本发明属于农药领域，具体涉及一种含解淀粉芽孢杆菌（bacillusamyloliquefaciens）和啶酰菌胺的组合物及其在防治草莓灰霉病方面的应用。
背景技术：
草莓果实鲜红形美，柔软多汁，香味浓郁，甜酸可口，营养丰富，是目前果品市场上的高档水果之一，深受消费者的喜爱，市场前景广阔。近年来，我省各地种植面积迅速扩大，在我国多个省市广泛栽培，且种植面积呈逐年上升的趋势。为提高草莓产品的产量和品质，延长市场供应时间，目前我国大部地区均采用以大棚和日光温室为主保护地栽培模式进行种植。在这种栽培模式下，由于环境相对密闭，通风透气性差，温度、湿度适宜，及化学肥料的过度施用，草莓极易产生各种病虫害。
草莓灰霉病是草莓的主要病害之一，主要危害花器和果实，引起花器和果实腐烂，此病能迅速传播，是造成草莓烂果的主要原因，一般使草莓减产10%-30%，严重时可造成草莓减产50%以上，严重影响草莓的产量和品质。目前化学药剂仍然是防治草莓灰霉病的主要措施，由于化学药剂的多频次、多剂量的使用，导致抗药性增加、防治效果下降、环境污染及果实的农药残留等一系列问题更加突出，因此寻求一种高效安全的防治方法显得尤为重要，对草莓产业的可持续发展具有重要的意义。
解淀粉芽孢杆菌（bacillusamyloliquefaciens）属革兰阳性芽孢杆菌，是一种与枯草芽孢杆菌亲缘性很高的细菌，在自然界中分布广泛。解淀粉芽孢杆菌生长过程中可以产生一系列具有广泛地抑制真菌和细菌的活性的代谢产物，在生物防治方面具有广阔的应用前景，已逐步成为具有生物农药开发潜力的微生物。解淀粉芽孢杆菌wh1g，抑菌谱较广，对多种病原真菌和病原细菌均有很强的抑制作用，该菌株生长速度快，适应环境能力强，易于在植物表面定殖，并形成优势种群；诱导寄主产生抗病性；分泌多种抗菌物质；对多种植物病害均有较好的防效。该菌株对啶酰菌胺有天然抗性，在啶酰菌胺含量为5000ppm的na培养基中能正常生长，该菌株与2015年04月15日保藏于在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为cgmccno.10722。该菌株命名为whig，分类命名：解淀粉芽孢杆菌（bacillusamyloliquefaciens）。
啶酰菌胺属于烟酰胺类新型杀菌剂，主要通过抑制线粒体琥珀酸酯脱氢酶阻碍三羧酸循环，使氨基酸和糖缺乏、能量减少，干扰细胞的分裂和生长。该药剂可用于控制草莓灰霉病，而且与多菌灵、速克灵等药剂无交互抗药性。目前在我国草莓病害防治上应用的啶酰菌胺产品多数是单剂，仅有的少数复配剂也是与其它化学药剂进行复配，对于延缓和治理啶酰菌胺的抗药性作用有限。至今还未发现啶酰菌胺与生防菌的复配剂型用于草莓病害的防治，而本发明利用解淀粉芽胞杆菌与啶酰菌胺的组合物在防治草莓灰霉病上的应用还没有公开报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于：针对目前利用现有的杀菌剂防治草莓灰霉病时出现的一系列问题，提供一种高效、低毒、可延长药剂使用时间、降低成本、协同增效作用显著，对草莓灰霉病有较好防治作用的，且环境友好、安全的农用杀菌组合物。该组合物以解淀粉芽孢杆菌和啶酰菌胺为主要活性物质，不仅极大的减少了化学杀菌剂的使用量，降低了现有病原菌对啶酰菌胺的潜在抗药性的风险，还能发挥解淀粉芽孢杆菌wh1g有效控制草莓灰霉病的作用，弥补了解淀粉芽孢杆菌抑菌效果慢的缺点，综合了生防菌和化学杀菌剂的优点。本研究结果表明解淀粉芽孢杆菌whig与啶酰菌胺的组合对草莓灰霉病的防治具有明显的增效作用。
本发明所述的杀菌组合物可以用已知的方法加工成适合农业使用的剂型，包括可湿性粉剂、悬浮剂、水乳剂等，本发明提供了所述杀菌剂的可湿性粉剂及水悬浮剂的制备方法。
