本发明属于块菌种植技术领域,具体涉及一种块菌接种菌丸及其制备和使用方法。
背景技术：
块菌(t.ruffles)为子囊菌类块菌目(tuberales)块菌科(tuberaceae)块菌属(tuber)，是世界上最珍贵的共生食用真菌，具有奇特的香味和营养价值，因此产量有限，国际市场上价格昂贵，供不应求，其中又被誉为“黑钻石”。
为了能够提高块菌根苗培育质量和野生块菌的产量，有效保护现有资源，实现块菌持续利用，通常采用块菌菌丸接种宿主植物培育块菌菌根苗,从而开展人工栽培，也可通过野外菌塘补种的方式提高菌塘的野生块菌产量。块菌的生长必需与合适的宿主植物根系营共生生活，否则将无法形成子囊果，这就意味着人工栽培块菌离不开活体宿主植物，因而块菌人工栽培比较困难，技术含量高。
目前国外接种培育菌根苗主要采用液体菌丸和固体菌丸来接种,固体菌丸接种通常采用先培育无菌裸根苗，接种时更换营养钵，这种接种方法的缺点接种苗死亡率高，接种后有一段时间的缓苗期，影响苗木生长。液体菌丸接种不均匀,块菌孢子有多、有少，接种后形成菌根的质量不一致，甚至接种少的不能感染植株形成菌根，且液体菌种保存时间很短，一般都不超过7天。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题为：接种苗死亡率高、块菌菌种保存时间短、接种感染率不一致和使用不方便等问题。
本发明解决技术问题的技术方案为：提供一种块菌接种菌丸及其制备和使用方法。
本发明提供一种块菌接种菌丸，其组成包括：按重量份数计，块菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～20份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢杆菌1～2份。
优选的，上述块菌接种菌丸，其组成包括：按重量份数计,块菌粉末33份，石灰石粉末10份，蛭石粉23份，泥炭粉15份，em酵母菌2份，白糖5份，枯草芽孢杆菌2份。
其中，上述块菌接种菌丸中，所述的石灰石粉末、蛭石粉、泥炭粉的粒径均≤0.5mm。
其中，上述块菌接种菌丸中，所述的块菌为印度块菌、夏块菌、攀枝花块菌、波氏块菌、黑孢块菌、阔孢块菌或李玉块菌中的一种。
本发明还提供一种上述块菌接种菌丸的制备方法，包括以下步骤：
a、块菌菌种的收集和保藏
选取成熟块菌，灭菌后粉碎成直径≤0.5mm的粉末；
b、配制块菌菌丸
按块菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～15份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢杆菌1～2份称取上述原料，于1000～1200转/min搅拌混匀，采用压片机压制成重1.5～2g/粒的菌丸，干燥后进行包装，制得块菌菌丸。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤a中所述的成熟块菌是指孢子的成熟度＞95％的块菌；所述孢子的成熟度是指显微镜下成熟的孢子数占总孢子数的百分比。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤a中所述的灭菌的方法为：用70～75％的酒精浸泡2～3min。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤b中所述压制时温度≤35℃。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤b中所述的干燥为真空干燥或阴干，真空干燥温度为30～35℃，真空度0.06～0.08mpa。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤b中所述干燥后的菌丸含水量为9～12％。
本发明还提供一种上述块菌接种菌丸的使用方法，接种量为2～10粒/株，接种深度为距土表面5～10cm。
本发明的有益效果为：本发明提供一种块菌接种菌丸，可改善菌根培养基质和微生物结构，大幅度提高植物须根数量，能将感染率提高20％左右。还能缩短菌根形成的时间，采用本发明菌丸比常规菌丸形成菌根的时间缩短2个月以上。本发明的菌丸制备和使用方法简单，可为无菌苗培育接种、人工栽培的增产接种、野生块菌菌塘增产接种提供基础，值得推广使用。
具体实施方式
本发明提供一种块菌接种菌丸，其组成包括：按重量份数计，块菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～15份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢杆菌1～2份。
优选的，上述块菌接种菌丸，其组成包括：按重量份数计，块菌粉末33份，石灰石粉末10份，蛭石粉23份，泥炭粉15份，em酵母菌2份，白糖5份，枯草芽孢杆菌2份。
其中，上述块菌接种菌丸中，所述的石灰石粉末、蛭石粉、泥炭粉的粒径均≤0.5mm。
本发明选择石灰石粉末、蛭石粉、泥炭粉和em酵母菌与攀枝花块菌配合使用，石灰石粉末可以使菌种保持干燥，还能提供块菌生长的钙质，调节ph值；蛭石粉可以维持菌丸的疏松度，起填充作用，还能补充矿物质；泥炭粉含有腐殖酸，能够促进块菌孢子萌发，促进植物根系生长；em酵母菌和枯草芽孢杆菌能够改善培养基质的微生物结构，促进菌根的形成；白糖能够补充氮源，并具有粘合作用；将上述物质进行配合使用，使得块菌接种菌丸营养丰富，接种感染率高，还能有效提高须根数量。
其中，上述块菌接种菌丸中，所述的块菌为印度块菌、夏块菌、攀枝花块菌、波氏块菌、黑孢块菌、阔孢块菌或李玉块菌中的一种。
