本发明涉及一种甜瓜花培育种分化培养基，具体涉及一种可以大大提高甜瓜花药愈伤的绿苗再生效率、为甜瓜花培育种体系建立奠定了基础的甜瓜花培育种分化培养基，属于果蔬培育种植技术领域。
背景技术：
甜瓜（melon），别名甘瓜、香瓜、穿肠瓜、果瓜以及熟瓜，在植物分类学上属于葫芦科（cucurbitaceae）甜瓜属（cucumis），是1年生蔓性草本植物，是一种深受人们喜爱的水果型蔬菜。甜瓜原产于印度、非洲热带沙漠地区，大约在北魏时期随着西瓜一同传到中国，明朝开始广泛种植。作为世界十大水果之一，一直以其风味独特著称。
成熟甜瓜果实中含有大量的碳水化合物及柠檬酸、胡萝卜素和维生素b、c等，且水分充沛，可消暑清热，生津解渴，除烦等；营养甜瓜中含有转化酶，可以将不溶性蛋白质转变成可溶性蛋白质，能帮助肾脏病人吸收营养，对肾病患者有益；甜瓜蒂所含的葫芦素b能明显增加实验性肝糖元蓄积，减轻慢性肝损伤，从而阻止肝细胞脂肪变性及抑制纤维增生；甜瓜蒂含有苦毒素，葫芦素b、e等结晶性苦味质，能刺激胃粘膜，内服适量，可致呕吐，但不为身体吸收，而无虚脱及中毒等弊端；现代研究发现，甜瓜子有驱杀蛔虫、丝虫等作用，可广泛用于治疗虫积病症。补充营养甜瓜熟肉含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、无机盐等，可补充人体所需要的能量及营养素，帮助机体恢复健康。
作为一种重要的瓜类经济作物，甜瓜为世界十大重要水果之一，栽培面积和产量较大，世界温带至热带地区广泛栽培。中国、俄罗斯、西班牙、美国、伊朗、意大利、日本等国家普遍栽培，以中国产量最高。自20世纪80年代以来，我国甜瓜的栽培面积和产量一直居于世界第一。因此，我国甜瓜生产在世界上占有重要地位，甜瓜是我国高端农业的优势作物，对农民增收与农业结构调整有着重要意义。
由于甜瓜是异花授粉植物，天然杂交率高，因此采用常规育种手段获得纯系具有周期长、难度大、遗传性状不稳定等缺点，而利用单倍体技术育种就可以避免这些问题，大大提高育种效率。单倍体育种技术是指通过诱发单性生殖使某些品种的异质配子发育成单倍体植株，再经过染色体加倍获得纯系，之后进行品种选育的一种育种方法。这种技术能够缩短育种年限、提高育种效率。但自然界中，作物自发产生单倍体植株的几率极低，不过通过一些人为手段可获得单倍体，如花药或游离小孢子培养技术。迄今为止，甜瓜中没有发现自发产生的单倍体植株，所以甜瓜花培技术就成为获得甜瓜单倍体植株的重要途径。
技术实现要素：
本发明的目的是针对当前甜瓜花培育种体系尚未建立、现有技术的培养基对甜瓜花药愈伤组织的绿苗分化效率低下的缺陷，提供了一种可以大大提高甜瓜花药愈伤的绿苗再生效率的甜瓜花培育种分化培养基，从而为甜瓜花培育种体系的建立奠定了基础。
本发明采用的技术方案如下：
一种甜瓜花培育种分化培养基，其特征在于：该培养基的配方如下：
kno31200-1600mg/l，氯化胆碱75-85mg/l，mgso4∙7h2o260-300mg/l，cacl2∙2h2o270-330mg/l，(nh4)2so490-110mg/l，nah2po4∙h2o120-140mg/l，na2-edta35.6-39mg/l，feso4∙7h2o26-29.6mg/l，mnso4∙4h2o15-17mg/l，h3bo33.2-3.8mg/l，znso4∙7h2o8.5-9.5mg/l，ki0.7-0.8mg/l，谷氨酰胺400-500mg/l，维生素b10.5-0.6mg/l，维生素b60.7-0.8mg/l