本发明涉及一种杂交春兰在试管内开花的方法，特别是涉及一种杂交春兰根状茎诱导花芽成花的方法。
背景技术：
春兰（Cymbidium goeringii）是我国最早被栽培的兰花之一，其叶片质地一般较厚，花色多为绿色，以花的质感好、瓣形美、香味醇正著称；一般于早春开花，早期多出现在古人的诗词歌赋当中，由此说明在当时对春兰的栽培已比较普遍。国兰栽培与鉴赏是中国传统文化的组成部分，市场需求量巨大，但由于国兰栽培年限久，筛选新品种历时久成本高，杂交后代的兰花幼苗组培出瓶后一般还需经过至少2-3年的栽培护理时间才能看到开花，而杂交后代性状分离差异巨大，从确定好的成花开品到扩繁销售，一般需要7-10年的时间，有时甚至需要更久，期间浪费了巨大的人力与物力，培育成本也一直居高不下，因此，缩短开花年限进行早期杂种苗筛选与淘汰已成为近年来杂交兰花研究的热点。有关杂交春兰根状茎催花且成花皆正常的试管催花技术还未见报道。
技术实现要素：
本发明目的是提供一种杂交春兰的试管开花技术，通过该技术缩短杂交春兰开花年限，提前看到成花开品，在杂交春兰根状茎阶段直接催出花芽的组织培养方法；从而实现人为控制开花时间，为春兰杂交种子无菌萌发试管开花体系提供技术支持。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
（1）材料选取：选取生长健壮、无褐化的根状茎；
（2）材料处理：在转接过程中，需要用手术刀刀背刮去根状茎母瓶上原有的培养基，操作时避免刮伤根状茎；
（3）配置花芽诱导培养基：以MS为基本培养基，还含有以下成分：NAA 0.5 mg·L-1，6-BA 8.0 mg·L-1 ，食用白砂糖 35 g·L-1 ，活性炭1.5 g·L-1 ，琼脂条7 g·L-1；
（4）培养基分装：将花芽诱导培养基分装至650 mL的组培玻璃瓶中，每瓶100-110 mL，厚度为1.4-1.6 cm ；
（5）试管催花培养：将生长健壮的根状茎切成长1.8-2.2 cm无分支的根状茎，接种在花芽诱导培养基中，每瓶接种20个根状茎材料；催花培养条件为：pH 5.6-5.8，培养室温度为26±2 ℃，光照时间12 h/d，光照强度2500-3000 Lx，花芽诱导时间120-150 d。
其中，所述步骤（5）中的20个根状茎的摆放方式为：按4列摆放，第1列摆放6个根状茎，第2、3列摆放8个根状茎，第4列摆放6个根状茎，材料互相之间平行错开，平铺在培养基上；每条根状茎前端和后端都需接触到培养基，接种深度为根状茎厚度的1/3。
步骤（5）中所述光照使用LED5000灯管，距离材料28 cm。
所述诱导花芽的材料为杂交春兰的根状茎，俗称龙根。
本发明的显著优点：
一、通过本发明方法，摆脱季节对杂交春兰开花的限制，缩短开花周期，通过生物技术手段在培养前期摒除成花不好的根状茎材料，短时间内提前挑选优良的种质资源；与传统的筛选选择育种技术比较，可以缩短3年左右时间，大大提高育种效率，有效节约不必要的时间成本和经济成本。
二、本发明方法在材料选取上选择了较易获得的根状茎，相对幼苗瓶内催花，根状茎瓶内催花更易繁殖及操作，针对挑选出的好的成花材料也更易进行后续繁殖扩繁，时间短，指向性强。
三、本发明采用的培养基构成使得花芽诱导率大大提高，用本方法诱导出的花芽正常开花率高（培养5个月达11.5%，培养8个月达20%），所诱导出的花的大小与栽培时抽出的花的差别不大，挑选优良种质依据更强，具有显著的经济效益。
附图说明
图1 黄梅♀×黄荷♂F1代试管花芽与叶芽的萌动
图2 黄梅♀×黄荷♂F1代试管内萌发出的花苞
图3 黄梅♀×黄荷♂F1代花朵试管内开放瞬间
图4a 黄梅♀×黄荷♂F1代诱导出的花朵出现不同的性状分离
图4b 黄梅♀×黄荷♂F1代诱导出的花朵出现不同的性状分离
图5 黄梅♀×黄荷♂F1代试管花朵直观图
图6 黄梅♀×黄荷♂F1代的父母本
具体实施方式
实施例1
取材方法：选取黄梅♀×黄荷♂杂交种子萌发繁殖进行2次继代转接后生长健壮的根状茎作为催花材料进行接种；
培养基：MS基本培养基采用1986，北京高等教育出版社，陈正华主编的《木本植物组织培养及其应用》中的配方进行配制的。
培养基配制：基本培养基为MS，将Su（白砂糖）35 g·L-1 和 Ag（琼脂条）7 g·L-1加热溶解，附加物活性炭Ac先用冷水溶解，加入生长调节剂 NAA 和 6-BA，用温度测试范围0-80℃的pH仪和1mol·L-1 NaoH、1mol·L-1HCL调节pH值为5.7，倒入650 mL规格的组培玻璃瓶（每瓶100 mL），培养基厚度为1.5 cm。
花芽诱导培养基：MS + NAA 0.5 mg·L-1 +6-BA 8.0 mg·L-1 + Su 35 g·L-1 +Ac 1.5 g·L-1 + Ag 7 g·L-1 ；
试管催花培养：将生长健壮的根状茎切成2 cm长无分支的根状茎，接种在花芽诱导培养基中，每瓶接种20个根状茎材料；其摆放方式为：按4列摆放，第1列摆放6个根状茎，第2、3列摆放8个根状茎，第4列摆放6个根状茎，材料互相之间平行错开，平铺在培养基上，每条根状茎前端和后端都需接触到培养基，接种深度为根状茎厚度的1/3。催花培养条件为：培养室温度为26±1℃，光照时间12 h/d，光照强度1500-2000 Lx，花芽诱导时间120-150 d。
按照以上方法进行，黄梅♀×黄荷♂杂交后代根状茎花芽诱导的正常开花率达11.5%。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。