本发明还提供一种上述块菌接种菌丸的制备方法，包括以下步骤：
a、块菌菌种的收集和保藏
选取成熟块菌，灭菌后粉碎成直径≤0.5mm的粉末；
b、配制块菌菌丸
按块菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～15份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢杆菌1～2份称取原料，放置于1000～1200转/min搅拌机中搅拌1～2分钟，充分混合均匀后，再采用压片机压制成重1.5～2g/粒的菌丸或菌片，真空干燥进行包装，制得块菌菌丸。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤a中所述的成熟块菌是指孢子的成熟度＞95％的块菌；所述孢子的成熟度是指显微镜下成熟的孢子数占总孢子数的百分比。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤a中所述的灭菌的方法为：用70～75％的酒精浸泡2～3min。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤b中所述压制时温度≤35℃。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，步骤b中所述的干燥为真空干燥或阴干，真空干燥温度为30～35℃，真空度0.06～0.08mpa。
其中，上述块菌接种菌丸的制备方法中，为了使菌丸有效保藏，并保证块菌孢子的萌发能力，本发明步骤b中所述干燥后的菌丸含水量为9～12％。
本发明还提供一种上述块菌接种菌丸的使用方法，接种量为2～10粒/株，接种深度为距土表面5～10cm。
下面通过实施例对本发明的具体实施方式做进一步的解释说明，但不表示将本发明的保护范围限制在实施例所述范围内。
本发明实施例中的em酵母菌购至山西昌泰动物药业有限责任公司,执行标准为q/scy010-213；枯草芽孢杆菌购至武汉天惠生物工程有限公司，产品标准证号为q/wth05-2012；
实施例中所述的印度块菌、夏块菌、攀枝花块菌均购至攀枝花彝人块菌有限公司。
实施例中所述的传统印度块菌、传统夏块菌、传统攀枝花块菌是否指的是采用以往的方法制备的印度块菌、夏块菌和攀枝花块菌。具体的制备方法如下：
固体块菌菌种制备方法：先将块菌粉碎与灭菌蛭石或者细土混合，得到块菌菌丸，低温5℃条件下保持7天。
液体菌种制备：将块菌粉碎按照1：10的比例加入水放到搅拌机中搅拌均匀及得到液体菌种，现用现配，低温5℃条件下保持3天。
实施例1用本发明方法制备块菌接种菌丸
制备块菌接种菌丸，其组成包括：块菌粉末33份，石灰石粉末10份，蛭石粉23份，泥炭粉15份，em酵母菌2份，白糖5份，枯草芽孢杆菌2份。
上述块菌接种菌丸的制备方法操作如下：
按上述组成称取原料，粉碎成≤0.5mm的粉末，于1000转/min条件下搅拌混匀，采用压片机压制成重2g/粒的菌丸，干燥至水分含量为10％，制得块菌菌丸。
将实施例1制备得到的块菌菌丸用于块菌菌根苗培育
采用育苗盘和营养钵培育云南松、华山松、板栗、美国山核桃、麻栎、青冈、槲栎、榛子等无菌幼苗3～5个月，待有侧根长出后，选择粗细、高度一致的苗木进行接种，接种时用直径略大于菌丸直径的洁净木棒或金属棒打孔，孔深5～10cm，每株苗木打2～3孔，接种2～3个菌丸，接种完成后放置于20～25℃的育苗大棚中培养，培育1个月左右，开始形成菌根，培育6个月后，菌根感染率均在85％以上，较传统接种感染率高。详见表1。块菌菌根感染率＝感染菌根数/检测菌根数×100％。
表1本发明的菌丸接种菌根培育6个月后的效果
实施例2用本发明方法制备块菌接种菌丸
制备块菌接种菌丸，其组成包括：块菌粉末30份，石灰石粉末8份，蛭石粉20份，泥炭粉10份，em酵母菌份，白糖4份，枯草芽孢杆菌1份。
上述块菌接种菌丸的制备方法操作如下：
按上述组成称取原料，粉碎成≤0.5mm的粉末，于1100转/min条件下搅拌混匀，采用压片机压制成重2g/粒的菌丸，干燥至水分含量为10％，制得块菌菌丸。
将实施例2制备得到的块菌菌丸用于块菌人工栽培
在块菌人工栽培园，沿树冠的投影范围外沿须根较多的位置，从4个不同方位，在树冠的垂直方向进行打孔，孔深5～10cm。根据树势的大小接种2～4丸/孔，接种后覆盖表土即可。接种1次，4个月后观察得到表2所示的结果。
表2本发明的接种菌丸块菌人工栽培中的应用效果
实施例3用本发明方法制备块菌接种菌丸
制备块菌接种菌丸，其组成包括：块菌粉末35份，石灰石粉末12份，蛭石粉25份，泥炭粉20份，em酵母菌2份，白糖6份，枯草芽孢杆菌2份。
上述块菌接种菌丸的制备方法操作如下：
按上述组成称取原料，粉碎成≤0.5mm的粉末，于1200转/min条件下搅拌混匀，采用压片机压制成重2g/粒的菌丸，干燥至水分含量为10％，制得块菌菌丸。
将实施例3制备得到的块菌菌丸用于野生块菌菌塘接种
选择野外块菌产量较低的菌塘和曾产块菌现在不产的菌塘，用赤耙挖深5～10cm，选择须根发达的位置接种块菌菌丸，每个接种点4～6丸，接种一次，接种完成后覆盖表土即可。观察得到表3所示的结果。
表3本发明的接种菌丸在野生块菌促繁中的应用效果
由实施例可看出，采用本发明的块菌接种菌丸，具有较高的根苗培育感染率和成活率，适宜用在块菌根苗培育上；另外，其能增加块菌菌根数量，在人工栽培时工作效率高，菌根数量多；本发明的块菌菌丸还适用于野生菌塘的块菌接种，能使不产菌菌塘开始产菌，并提高低产菌塘的产菌量。