胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法与流程

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法。

二技术背景

胡杨因其耐寒、耐旱、耐盐碱、抗风沙，有很强的生命力。对于稳定荒漠河流地带的生态平衡，防风固沙，调节绿洲气候和形成肥沃的森林土壤，具有十分重要的作用。

近年来，生长在新疆塔里木河流域的胡杨，由于不适当的采伐和毁林垦荒、放牧，已造成胡杨林资源的破坏和荒漠化，以及塔里木河输水量递减，造成胡杨林大面积死亡，出现了可用土地资源荒漠化的问题，而我国存在大面积的荒漠区和盐碱滩涂地，如何加强对荒漠区和盐碱滩涂地的利用，成为胡杨育种中关注的焦点。

三

技术实现要素：

本发明需要解决的问题是针对胡杨优良种质资源抗干旱耐盐碱育种中的需求，发明了一种胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法，为胡杨优良种质资源的遗传转化和品种改良快速提供生产和研究材料。

本发明的技术方案：

本发明所述胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生产方法由以下步骤构成：

(1)外植体的选择与消毒：

选择生长健壮无病害的胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株的幼嫩叶片作为外植体，将材料经流水冲洗1h，去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用灭菌的无菌水冲洗3遍，再用75％无水乙醇消毒30s，接着用无菌水冲洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒处理6-8min，最后用灭菌的无菌水冲洗4遍；

(2)愈伤组织的诱导：

在超净工作台上，将消毒好的叶片切成5mm大小的方块，接种于诱导愈伤培养基上(配方为：MS+0.4mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂；Ph调为5.8)，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件14h/d，2000lux，温度23-28℃；

(3)不定芽的诱导：

将经过继代培养1次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上(配方为：MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂；Ph调为5.8)，诱导光照条件14h/d，光照强度约2000lux，温度23-28℃；

(4)根的诱导：

经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度0.8-1.2cm高时可转入生根培养基诱导生根(配方为：1/2MS+2mg/LIBA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂；Ph调为5.8)，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；。

本发明所述胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株培养周期为50-65天。

本发明与现有技术相比，其有益效果是：

本发明使用胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片作为材料，取材方便，数量充足，接种后在较短时间内形成愈伤组织直至生根形成幼苗植株，所得植株生长健壮，平均根长均明显增大。繁殖系数约为8.9，培养条件可人为控制。利用本方法，可以提高胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株的幼苗繁殖系数和成活率，培养周期短，变异少，培养条件可人为控制，操作方法简单，为胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株作为优良的科研材料进行遗传转化和品种改良等研究奠定基础，从而为新疆胡杨人工林大面积生产提供抗干旱耐盐碱地的优良品种，解决了生长在新疆塔里木河流域的胡杨，由于不适当的采伐和毁林垦荒、放牧，造成胡杨林资源的破坏和荒漠化的问题，以及塔里木河输水量递减，造成胡杨林大面积死亡，出现可用土地资源荒漠化的问题。

四附图说明

图1胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株再生植株的叶片外植体

图2胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的愈伤组织

图3胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的丛生芽

图4胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株叶片再生植株的生根幼苗

五具体实施方式

1，繁殖材料的选择

试验材料取自金陵科技学院实验站的胡杨与密叶杨杂种F1代优良单株。

2，繁殖材料的消毒

将材料经流水冲洗1h去除表面杂物，在无菌操作工作台上，先用无菌水冲洗3遍，再用75％无水乙醇消毒30s，接着无菌水冲洗3遍，然后用0.1％氯化汞消毒处理6-8min，最后用灭菌的无菌水冲洗4遍；见附图1。

3，愈伤组织的诱导

在超净工作台上，将消毒好的叶片切成5mm大小的方块，接种于愈伤诱导培养基上，叶的背面紧贴培养基，每瓶接种3-4块，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；见附图2

4，不定芽的诱导

将经过连续继代培养2-3次后的黄绿色愈伤组织转接到诱导不定芽分化培养基上，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃；见附图3

5，根的诱导

经过不定芽诱导得到再生芽，待再生芽长到4-5片叶子，长度1cm高时可转入生根培养基诱导生根，诱导光照条件14h/d，光照强度2000lux，温度23-28℃。幼苗生根情况，见附图4。