg的蔗糖、10-20mg的琼脂、5-8mg的水解乳蛋白、2-8mg的ABT生根粉、1-4mg的玉米素、1-4mg的激动素、1-3mg的异戊烯氨基嘌呤和1-3mg的赤霉素。优选地，所述每升母液主要含有：12mg的恶霉灵、15mg的芸苔素内酯、30mg的α-萘乙酸钠、30mg的嘧霉胺和35mg的胺鲜酯；所述每升基础培养液主要含有：38mg的菠萝渣水解液、7mg的蔗糖、15mg的琼脂、6mg的水解乳蛋白、5mg的ABT生根粉、2mg的玉米素、2mg的激动素、2mg的异戊烯氨基嘌呤和1-3mg的赤霉素。优选地，所述菠萝渣水解液主要经过如下处理得到：a.将菠萝榨汁后得到的菠萝渣进行干燥、粉碎，然后加入离子液体至菠萝渣的质量浓度为3％-8％，然后在90-120℃、80-120r/min的条件下，搅拌处理60-120min，得到菠萝渣溶液，再加入菠萝渣溶液4-8倍体积的水，在150-200r/min搅拌处理30-60min后，在3000-5000r/min下，离心10-20min，收集沉淀，将沉淀在40-60℃真空干燥3-5h，得到再生菠萝渣；b.将步骤a所得再生菠萝渣加适量水充分混匀，再加入纤维素酶进行酶解后即可得到菠萝渣水解液；所述的酶解是在pH值为4.5-6.5，温度为55-65℃的条件下，酶解时间为10-12h。优选地，所述离子液体为胍盐类离子液体、醇胺类离子液体、咪唑类离子液体、季铵盐类离子液体、噻唑类离子液体、多元胺类离子液体、三氮唑类离子液体、吡咯啉类离子液体、噻唑啉类离子液体和苯并三氮唑类离子液体中的一种。优选地，所述培养基的配置是将基础培养液和母液按照各自的组份配置后，按照体积比为3-5:0.03-0.08混合，再煮沸调节pH，浓缩后进行高压灭菌后即可。优选地，所述培养基的pH＝5.0-6.0。综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：1、本发明的一种广豆根种子组织培养基在传统的培养基的配方上改进，添加一些能够在广豆根在生根壮苗期间所需的因子，经研究发现采用本发明的基础培养液后添加本发明的母液配方，能够提供生根的良好条件，促进苗健康茁壮，其中胺鲜酯能够促进根系的发育，调节体内养分的平衡；芸苔素内酯为生长调节剂，能调节生长、促进生根；在组培过程中往往会出现黄化现象，一般两个原因，细胞活性不足死亡和病菌感染死亡，恶霉灵和嘧霉胺的添加能够有效的抑制病原真菌菌丝体的正常生长或直接杀死病菌，又能促进植物生长；本发明的母液配方能够快速促进壮苗生根，生根率达到99％以上，且壮苗生根后的植株平均根数达到20-25条。2、本发明的广豆根种子组织培养基中，基础培养液添加有菠萝渣，采用离子液体对其进行再生处理，然后用纤维素酶进行水解，菠萝渣中主要含有纤维素、还原糖等成分，溶解后的纤维素溶液加水之后可使纤维素沉淀析出，实现纤维素的再生，再生过程可去除木质素成分，降低对后续酶水解过程的抑制作用，同时再生过程可使纤维素分子中部分氢键断裂，聚合度、结晶度降低，使纤维素的表面形态发生改变，表面积增大，进而与酶的接触面积增大，对菠萝渣的利用减少了传统工艺中蔗糖等培养基原料用量，节省了培养基制备成本，同时能够解决果汁生产过程中产生的菠萝渣引起的环境污染问题。3、本发明的培养基制备工艺简单，易操作，具有极大的推广意义。【具体实施方式】下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面地理解本发明，但不可以以任何方式限制本发明。实施例1一种广豆根种子组织培养基，由体积比为3:0.03的基础培养液与母液混合而成，其中，每升母液主要含有：10mg的恶霉灵、10mg的芸苔素内酯、10mg的α-萘乙酸钠、10mg的嘧霉胺和20mg的胺鲜酯；每升基础培养液主要含有：30mg的菠萝渣水解液、5mg的蔗糖、10mg的琼脂、5mg的水解乳蛋白、2mg的ABT生根粉、1mg的玉米素、1mg的激动素、1mg的异戊烯氨基嘌呤和1mg的赤霉素；培养基的配置是将基础培养液和母液按照各自的组份配置后，按照体积比为3:0.03混合，再煮沸调节pH，浓缩后进行高压灭菌后即可，培养基的PH＝5.0。