，2-吗啉乙磺酸55-65mg/l，3-吡啶甲酸1.3-1.7mg/l，肌醇90-110mg/l，山梨醇27-33g/l，三十烷醇1.4-1.8mg/l，甘氨酸1.8-2.2mg/l，脯氨酸1.2-1.6mg/l，胰岛素0.5-0.7mg/l，甲基磺酸乙酯1.3-1.7mg/l，蔗糖27-33g/l，植物凝胶5.3-5.7g/l，椰乳23-27g/l，kt1.3-1.7mg/l，6-ba1.2-1.6mg/l，naa0.35-0.45mg/l，复酞核酸0.35-0.45mg/l，秋水仙素0.35-0.45mg/l，水解蛋白0.9-1.1g/l，ph5.6-6.0。
所述的培养基的组分最佳配比为：kno31400mg/l，氯化胆碱80mg/l，mgso4∙7h2o280mg/l，cacl2∙2h2o300mg/l，(nh4)2so4100mg/l，nah2po4∙h2o130mg/l，na2-edta37.8mg/l，feso4∙7h2o27.8mg/l，mnso4∙4h2o16mg/l，h3bo33.5mg/l，znso4∙7h2o9.0mg/l，ki0.75mg/l，谷氨酰胺450mg/l，维生素b10.55mg/l，维生素b60.75mg/l，2-吗啉乙磺酸60mg/l，3-吡啶甲酸1.5mg/l，肌醇100mg/l，山梨醇30g/l，三十烷醇1.6mg/l，甘氨酸2.0mg/l，脯氨酸1.4mg/l，胰岛素0.6mg/l，甲基磺酸乙酯1.5mg/l，蔗糖30g/l，植物凝胶5.5g/l，椰乳25g/l，kt1.5mg/l，6-ba1.4mg/l，naa0.4mg/l，复酞核酸0.4mg/l，秋水仙素0.4mg/l，水解蛋白1.0g/l，ph5.8。
所述的甲基磺酸乙酯的添加方法为：配制好甲基磺酸乙酯溶液后，用灭菌的0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌，待培养基高压蒸汽灭菌后冷凝到45-55℃时，取出置于超净工作台中，无菌操作，加入甲基磺酸乙酯溶液，摇匀冷凝，备用。
所述的培养基冷凝后至接种甜瓜花药愈伤的间隔时间不超过24h。
本发明提供的甜瓜花培育种分化培养基是在现有其它蔬菜的研究基础之上特异性针对甜瓜花药分化培养要求进行创造性改良的成果，本发明大大提高了甜瓜花药愈伤组织的绿苗再生效率，从而为甜瓜花培育种体系的建立奠定了基础。
本发明所提供的甜瓜花培育种分化培养基，是经过大量单因子、多因子试验所筛选的，通过大量的实验研究证明了本发明的培养基组分配比是最优组合。采用本发明所提供的培养基可以大大提高甜瓜花药愈伤组织的绿苗再生效率，因此具有较高的产业推广价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
一种甜瓜花培育种分化培养基，其特征在于：该培养基的配方如下：
kno31200-1600mg/l，氯化胆碱75-85mg/l，mgso4∙7h2o260-300mg/l，cacl2∙2h2o270-330mg/l，(nh4)2so490-110mg/l，nah2po4∙h2o120-140mg/l，na2-edta35.6-39mg/l，feso4∙7h2o26-29.6mg/l，mnso4∙4h2o15-17mg/l，h3bo33.2-3.8mg/l，znso4∙7h2o8.5-9.5mg/l，ki0.7-0.8mg/l，谷氨酰胺400-500mg/l，维生素b10.5-0.6mg/l，维生素b60.7-0.8mg