本发明属于苹果苗木栽培
技术领域：
，尤其涉及一种苹果砧木mac9快速繁殖的方法。
背景技术：
：1956年密歇根州立大学的卡尔博士播种m1、m16、西伯利亚海棠、美国酸苹果等自然授粉种子，对实生苗进行了田间抗棉蚜和优良性状筛选，初选出56个砧木类型，定名mac系。其中mac9和m9、m26有相同的矮化程度和早结果习性，加之木质硬，作为不设置住的砧木已受到世界各地高度评价，并且能适应沙土和黏土条件，抗寒冷，较抗棉蚜。目前，我国的苹果生产模式由传统低效郁闭果园模式逐步的转变为现代化矮砧密植集约高效生产栽培模式、并由世界苹果生产大国逐步的转变为苹果产业强国。苹果苗木是苹果生产栽培的基础，苗木的质量直接影响着苹果树体的生长、开花、结果以及抗逆性、抗病能力和寿命。苗木受到病毒的侵染之后，树体正常的细胞增殖，就会受到破坏，严重的话会影响果树的生长势、果实品质和产量等正常生理机制，这成为中国苹果产业发展的隐患。今后一段时期是我国苹果大规模更新换代的关键时期，如何从苗木方面提供支持和保障便成为一个值得高度重视的问题。目前，我国矮化苹果苗木市场供不应求，限制苗木产业发展的关键在于，一方面缺乏适应性广的优良矮化砧木，另一方面对现有矮化砧木繁育技术尚未取得突破。综上所述，现有技术存在的问题是：(1)砧木外植体褐化较严重，影响成活率。(2)继代培养激素浓度配比不当导致玻璃化苗比例过高。(3)炼苗移栽的基质配比不恰当，导致苗子后期养分不足生长不良。技术实现要素：针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种苹果砧木mac9快速繁殖的方法。本发明是这样实现的，一种苹果砧木mac9快速繁殖的方法，所述苹果砧木mac9快速繁殖的方法采用培养基为ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加pvp600mg/l的培养基初代培养、采用ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l处理的继代培养、采用生根培养基1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l的生根培养、然后3/5田间土加上部2/5蛭石的炼苗移栽实现苹果砧木快速的繁殖。进一步，所述苹果砧木mac9快速繁殖的方法包括以下步骤：步骤一，以苹果砧木mac9为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培，水培为每升水含有5g蔗糖，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗；步骤二，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到聚乙烯毗咯烷酮600mg/l的培养基中进行培养；步骤三，将获得的无菌外植体接种到ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l，光照2000lux的培养基中进行继代培养，mac9的最优培养处理为m4处理；步骤四，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于2.0cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l生根培养基中进行生根培养；步骤五，当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后3/5田间土加上部2/5蛭石移栽到的营养钵中。进一步，所述步骤一中在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理30s，升汞处理7min。进一步，所述步骤二中培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，7g琼脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养。进一步，所述步骤三中m4为每升附加30g蔗糖，7g琼脂。进一步，所述步骤四中生根培养，每升加30g蔗糖，7g琼脂。进一步，所述步骤五中移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用清水喷灌一次，保持基质湿润透气待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。本发明的另一目的在于提供一种由所述苹果砧木mac9快速繁殖的方法繁殖的苹果砧木。本发明的优点及积极效果为：本发明提供的苹果砧木mac9快速繁殖的方法，通过采用培养基为ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加pvp600mg/l的培养基初代培养、采用ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l处理的继代培养、采用生根培养基1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l的生根培养、然后3/5田间土加上部2/5蛭石的炼苗移栽实现了苹果砧木快速的繁殖。本发明不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。本发明建立一种苹果砧木mac9快速繁殖的方法，对于生产优质矮化无病毒苗木，具有重要意义，市场前景广阔。本发明从建立外植体进行初代培养到炼苗移栽，体系完整；本发明保证较高的扩繁系数和生根率及移栽成活率，提供优质矮化砧木苗，因此为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。病毒病是制约苹果可持续发展的重要因素，栽培无毒苗木是目前生产上防止病毒病害的有效方法，培育无毒苗是栽培无毒苗的前提条件。本发明建立的一种苹果砧木mac9快速繁殖的方法能够提供大量组培苗，做为脱毒材料，最终获得无毒苗，对生产优质矮化无病毒苗木具有重要意义。附图说明图1是本发明实施例提供的苹果砧木mac9快速繁殖的方法流程图。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。如图1所示，本发明实施例提供的苹果砧木mac9快速繁殖的方法包括以下步骤：s101：以苹果砧木mac9为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培，水培为每升水含有5g蔗糖，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理30s，升汞处理7min；s102：用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到聚乙烯毗咯烷酮600mg/l的培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，7g琼脂，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养；s103：将获得的无菌外植体接种到ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l，光照2000lux的培养基中进行继代培养，mac9的最优培养处理为m4处理，即每升附加30g蔗糖，7g琼脂；s104：选择继代培养获得的生长健壮，高度大于2.0cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l生根培养基中进行生根培养，每升加30g蔗糖，7g琼脂；s105：当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后3/5田间土加上部2/5蛭石移栽到的营养钵中。