本发明涉及蓝莓组织培养技术领域，特别是蓝莓瓶内快速生根方法。
背景技术：
蓝莓为杜鹃花科越橘属植物，是具有较高经济价值和广阔开发前景的新兴果树树种之一。蓝莓果实营养丰富，特别是抗氧化能力为所有果品蔬菜之首。
当前，利用植物组织培养方法可以在短期内快速繁殖多种植物，不仅繁殖率高，且因为其是无性繁殖，可以保持原繁殖母株的优良性状，近年来在生产上应用越来越广。此外，扦插作为苗木繁育的另外一种重要手段，因其经济、方便也得到广泛重视。但蓝莓组培苗植株纤弱、生根率较低，若直接进行扦插其成活率较低。
中国专利CN201210048620.3公开了一种矮丛蓝莓组培苗的练苗及快速生根法。该方法包括如下步骤：将矮丛蓝莓组培苗茎段接种在WPM基本培养基，在生根培养基上进行生根培养，在移栽驯化阶段，每隔7天喷施浓度为0.14％～0.16％的108生根宝一次。与常规组培育苗的炼苗和生根方法相比，可以使矮丛蓝莓种苗生根率提高到90％以上；新苗成活率由50％上升到90％以上，同时新苗质量也有了显著提高。但该专利更多的关注蓝莓在移栽驯化阶段的生根管理措施，即在生根培养基培养的基础上，再次通过喷施生根宝进行生根，从操作过程来看，操作比较繁琐，生根所需时间较长。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术存在的上述不足，提供一种蓝莓瓶内快速生根方法，该方法生根速度快，生根率高，且操作简单，适宜大规模生产中使用。
本发明蓝莓瓶内快速生根法依次包括以下步骤：
1)在培养瓶内铺一层滤纸，将配制好的液体培养基倒入瓶内，之后将该培养瓶及装有IBA的三角瓶在120-125℃的高温下灭菌15-20min备用；
2)选择继代培养30-40天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段并将其基部放入IBA溶液中速蘸10-15s，然后将这些茎段竖直放入铺有滤纸的培养瓶内，培养基没过蓝莓茎段1-2cm；
3)先在暗光条件下培养一周，之后在光照强度为1500-2500Lx、光照时长为10-14h/d的条件下培养20-30天。
其中步骤1)中所述液体培养基配方为1/2WPM+20-30g/L蔗糖，pH为5.8-5.9。
步骤1)所述的液体培养基中还可以加入活性炭，加入量为重量百分比浓度0.2％～0.5％，试验发现，活性炭不仅可以创造一个暗环境，而且还可以吸附一些有毒物质，使根不容易发生褐变，有利于根的生长。
步骤1)所述的液体培养基中还可以加入维生素C，加入量为0.001-0.002mmol/L。
其中步骤1)中所述IBA浓度为100-200mg/L，根据不同的品种确定最佳浓度。
步骤3)所述的暗光条件下是指可以将培养瓶放在暗室内，也可以用黑布遮盖。
步骤3)所述暗光下及光照条件下的培养温度均为23-25℃。
本发明的有益效果是：
(1)本发明的适用范围较广。
(2)本发明的生根速度快，生根率高，且操作简单，适宜大规模生产中使用。
蓝莓瓶内使用固体培养基培养，一般生根时间需要60天左右，而本发明缩短到20-30天左右，生根时间缩短，成活率可达90％以上。
具体实施方式
下面将结合实例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。
实施例1：试验品种为奥尼尔
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖+0.3％活性炭，pH为5.8)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度为200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天左右且生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段竖着放入培养瓶中；3)先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。光照下培养30天后生根率92％，平均根长2.7cm，移栽后成活率可达到93％。
实施例2：试验品种为奥尼尔
(1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖，还含有维生素C，加入量为0.001mmol/L，pH为5.8)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度为200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段竖着放入培养瓶中；3)先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。光照下培养30天后生根率可达90％，平均根长为2.1cm，移栽后成活率可达到92％。
实施例3：试验品种为奥尼尔
(1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖，pH为5.8)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度为200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段竖着放入培养瓶中；3)先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。光照下培养30天后生根率87％，平均根长2.0cm，移栽后成活率可达到88％。
