本发明涉及农业植物栽培领域的百合栽培方法，特别是一种促进龙牙百合组培鳞茎快速膨大发育的方法。
背景技术：
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百合是百合科百合属（学名：Lilium）多年生草本球茎植物。龙牙百合是我国三大食用百合主栽品种之一，久负盛名，是食用、药用、观赏百合中的名特优品种，也是营养价值最好的品种之一。其鳞茎呈球形，一般横径4-6厘米，鳞片披针形，白色，曝晒时呈黄白色或稍带粉红色。淀粉含量高，营养丰富，味淡不苦，地上茎高约90～120厘米，叶散生，倒披针形。花乳白色有香气，其鳞茎可食用兼药用。据医药典籍《金匮要略》、《本草纲目》、《中国药典》记载，百合有润肺止咳、宁心安神、理脾健胃、补中益气、利大小便、解无名肿毒及止血等功效。现代医学研究证明，百合含有的秋水仙碱、秋水仙胺等对人体细胞有丝分裂有明显的抑制作用，抑制癌细胞及急性痛风等，均有明显疗效。百合还可以提练葡萄糖和奎宁等药品。其鳞茎个头大、片长、肉厚、心实、色泽白、味道美、营养丰富、药效明显，经江西检测站检测，每百克百合中含水份65%，碳水化含物23.8%，总膳食纤维5.9%，其中果胶4.8%、蛋白质4%、脂肪0.1%、水分1.1%、钙0.9%、铁0.09%、热量132千卡。因此，百合是集食品、药品于一身的绿色保健食品。
龙牙百合被人们称为“南方人参”、“食中珍品”。目前，国内通过组织培养快速繁殖龙牙百合种苗的报道较多,但多数侧重于龙牙百合不同外植体对百合再生效果的研究,或是百合试管内结鳞茎及小鳞茎移栽成活的研究。有关龙牙百合小鳞茎快速膨大并生根培养基优化等方面的研究较少。
如何提供一种完善的食用龙牙百合快繁技术方案,通过优化龙牙百合小鳞茎快速膨大，并生根的培养基,从而为食用龙牙百合试管苗规模化生产提供技术保证。以适应龙牙百合及龙牙百合种球或籽球的规模化生产的需要。
技术实现要素：
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本发明提供一种促进龙牙百合组培鳞茎快速膨大发育的方法，采用龙牙百合鳞片经组织培养，诱导鳞茎快速发育的方法，以龙牙百合鳞片作为种片进行诱导发育种球，优化了龙牙百合小鳞茎快速膨大，并生根的培养基,从而为食用龙牙百合试管苗规模化生产提供技术保证。以适应龙牙百合及龙牙百合种球或籽球的规模化生产的需要。大大降低龙牙百合种植成本。
本发明公开一种促进龙牙百合组培鳞茎快速膨大发育的方法，采用龙牙百合组织培养中诱导鳞茎发育的方法，以龙牙百合鳞片作为种片进行诱导发育种球，其包括1）龙牙百合鳞片丛芽增殖，2）鳞茎诱导，3）小鳞茎膨大制籽球；所述1）丛芽增殖是将干净的龙牙百合鳞片,用醇溶液处理, 再用消毒溶液浸泡处理一定时间,然后用水冲洗，晾干,最后接种于丛芽增殖培养基中进行丛芽增殖培养；控制丛芽增殖培养条件为：培养周期为25-35天,培养温度为20-30℃,先暗培养10-20天，形成龙牙百合鳞片丛芽，控制龙牙百合鳞片丛芽生长5-10天后，进行光培养，控制光培养的光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗 , 控制丛芽增殖培养2次以上，制成丛生芽苗。
本发明所述促进龙牙百合组培鳞茎快速膨大发育的方法，所述2）鳞茎诱导，优选是将1）制成丛生芽苗除去芽苗叶片,得丛生芽苗体，将丛生芽苗体接种于鳞茎诱导培养基中，进行鳞茎的诱导增殖培养，诱导增殖培养条件为：采用光培养，控制培养周期为30-40天,培养温度为20-30℃,培养光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗，得分化小鳞茎。