在步骤s105中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用清水喷灌一次，保持基质湿润透气待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。本发明实施例提供的苹果砧木mac9快速繁殖的方法具体包括以下步骤：步骤一，初代培养苹果砧木mac9为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置26℃的温室内进行水培(每升水含有5g蔗糖)，每隔5d换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1.5-2.0cm时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗6-8h，用75％酒精处理8s，0.1％升汞处理7min，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3min，再用无菌水冲洗3-5次，将处理好的嫩芽接种到到ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加不同浓度处理(0、0.3、0.6、0.7、1.0g/l)的聚乙烯毗咯烷酮(pvp)的培养基中进行培养，每升培养基附加30g蔗糖，8g琼脂，每个三角瓶接个3芽，每处理15瓶，然后放置在光照16h/d、光照2000lux，26℃条件下进行培养，14d后分别调查污染率、褐化率、成活率，得出的mac9初代培养是最适宜的培养基为ms加6-ba0.6mg/l加iba0.1mg/l加pvp600mg/l(蔗糖30g/l，琼脂7g/l)：步骤二，继代培养将获得的无菌外植体接种到含有不同6-ba、琼脂、激素、光照的ms培养基中进行继代培养，每升附加30g蔗糖，8g琼脂，每瓶3株，每个处理10瓶，重复3次，mac9的最优培养处理为m4处理，即ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l(琼脂7g/l，光照2000lux)；步骤三，生根培养选择继代培养获得的生长健壮，高度大于1.5cm的植株，生长时间为25天的芽子，接种于1/2ms加不同浓度iba处理(0、0.6、0.8、1.2、1.4mg/l)的生根培养中进行生根培养，每瓶接种3个，每个处理10瓶，重复3次，得到mac9最适宜的生根培养基为1/2ms加iba1.2mg/l加褪黑素0.01mg/l(蔗糖30g/l，琼脂7g/l)；步骤四，炼苗移栽当组培苗根长度达到2cm后，移到室外遮阴炼苗10-12天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗2-4天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为0.1％多菌灵溶液中浸泡5min，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗2-3次，然后移栽到容量相同的不同基质处理(蛭石、珍珠岩、田间土、3/5田间土加上部2/5蛭石、3/5田间土加2/5珍珠岩)的营养钵中，移栽苗的管理方式为将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为0.1％多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。于14天后统计炼苗移栽成活率，得出用的3/5田间土加上部2/5蛭石炼苗移栽成活率最好。通过以下的实验和数据对本发明的应用效果作详细的说明。1、参考表1不同浓度pvp处理对外植体生长的影响；表1不同浓度pvp处理对外植体生长的影响注同列数相同字母表示差异不显著(p>0.05)，不同字母表示差异显著(p<0.05)。数据为mean±se(平均值±标准误)；下同。2、不同6-ba浓度处理对mac9继代培养的影响：表2不同6-ba浓度对mac9继代培养的影响3、不同iba浓度处理mac9生根的影响表3不同工浓度处理生根的影响4、不同炼苗基质对生根苗生长的影响：表4不同栽培基质处理对移栽苗生长的影响基质处理mac9移栽成活率蛭石76.50±5.20a珍珠岩67.50±6.30c田间土68.50±3.42b3/5田间土加2/5蛭石82.00±4.33a3/5田间土加2/5珍珠岩71.00±3.45bc5、苹果砧木mac9增殖培养基的筛选将的mac9组培苗接种在含有不同6-ba浓度激素的培养基(蔗糖浓度30g/l，琼脂浓度7g/l，ph5.8)中，观察不同浓度激素下的扩繁系数，玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。6、琼脂浓度对mac9组培苗玻璃化的影响：观察方法②的试验结果，根据组培苗的扩繁系数等综合表现，选出相对较好的继代培养基作为对照，研究琼脂浓度对组培苗玻璃化的影响。将mac9的组培苗接种含有不同的琼脂浓度(5.0、6.0、7.0g/l)，观察不同浓度琼脂下组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。7、iba对mac9组培苗玻璃化的影响：观察方法③的试验结果，根据组培苗的扩繁系数等综合表现，选出相对合适的继代培养基，并以此作对照，研究6-ba与不同浓度iba配比对玻璃化程度的影响。观察组培苗的分化系数、玻璃化程度及生长情况，每个处理30瓶，每瓶3株。8结果与分析：8.1苹果砧木mac9增殖培养基的筛选：如表5所示，m4处理培养基即ms加6-ba0.5mg/l加iba0.1mg/l中mac9组培苗扩繁系数最高为3.64，玻璃化率为32％。各个处理的玻璃化程度直接无显著差异，但都比较高。以扩繁系数为指标来筛选，则m4处理培养基是较好的增殖培养基。表5增殖培养基筛选结果统计编号培养基iba(mg/l)6-ba(mg/l)扩繁系数玻璃化程度m1ms0000m2ms0.10.32.780.31m3ms0.10.43.10.34m4ms0.10.53.640.32m5ms0.10.63.420.378.2琼脂浓度对mac9组培苗玻璃化的影响如表6所示，以处理培养基m4为对照得出，提高琼脂浓度对组培苗玻璃化有一定的抑制作用，并一定程度上提高了扩繁系数，但是差异无显著性差异。综合考虑，m4处理培养基要优于其它处理，其扩繁系数为3.64，玻璃化率为32％。表6琼脂浓度对mac9组培苗的影响8.3iba对mac9组培苗玻璃化的影响以m12处理培养基为对照，研究不同iba浓度对mac9组培苗玻璃化的影响，如表7所示，提过iba浓度可以对扩繁系数有较大影响，处理m7、m9、m10与对照有显著差异，并且提高iba浓度能够明显的降低玻璃化程度，但玻璃化程度仍比较高，综合考虑m7为较优培养基表7iba对组培苗玻璃化的影响以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页12