实施例4：试验品种为奥尼尔
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖+0.3％活性炭，pH为5.8，还含有维生素C，加入量为0.001mmol/L)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度为200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段竖着放入培养瓶中；3)先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。光照下培养30天后生根率97％，平均根长3.3cm，移栽后成活率可达到97％。
实施例5：试验品种为乔治
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖+0.3％活性炭，pH为5.8)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段放入培养瓶中；3)在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。光照下培养25天后生根率95％，平均根长1.2cm，移栽后成活率可达到90％。
实施例6：试验品种为蓝丰
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖，pH为5.8，还含有活性炭，重量百分比浓度为0.3％)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度100mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段放入培养瓶中；3)首先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。
光照下培养20天后生根率92％，根平均达到1.2cm，移栽后蓝丰蓝莓苗的成活率可达到91％。
实施例7：试验品种为都克
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖，pH为5.8，还含有活性炭，重量百分比浓度为0.3％)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段放入培养瓶中；3)首先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。
光照下培养20天后生根率100％，根平均达到3.33cm，移栽后都克蓝莓苗的成活率可达到92％。
实施例8：试验品种为乔治
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+20g/L蔗糖，pH为5.8，还含有活性炭，重量百分比浓度为0.3％)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段放入培养瓶中；3)首先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。
光照下培养25天左右后生根率90％，根平均达到1.7cm，移栽后乔治蓝莓苗的成活率可达到90％。
实施例9：试验品种为奥尼尔
1)在培养瓶内铺一层滤纸，然后将制备好的液体培养基(配方为1/2WPM+30g/L蔗糖，pH为5.8，还含有活性炭，重量百分比浓度为0.4％)倒入培养瓶内，之后将培养瓶及装有IBA的三角瓶(IBA浓度为200mg/L)在121℃的高温下灭菌15min备用；2)选择继代培养35天生长健壮的蓝莓，将其切成长度为3-4cm的茎段，将其基部放入IBA溶液中速蘸10s，然后将这些茎段竖着放入培养瓶中；3)首先在暗光下培养一周，之后在光照强度为2000Lx、光照时长为14h/d下的培养条件下进行培养。
光照下培养20天后生根率95％，根平均达到2.9cm，移栽后奥尼尔蓝莓苗的成活率可达到97％。
以上实施例暗光下及光照下的培养温度均为25℃。
试验结论：本发明繁殖方法适用范围广，生根速度快，操作简单，且生根率高，适宜大规模生产中使用。
实施例1-4均针对奥尼尔蓝莓做的试验，培养基不同，其中实施例4配方为1/2WPM+20g/L蔗糖+活性炭+维生素C，实施例1配方为1/2WPM+20g/L蔗糖+活性炭，实施例2配方为1/2WPM+20g/L蔗糖+维生素C，实施例3配方为1/2WPM+20g/L蔗糖。
从实施例1-4的试验结果可以看出，同时含活性炭和维生素C的实施例4生根率、根长度及移栽后蓝莓苗的成活率均比其他实施例更好。
对比例1：
以圆蓝、粉蓝和夏普蓝等为研究对象，采用瓶内固体培养基生根的方法(配方为1/2WPM+0.3mg/LIBA)，经过20d的培养，上述三个品种的生根率分别是1.3％，0和0，经过60d的培养，生根率分别达到82.7％、74.9％和72％。
对比例2：
以兔眼蓝莓为研究对象，采用瓶内生根(配方为MS+0.2mg/LIBA)，生根率仅为57.5％。
对比例3：
以美登为研究对象，采用瓶内生根方法(配方为1/2WPM+0.6mg/LIBA)，经过生根培养45d后调研，其生根率达到85％。
以上内容描述了本发明的基本原理和主要特征，本发明不受上述实施例的限制，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。