进一步的，是所述3）小鳞茎膨大制籽球，是将2）所得的分化小鳞茎，切割并去除叶片后,移植到F1培养基中进行小鳞茎膨大培养,使小鳞茎膨大生长并生根,控制小鳞茎膨大培养条件为：培养周期为50-70天,培养温度为20-30℃,采用避光全黑暗培养，控制小鳞茎膨大培养进行2次以上，即制得籽球；所述F1培养基其组成组分为包含1-2倍的MS培养基、1.0-5.0g/L的多效唑、0.2-0.8mg/L的萘乙酸、60-120g/L的蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L的琼脂，pH=5.6-6.2。
优选，是1）所述醇溶液处理是用质量浓度为70-80%的乙醇溶液对龙牙百合鳞片消毒处理20-30秒钟；所述消毒溶液浸泡处理是用浓度为0.1%的升汞溶液浸泡处理10-15分钟。
所述用水冲洗是使用无菌水冲洗2-4次。
所述作为种片进行诱导发育是进行鳞茎的诱导形成及增殖。
本发明采用上述方法，经反复试验，即使用丛芽增殖培养基和生根的培养基及F1培养基，特别是经F1培养基培养60天后,可以使龙牙百合鳞茎由64.00mg/个增加到237.60 mg/个，净增重173.60mg/个；由97.20mg/个增加到315.20mg/个净增重218.00mg/个；由142.40mg/个356.90mg/个净增重214.50mg/个，并且籽球的生根良好。
本发明一种促进龙牙百合组培鳞茎膨大发育的方法，或者为利用龙牙百合鳞片诱导发育制籽球，具体来讲为一种促进龙牙百合组织培养中诱导鳞茎发育的方法。本发明通过改善龙牙百合组培快繁技术，即丛芽增殖、小鳞茎的诱导、小鳞茎的膨大并生根三个阶段促使其鳞茎膨大发育生长。操作过程与培养试管苗类似，培养完成后获得具有膨大的鳞茎，可作为生产用的繁殖原始材料直接移入大田种植，大幅度提高了繁殖系数，缩短了龙牙百合的生长周期，可大大节约百合或龙牙百合种植成本，提高种植效益的特点，能满足龙牙百合产业化、规模化栽培用种需求。有利于龙牙百合的广泛种植和推广，具有良好的经济效益和社会效益。
具体实施方式：
下面结合具体实例对本发明作进一步说明。
本发明所述各物料均可通过市售获得，或者通过现有技术方法制备得到。
本发明一种龙牙百合鳞片诱导发育制籽球的方法，采用龙牙百合组织培养中诱导鳞茎发育的方法，以龙牙百合鳞片作为种片进行诱导发育种球，其包括1）龙牙百合鳞片丛芽增殖，2）鳞茎诱导，3）小鳞茎膨大制籽球；所述1）丛芽增殖是将干净的龙牙百合鳞片,用醇溶液处理,再用消毒溶液浸泡处理,然后用水冲洗，晾干,最后接种于丛芽增殖培养基中进行丛芽增殖培养；控制丛芽增殖培养条件为：培养周期为25-35天,培养温度为20-30℃,先暗培养10-20天，形成龙牙百合鳞片丛芽，控制龙牙百合鳞片丛芽生长5-10天后，进行光培养，控制光培养的光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗,控制丛芽增殖培养2次以上，制成丛生芽苗。
本发明方法促进龙牙百合组培鳞茎膨大发育的方法，如龙芽百合原料为百合鳞球。通过对种球鳞片的培养诱导丛生芽萌发及高频增殖制成丛生芽苗，再以丛生芽苗为材料诱导其发育形成鳞茎或叫小鳞茎，调节培养基对小鳞茎进行膨大发育并生根培养，最终形成龙牙百合组培鳞茎膨大发育的“三步”法 组培技术方案。
具体按下述方法进行,包括如下三步即三阶段：
