本发明涉及一种筛选双孢蘑菇温度敏感型菌株的方法，属于食用菌育种
技术领域：
。
背景技术：
：双孢蘑菇（agaricusbisporus），中文别名为蘑菇、洋蘑菇、白蘑菇。其含有丰富的蛋白质、多糖、维生素、核苷酸和不饱和脂肪酸，不仅营养丰富，肉质肥美，味道鲜美，而且热能低，具有很高的医疗保健作用，日益受到各国人民的喜爱。在国外，双孢蘑菇至今仍占食用菌消费的主导地位，以世界食用菌生产第二大国-美国（约占世界总产量16%）为例，双孢蘑菇占其总产量90%以上。在中国，双孢蘑菇消费市场发展迅速，鲜菇市场销售日益渐旺。随着国内外对双孢蘑菇需求的增加，双孢蘑菇的生产也从最初的农户生产向专业化、规模化和工厂化生产的模式转变。工厂化栽培双孢蘑菇已经成为世界双孢蘑菇栽培业的最重要的发展方向。在国外，从栽培原料的发酵、接种到出菇管理均采用工厂化的生产工艺。在中国，工厂化栽培双孢蘑菇也在发展壮大中。国外双孢蘑菇的种植业发展的迅速，不仅和他们的栽培工艺的先进，还和他们有适合本国工厂化生产的菌种有关。国外双孢蘑菇主要栽培品种有sylvan公司的a15，s512、s608、130和荷兰horst蘑菇试验站的u1、u3等。这些品种均适合本国的设施化栽培。在国内，双孢蘑菇的种质资源十分缺乏，给双孢蘑菇菌种改良和选育工作带来了相当大的困难。我国幅员广阔，各地自然条件差异很大，各地栽培的双孢蘑菇品种的性状也差异很大。目前，国内双孢蘑菇主要栽培品种有as2796，2000，192，浙农1号等。但是，国内双孢蘑菇的工厂化品种大部分是进口国外的，缺少真正的适合当前国内生产条件和工艺的工厂化品种。温度是影响双孢蘑菇生长的主要因素。双孢蘑菇对温度的要求分为菌丝体和子实体两个阶段。双孢蘑菇菌丝体生长发育温度范围为4-32℃，菌丝体生长阶段的适宜温度为22-27℃。双孢蘑菇子实体生长发育的温度范围是4-25℃，子实体适宜温度为16-19℃。因此，对栽培环境进行温度调控是工厂化生产双孢蘑菇的主要调控因子之一。技术实现要素：本发明针对双孢蘑菇育种周期长和国内缺乏合适的工厂化菌种等缺点，找到一种通过温度调控能够简便快速地筛选对温度敏感，菌丝形态发生显著改变的方法，并确定了调控的温度和调控的方式。为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：一种筛选双孢蘑菇温度敏感型菌株的方法，包括下列步骤：第一步：将双孢蘑菇菌种接种于pda培养基中于25℃条件下暗培养9-11天得到第一培养物；第二步：将所述第一培养物分别于4℃、32℃和25℃温度条件下暗培养40-55小时得到第二培养物、第三培养物和第四培养物；第三步：将所述第二培养物、第三培养物和第四培养物转移到培养箱中于25℃条件下培养2.5-3.5天得到第五培养物、第六培养物和第七培养物；与第七培养物的性状相比，第五培养物和第六培养物的菌丝形态和菌丝颜色发生差异时，说明该菌株为温度敏感菌株。优选的技术方案为：所述pda培养基先在121℃、0.1mpa下灭菌15min，然后在每个直径为9cm的平皿中倒入20mlpda培养基。由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点和效果：本发明的方法与以往食用菌选育菌种的方法相比，其操作简便，效果更突出，提高了选育双孢蘑菇菌种的效率。该方法只需要在传统育种和栽培实验之前，对菌丝进行高低温的处理，就可以初步判定双孢蘑菇菌株对温度的敏感度，以及此菌株对工厂化调控条件的灵敏度，为菌种的选育节省时间，提高育种效率。附图说明附图1为不同温度对菌丝形态的影响。具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步描述：实施例1-15：一种筛选双孢蘑菇温度敏感型菌株的方法1.不同双孢蘑菇菌株的培养将pda培养基以121℃，1.0mpa，灭菌15min。直径为9mm的平板中导入灭菌后的pda培养基20ml。将15个双孢蘑菇分别接种到pda培养基中，25℃在暗处培养10天。2.不同温度处理将培养10天的菌株检测其在25℃下的菌丝生长速度。然后，分别将平板再分别放在4℃，25℃和32℃进行培养48h。最后，将放置在4℃和32℃的平板再放到25℃条件下继续培养。菌丝形态和菌丝颜色的状态如下表：上表中，“+”表示菌丝气生形态相比较温度处理前增加；菌丝颜色相比较温度处理前变深；“-”表示菌丝形态或者颜色相比较温度处理前没有差异。3.数据采集和分析统计15个菌株从25℃转移到4℃和32℃后的菌丝生长速度和记录菌丝形态，并且与在25℃同时间生长的菌丝生长速度进行比较和数据分析，结果如下表：温度非敏感型菌株温度敏感型菌株8301、a-02、8302、192、2796、2000美国种、a15、f-01、32、j6、442、01-1、u3、浙农1号上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。技术特征：技术总结本发明公开了利用温度筛选适合工厂化调控的双孢蘑菇菌株的方法与应用，属于食用菌育种领域。方法包括处理的温度和温度的处理方式等步骤。与传统方法相比，此方法操作简便，显著性地缩短选育双孢蘑菇菌株的时间。当得到以下双孢蘑菇菌株，只要在实验室提前验证这些菌株对不同温度处理下，菌丝生长速度和菌丝形态，就能初步判定那些菌株对工厂化的调控是比较敏感的，可能比较适合工厂化的生产，这样为后续的栽培实验的验证节省时间和工作量。技术研发人员：张津京;黄建春;陈辉;王倩;宋晓霞受保护的技术使用者：上海市农业科学院技术研发日：2017.06.30技术公布日：2017.09.22