基础培养液中的菠萝渣水解液主要经过如下处理得到：a.将菠萝渣进行干燥、粉碎，然后加入离子液体至菠萝渣的质量浓度为3％，然后在90℃、80r/min的条件下，搅拌处理60min，得到菠萝渣溶液，再加入菠萝渣溶液4倍体积的水，在150r/min搅拌处理30min后，在3000r/min下，离心10min，收集沉淀，将沉淀在40℃真空干燥3h，得到再生菠萝渣；b.将步骤a所得再生菠萝渣加适量水充分混匀，再加入纤维素酶进行酶解后即可得到菠萝渣水解液；酶解是在pH值为4.5，温度为55℃的条件下，酶解时间为10h；离子液体为胍盐类离子液体。实施例2一种广豆根种子组织培养基，由体积比为4:0.05的基础培养液与母液混合而成，其中，每升母液主要含有：12mg的恶霉灵、15mg的芸苔素内酯、30mg的α-萘乙酸钠、35mg的嘧霉胺和30mg的胺鲜酯；每升基础培养液主要含有：38mg的菠萝渣水解液、7mg的蔗糖、15mg的琼脂、7mg的水解乳蛋白、5mg的ABT生根粉、2mg的玉米素、2mg的激动素、2mg的异戊烯氨基嘌呤和2mg的赤霉素；培养基的配置是将基础培养液和母液按照各自的组份配置后，按照体积比为4:0.05混合，再煮沸调节pH，浓缩后进行高压灭菌后即可，培养基的PH＝5.5。基础培养液中的菠萝渣水解液主要经过如下处理得到：a.将菠萝渣进行干燥、粉碎，然后加入离子液体至菠萝渣的质量浓度为3％-8％，然后在105℃、100r/min的条件下，搅拌处理80min，得到菠萝渣溶液，再加入菠萝渣溶液4-8倍体积的水，在180r/min搅拌处理45min后，在4000r/min下，离心15min，收集沉淀，将沉淀在50℃真空干燥4h，得到再生菠萝渣；b.将步骤a所得再生菠萝渣加适量水充分混匀，再加入纤维素酶进行酶解后即可得到菠萝渣水解液；水解是在pH值为5.5，温度为60℃的条件下，酶解时间为11h；离子液体为咪唑类离子液体。实施例3一种广豆根种子组织培养基，由体积比为5:0.08的基础培养液与母液混合而成，其中，每升母液主要含有：15mg的恶霉灵、20mg的芸苔素内酯、50mg的α-萘乙酸钠、50mg的嘧霉胺和50mg的胺鲜酯；每升基础培养液主要含有：46mg的菠萝渣水解液、10mg的蔗糖、20mg的琼脂、8mg的水解乳蛋白、8mg的ABT生根粉、4mg的玉米素、4mg的激动素、3mg的异戊烯氨基嘌呤和3mg的赤霉素；培养基的配置是将基础培养液和母液按照各自的组份配置后，按照体积比为5:0.08混合，再煮沸调节pH，浓缩后进行高压灭菌后即可，培养基的PH＝6.0。基础培养液中的菠萝渣水解液主要经过如下处理得到：a.将菠萝渣进行干燥、粉碎，然后加入离子液体至菠萝渣的质量浓度为8％，然后在120℃、120r/min的条件下，搅拌处理120min，得到菠萝渣溶液，再加入菠萝渣溶液4-8倍体积的水，在200r/min搅拌处理60min后，在5000r/min下，离心20min，收集沉淀，将沉淀在60℃真空干燥3-5h，得到再生菠萝渣；b.将步骤a所得再生菠萝渣加适量水充分混匀，再加入纤维素酶进行酶解后即可得到菠萝渣水解液；酶解是在pH值为6.5，温度为65℃的条件下，酶解时间为12h；离子液体为吡咯啉类离子液体。效果验证为了进一步说明本发明广豆根种子组织培养基的应用价值，实施人选择无病害，无残缺，粒径大小相近的广豆根种子，经过灭菌后，在无菌条件下分别接入以下2组中制备得到的培养基，每个处理接种10瓶，每瓶10粒，培养温度(27±1)℃，光照强度2500-3000lx，光照时间12h/d。记录出芽时间，芽生长情况，结果见表1；第一组：去掉母液，其他方式严格按照实施例2进行；第二组：严格按照实施例2进行。表1广豆根种子的生长情况试验组发芽率％出芽时间(h)芽颜色芽肉厚度(cm)第一组7570嫩黄-黄绿-黄绿0.09第二组10041嫩黄-嫩绿-绿色0.13由上表可知，通过采用本发明的的技术方案(实施例2)，的发芽率达到100％，平均出芽时间和芽色也优于去掉母液的第一组，且芽厚度饱满。虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。当前第1页1 2 3