本发明所述组合物中的助剂包括湿润剂、分散剂、渗透剂、防冻剂、增稠剂、增效剂、消泡剂等各类助剂中的一种或几种，具体成分和用量根据配方要求通过简单试验确定。
本发明的目的可以通过以下措施达到:
一种含解淀粉芽孢杆菌whig与啶酰菌胺的组合物，该组合物以解淀粉芽孢杆菌whig和啶酰菌胺为活性成分，其质量比为100：1~1:100，优化为10:1~1:10，最优选为4:1~1:4。本发明所采用的解淀粉芽孢杆菌活孢子数为1亿/克~100亿/克，最优选为10亿/克~100亿/克。
本发明所述杀菌组合物中的解淀粉芽孢杆菌要先制成母粉，方法如下：首先将wh1g接入na培养基中振荡培养(180r/min,28℃)48h，80℃水浴处理15min，8000r/min离心15min，去上清液获得细菌沉淀，加入10ml过滤除菌的mgso4溶液(0.lmol/l)和1ml无菌甘油，振荡混勻后再加入lml浓度为1.5%(w/v)海藻酸钠溶液，然后将上述混合液与50g滑石粉及4gca-lignosulphate充分混合，无菌条件下室温保存。
所述组合物中解淀粉芽胞杆菌母粉的生存能力测定每隔30d,分别测定可湿性粉剂中生防菌的生存能力，方法是每次测定时，分别称取0.5克可湿性粉剂，置于10ml无菌水中，制备悬浮液，经倍比稀释后，分别涂布于na平板上，28℃培养24h，计数生长菌落，计算出单位重量可湿性粉剂中细菌的菌落形成单位。结果表明，生防菌剂中细菌的生存能力较强，室温条件下保存120d细菌的存活数量仍能达到1010cfu/g，150d能达到108cfu/g，随着时间延长，细菌数量不断下降，至180d仅能达到107cfu/g。
所述的杀菌组合物向活性成分解淀粉芽孢杆菌和啶酰菌胺中加入农药助剂和填料后即可配得可湿性粉剂和悬浮剂，其中有效成分占杀菌组合物总重量的20%~60%，助剂占杀菌组合物总重量的10%~30%,其余为填料。啶酰菌胺可以采用原药，解淀粉芽孢杆菌采用原粉，助剂可以选用湿润剂、分散剂、渗透剂、防冻剂、增稠剂、增效剂等各类助剂中的一种或几种。
当所述杀菌组合物的剂型为可湿性粉剂时，由下述质量百分含量的组分组成：
解淀粉芽胞杆菌母粉（100亿活孢子/克）5%~50%,
啶酰菌胺5%~40%,
载体30%~65%，
分散剂3%~8%,
润湿剂2%~5%，
渗透剂3%~5%
其特征是所述载体优选为白炭黑、高岭土，所述分散剂优选为木质素磺酸钠，所述润湿剂优选为十二烷基苯磺酸，所述渗透剂优选为jfc。
当所述杀菌组合物的剂型为水悬浮剂时，由下述质量百分含量的组分组成：
解淀粉芽胞杆菌母粉（100亿活孢子/克）5%~50%,
啶酰菌胺5%~45%,
分散剂2%~8%，
润湿剂2%~4%，
增稠剂0.1%~2%
增效剂2%~5%
防冻剂2%~4%
消泡剂1%~3%
余量加水至100%，
其特征是所述分散剂优选为木质素磺酸钙，润湿剂优选为十二烷基硫酸钠，增稠剂优选为黄原胶，所选防冻剂优选为乙二醇；消泡剂优选为有机硅消泡剂，水优选为自来水。
本发明的杀菌组合物用于防治草莓炭疽病、白粉病及灰霉病，在病害初步发生时进行施药，连续施用3次，间隔期为10d，以喷雾法均匀施药为宜。
本发明的组合物降低了草莓灰霉病菌对啶酰菌胺和解淀粉芽孢杆菌的潜在抗药性风险，将解淀粉芽孢杆菌与啶酰菌胺组合后，二者之间具有明显的增效作用，可以显著提高对草莓灰霉病的防治效果，同时减少了化学农药使用量，从而使该组合物可以广泛的应用于草灰霉病的防治。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐释本发明，但本发明的实质并不限于下述实施例。
实施例1：35%可湿性粉剂的制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）7