/l，2-吗啉乙磺酸55-65mg/l，3-吡啶甲酸1.3-1.7mg/l，肌醇90-110mg/l，山梨醇27-33g/l，三十烷醇1.4-1.8mg/l，甘氨酸1.8-2.2mg/l，脯氨酸1.2-1.6mg/l，胰岛素0.5-0.7mg/l，甲基磺酸乙酯1.3-1.7mg/l，蔗糖27-33g/l，植物凝胶5.3-5.7g/l，椰乳23-27g/l，kt1.3-1.7mg/l，6-ba1.2-1.6mg/l，naa0.35-0.45mg/l，复酞核酸0.35-0.45mg/l，秋水仙素0.35-0.45mg/l，水解蛋白0.9-1.1g/l，ph5.6-6.0。
培养基组分最佳配比为：kno31400mg/l，氯化胆碱80mg/l，mgso4∙7h2o280mg/l，cacl2∙2h2o300mg/l，(nh4)2so4100mg/l，nah2po4∙h2o130mg/l，na2-edta37.8mg/l，feso4∙7h2o27.8mg/l，mnso4∙4h2o16mg/l，h3bo33.5mg/l，znso4∙7h2o9.0mg/l，ki0.75mg/l，谷氨酰胺450mg/l，维生素b10.55mg/l，维生素b60.75mg/l，2-吗啉乙磺酸60mg/l，3-吡啶甲酸1.5mg/l，肌醇100mg/l，山梨醇30g/l，三十烷醇1.6mg/l，甘氨酸2.0mg/l，脯氨酸1.4mg/l，胰岛素0.6mg/l，甲基磺酸乙酯1.5mg/l，蔗糖30g/l，植物凝胶5.5g/l，椰乳25g/l，kt1.5mg/l，6-ba1.4mg/l，naa0.4mg/l，复酞核酸0.4mg/l，秋水仙素0.4mg/l，水解蛋白1.0g/l，ph5.8。
按照以上组分配比配制培养基，最后添加甲基磺酸乙酯，添加方法为：配制好甲基磺酸乙酯溶液后，用灭菌的0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌，待培养基高压蒸汽灭菌后冷凝到45-55℃时，取出置于超净工作台中，无菌操作，加入甲基磺酸乙酯溶液，摇匀冷凝备用，冷凝后至接种甜瓜花药愈伤的间隔时间不超过24h。
实施例1
一种甜瓜花培育种分化培养基，按照以下配方配制：
kno31400mg/l，氯化胆碱80mg/l，mgso4∙7h2o280mg/l，cacl2∙2h2o300mg/l，(nh4)2so4100mg/l，nah2po4∙h2o130mg/l，na2-edta37.8mg/l，feso4∙7h2o27.8mg/l，mnso4∙4h2o16mg/l，h3bo33.5mg/l，znso4∙7h2o9.0mg/l，ki0.75mg/l，谷氨酰胺450mg/l，维生素b10.55mg/l，维生素b60.75mg/l，2-吗啉乙磺酸60mg/l，3-吡啶甲酸1.5mg/l，肌醇100mg/l，山梨醇30g/l，三十烷醇1.6mg/l，甘氨酸2.0mg/l，脯氨酸1.4mg/l，胰岛素0.6mg/l，甲基磺酸乙酯1.5mg/l，蔗糖30g/l，植物凝胶5.5g/l，椰乳25g/l，kt1.5mg/l，6-ba1.4mg/l，naa0.4mg/l，复酞核酸0.4mg/l，秋水仙素0.4mg/l，水解蛋白1.0g/l，ph5.8。
按照以上组分配比配制培养基，最后添加甲基磺酸乙酯，添加方法为：配制好甲基磺酸乙酯溶液后，用灭菌的0.22μm的微孔滤膜过滤灭菌，待培养基高压蒸汽灭菌后冷凝到45-55℃时，取出置于超净工作台中，无菌操作，加入甲基磺酸乙酯溶液，摇匀冷凝备用，冷凝后至接种甜瓜花药愈伤的间隔时间不超过24h。