1）第一阶段，龙牙百合鳞片丛芽增殖：将剥取龙牙百合外、中层干净的鳞片,用自来水冲洗晾干后,使用质量浓度为75%的乙醇浸泡消毒30秒钟,再用0.1%的升汞溶液浸泡消毒杀菌10-12分钟,然后用无菌水冲洗3次后晾干,将上述晾干的鳞片接种到适宜的培养基进行培养,即丛芽增殖培养基中进行丛芽增殖培养，控制培养条件为：培养周期为30天,培养温度为25℃,先暗培养，待丛芽形成并生长7天后转入光培养，光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗,该阶段培养即丛芽增殖培养基中进行丛芽增殖培养进行2次以上形成丛生芽苗；
2）第二阶段，鳞茎诱导或叫小鳞茎的诱导：将第一阶段所得的丛生芽苗切割除去叶片,将余下的芽体转接到适宜培养基，即接种到鳞茎诱导培养基中，进行鳞茎的诱导增殖培养，进行鳞茎的诱导形成及增殖，培养条件为：培养周期为30-40天,培养温度为25℃,培养光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗，得分化小鳞茎；
3）第三阶段，小鳞茎的膨大并生根：将第二阶段所得的分化小鳞茎切割下来,并切除叶片,将其移植到F1培养基中,以培养基F1为鳞茎膨大发育培养基,进行小鳞茎的膨大生长并生根,控制培养条件为：培养周期为60天,培养温度为25℃,避光全黑暗培养,所述F1培养基包含1-2倍的MS培养基、1.0-5.0g/L多效唑、0.2-0.8mg/L萘乙酸、60-120g/L蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L琼脂，pH=5.6-6.2；该阶段培养进行2次以上。
实施例
下述实施例中使用的培养基除已公开的外，未说明之处均是使用现有技术市场上市售的应用于本发明技术方面的培养基，而如丛芽增殖培养基同样可以使用F1培养基。
1）将剥取龙牙百合外、中层干净、无病斑的鳞片作种片,用自来水冲洗晾干后,使用75%乙醇浸泡消毒30秒钟,再用0.1%的升汞溶液浸泡10-12分钟,然后用无菌水冲洗3次后晾干,将上述晾干的鳞片接种到适宜的培养基进行培养,培养条件为：培养周期为30天,培养温度为25℃,先暗培养，待丛芽形成并生长7天后转入光培养，光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗,该阶段培养进行2次以上形成丛生芽苗；
2）将步骤1）得的丛生芽苗切割除去叶片,将余下的芽体转接到适宜培养基，进行鳞茎的诱导形成及增殖，培养条件为：培养周期为30-40天,培养温度为25℃,培养光照强度为2000-4000Lux,光周期为12h光/12h暗，得分化小鳞茎；
3）将步骤2）所得所得的分化小鳞茎切割下来,并切除叶片,将其移植到F1培养基,以F1培养基为鳞茎膨大发育培养基,进行小鳞茎的膨大生长并生根,培养条件为：培养周期为60天,培养温度为25℃, 避光全黑暗培养,所述F1培养基包含1-2倍的MS培养基、1.0-5.0g/L多效唑、0.2-0.8mg/L萘乙酸、60-120g/L蔗糖、活性炭1.0-5.0g/L和5.5-10.5g/L琼脂，pH=5.6-6.2；进行结球和生根培养150天，待籽球重量达到2-3g时，进行清洗后置于温度3-5℃下，经40天的低温春化，移至室外种植。
经本发明上述方法利用龙牙百合鳞片诱导发育制的籽球，均可达到上述检测增重要求。即可达到满足了龙牙百合产业化、规模化的生产要求，为食用龙牙百合试管苗规模化生产提供技术保障。可大幅度提高了龙牙百合种植效益。