啶酰菌胺28
十二烷基硫酸钠2
木质素磺酸钠4
渗透剂jfc4
白炭黑补足至100（调ph值5~7）
实施例2：40%可湿性粉剂的制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）30
啶酰菌胺10
十二烷基硫酸钠2
木质素磺酸钠4.5
渗透剂jfc4.5
白炭黑补足至100（调ph值5~7）
实施例3：42%可湿性粉剂制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）28
啶酰菌胺14
十二烷基硫酸钠2
木质素磺酸钠4.5
渗透剂jfc4.5
白炭黑30
高岭土补足至100（调ph值5~7）
实施例4：50%可湿性粉剂制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）25
啶酰菌胺25
十二烷基硫酸钠3
木质素磺酸钠5
渗透剂jfc5
白炭黑20
高岭土补足至100（调ph值5~7）
按照实施例1、2、3、4的配方，将有效成分、助剂、填料加在一起，经气流粉碎后，在锥形混合机内搅拌30分钟，即可制得解淀粉芽孢杆菌与啶酰菌胺的杀菌可湿性粉剂。
实施例5:30%悬浮剂的制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）10
啶酰菌胺20
木质素磺酸钙5
十二烷基硫酸钠2
有机硅2
黄原胶0.3
乙二醇2
自来水补足至100
实施例6:55%悬浮剂的制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）44
啶酰菌胺11
木质素磺酸钙5
十二烷基硫酸钠2
有机硅2
黄原胶0.2
乙二醇3.5
自来水补足至100
实施例7:60%悬浮剂的制备（各组分为质量份）
解淀粉芽孢杆菌wh1g（100亿活孢子/克）15
啶酰菌胺45
木质素磺酸钙7
十二烷基硫酸钠4
有机硅2
黄原胶0.2
乙二醇3.5
自来水补足至100
按照实施例5、6、7的配方，将有效成分、分散剂、润湿剂等各组分装入带高剪切搅拌的反应釜中，粉碎混合，直到混合体均匀后将搅拌粉碎的物料通入砂磨机中，通冷却循环水进行砂磨超微粉碎，终点粒径小于3微米。即可制得解淀粉芽孢杆菌与啶酰菌胺的杀菌水悬浮剂。
实施例8用实施例1-实施例7所配置的解淀粉芽孢杆菌与啶酰菌胺的杀菌组合物防治草莓灰霉病的田间效果。
本发明试验作物为草莓，品种为：红颜；共设置实施例1-实施例7所配置的解淀粉芽孢杆菌与啶酰菌胺的杀菌组合物、100亿cfu/g解淀粉芽孢杆菌母粉、50%啶酰菌胺水分散粒剂和空白对照共10个处理，每个处理4次重复，小区面积20㎡，于病害发生初期开始第一次喷药，每亩兑水50公斤均匀喷雾，连续喷洒2次，间隔期为10d，最后一次防治后10d调查各处理草莓灰霉病的病情指数，并以对照区的病情指数计算相对防治效果，调查结果如表1。
表1解淀粉芽孢杆菌﹒啶酰菌胺对草莓灰霉病的田间小区试验的防效（%）
注：a:理论防效%=（实施例中芽孢杆菌单剂防效×所占比例＋啶酰菌胺防效×所占比例）×100
b:增效效果%=（实施例防治效果—理论防效）/理论防效×100
从表1可以看出当草莓灰霉病初见病斑时就开始用本发明的组合物进行施药，每间隔10d喷施一次，连续喷洒2次后，本发明组合物的7个制剂实施例对草莓灰霉病的防效较好，除了实施例2，防效均在85%以上，特别是实施例7防效达到93.10%，明显高于对照药剂，防效显著；本发明组合物和单剂相比，均有增效效果，特别是实施例2、3和实施例6增效效果高达20%以上，增效作用明显，可显著提高防治效果；本发明组合物对草莓生长安全，田间未发现任何不良反应，所以该组合物在生产上可以广泛的用于田间草莓灰霉病的防治。