试验甜瓜品种选为红城10号和龙甜一号，先进行花药诱导培养，待红城10号和龙甜一号花药诱导出愈伤组织、花药愈伤长至直径2.5cm后，挑选半透明、结构松散的愈伤组织转接入本发明所提供的甜瓜花培育种分化培养基上进行分化培养，分化培养的条件为：温度26℃、湿度为75%、光照强度2250lux、光周期12h光/12h暗，愈伤逐渐分化出绿苗，然后统计绿苗再生效率，绿苗再生率（%）=绿苗数/转移的愈伤块数×100%。
统计得到红城10号和龙甜一号花药愈伤在本发明的甜瓜花培育种分化培养基中分化培养所得的绿苗再生效率分别为55.2%和58.8%。
实施例2
为了比较本发明所提供的甜瓜花培育种分化培养基各组分的配比效果，我们对本发明提供的甜瓜花培育种分化培养基进行了组分改变的单因子试验，试验品种亦采用锦红一号和黄金二号，培养基配制方法、组培操作方法、培养方法均相同，绿苗分化形成后分别统计红城10号和龙甜一号的花药愈伤组织在各培养基内的绿苗再生效率。
单因子试验的试验组分分别为：2-吗啉乙磺酸、3-吡啶甲酸、三十烷醇、胰岛素、甲基磺酸乙酯、椰乳和复酞核酸，各组分因子梯度浓度设置和试验结果如下表1-7。
由表1到表7的甜瓜花培育种分化培养基组分改变的单因子试验可以发现，三十烷醇、胰岛素、甲基磺酸乙酯和椰乳配比的增加产生了不利效应；而2-吗啉乙磺酸、3-吡啶甲酸和复酞核酸的增加不能显著增加培养基的分化效果，由于这些添加物的增加会提高培养基的成本，在培养基诱导效果达最优值的最小配比量是综合生产成本后的最佳配比。由此可见，进行任何培养基组分的增加或减少均是不利的，同时说明本发明的组分配比是最优的。
实施例3
为了比较本发明所提供的甜瓜花培育种分化培养基与其它培养基对甜瓜花药愈伤分化培养的绿苗绿苗再生效率的差异，我们另外选择了2种分化培养基，试验材料亦采用红城10号和龙甜一号的花药愈伤，花药愈伤组织的获取方法、组培操作方法、培养方法均与实施例1相同，绿苗分化后分别统计红城10号和龙甜一号的花药愈伤组织在该2种培养基内的绿苗分化效率。
其它2种花药分化培养基配方为：
ms基本培养基（vb1提高到1mg/l、蔗糖3%）+0.5mg/liaa+2mg/lkt+0.5mg/lga+500mg/llh，ph为5.8（对比文件来自于陶正南《甜瓜花药培养诱导成植株》）；
ms基本培养基+1mg/l2，4-d+1mg/lkt+1mg/lba+1mg/l三十烷醇，ph为5.8（对比文件来自于袁万良等《西瓜花培试验初报》）。
培养基对比实验
将采用本发明所提供的甜瓜花培育种分化培养基对红城10号和龙甜一号花药愈伤分化培养统计所得的绿苗再生效率与前人所用的这两种培养基对红城10号和龙甜一号花药愈伤分化培养统计所得的绿苗再生效率进行比较，比较结果如下表8所示。
由上表8可以发现，本发明提供的甜瓜花培育种分化培养基对甜瓜品种红城10号和龙甜一号花药愈伤的绿苗再生效率均值高达57%，可以发现本发明的甜瓜花培育种分化培养基大大提高了甜瓜花药愈伤组织的绿苗再生效率，从而为甜瓜花培育种体系的建立奠定了基础。
本发明所提供的甜瓜花培育种分化培养基，是经过大量单因子、多因子试验所筛选的，通过大量的实验研究证明了本发明的培养基组分配比是最优组合。采用本发明所提供的培养基可以大大提高甜瓜花药愈伤组织的绿苗再生效率，因此具有较高的产业推广价值。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。